基于PERK/ATF4/CHOP信号通路研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导的ARPE-19细胞的作用机制

目的研究滋阴明目方含药血清对衣霉素诱导ARPE-19细胞的影响及其可能机制。方法构建细胞内质网应激损伤模型,将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组。对细胞进行形态观察,CCK-8检测细胞存活率,TUNEL法检测细胞凋亡,Western blot检测细胞蛋白激酶样内质网激酶(PERK)、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)蛋白的表达。结果选用浓度50μmol/L衣霉素干预ARPE-19细胞造模。观察细胞形态发现,滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组ARPE-19细胞较模型组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少。与空白组相比,模型组和空白血清组的细胞存活率下降(P<0.01),凋亡率明显上升(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP蛋白表达上调(P<0.01)。与模型组相比,滋阴明目方含药血清组细胞存活率上升(P<0.01),凋亡率明显下降(P<0.01),PERK、ATF4、CHOP蛋白表达下调(P<0.01)。结论滋阴明目方含药血清可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的凋亡,其分子机制与调控PERK-ATF4-CHOP信号通路有关。

滋阴明目方对视网膜色素变性rd10小鼠PERK-ATF4信号通路的影响

目的研究滋阴明目方对视网膜色素变性小鼠的影响及其可能机制。方法将60只rd10小鼠随机分为模型组(等量生理盐水)、维生素A(Vitamin A,VitA)组[VitA 750 IU/(kg·d)]及滋阴明目方低、中、高剂量组[滋阴明目方水煎液13.5、27、54 g/(kg·d)],12只C57BL/6小鼠作为空白组(等量生理盐水),均灌胃干预28 d。HE染色观察视网膜组织病理改变,TUNEL法检测视网膜组织凋亡,微滴式数字PCR和免疫荧光双染检测视网膜组织蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase RNA-like endoplasmic reticulum kinase,PERK)、活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)mRNA和蛋白的表达。结果与空白组比较,模型组小鼠视网膜明显萎缩、变薄,视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)细胞不可见,外核层消失,视网膜厚度减小(P<0.01),小鼠视网膜细胞数量明显减少,存在大量凋亡细胞;PERK、ATF4 mRNA和蛋白表达量升高(P<0.01)。与模型组比较,VitA组和滋阴明目方各剂量组视网膜状况改善,厚度均增加(P<0.01);细胞数量增多,凋亡细胞减少;PERK、ATF4 mRNA表达量降低(P<0.01)。与模型组比较,VitA组和滋阴明目方中、高剂量组PERK、ATF4蛋白表达量降低(P<0.01);滋阴明目方低剂量组ATF4蛋白表达量降低(P<0.01)。与滋阴明目方低剂量组比较,滋阴明目方高剂量组视网膜厚度增加(P<0.05),滋阴明目方中、高剂量组ATF4蛋白表达量及PERK mRNA表达量降低(P<0.01)。与VitA组相比,滋阴明目方高剂量组ATF4蛋白表达量降低(P<0.05),滋阴明目方中、高剂量组PERK mRNA表达量降低(P<0.01)。结论滋阴明目方可改善小鼠视网膜的形态,减少视网膜组织的凋亡,其分子机制可能与调控PERK-ATF4信号通路有关。

基于HSP72探讨通络明目方对青光眼模型大鼠RGC和视神经的保护作用

目的探讨通络明目方调控热休克蛋白72(HSP72)对青光眼模型大鼠视网膜神经节细胞(RGC)和视神经的保护作用。方法采用Shareef-Sharma法将40只大鼠建立青光眼模型,随机分为模型组(MG)和通络明目方组(TM),各20只,另将进行假手术的24只大鼠设为对照组(CG)。TM组大鼠每日通络明目方8.61 g/kg灌胃,CG、MG组大鼠每日等体积0.9%氯化钠注射液灌胃,连续给药21 d。造模后第1、7、14、21天时,使用眼压计测量大鼠眼压,采集大鼠造模对侧眼眼眶血0.5 mL,酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清HSP72水平。给药完成后,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠视网膜形态结构,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测大鼠RGC细胞数量及凋亡率,测定视网膜厚度;免疫荧光和免疫组织化学法检测RGC细胞HSP72表达。结果(1)眼压:MG组大鼠造模后1、7、14、21 d眼压均高于CG组(t_(1 d)=7.758、t_(7 d)=10.913、t_(14 d)=17.353、t_(21 d)=7.955,均P=0.000),TM组大鼠造模后7、14、21 d眼压均低于MG组(t_(7 d)=-2.604,P=0.021;t_(14 d)=-8.815,P=0.000;t_(21 d)=-4.163,P=0.001),差异均有统计学意义。其他时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)血清HSP72:MG组大鼠造模后1、7、14、21 d血清HSP72水平均高于CG组(t_(1 d)=16.450、t_(7 d)=23.576、t_(14 d)=13.206、t_(21 d)=8.934,均P=0.000),TM组大鼠造模后21 d血清HSP72水平高于MG组(t=5.936,P=0.000),差异均有统计学意义;其他时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)视网膜形态和厚度:MG组大鼠RGC出现数目减少和空泡化现象,内核层细胞开始排列紊乱、疏松,神经纤维层水肿,内核层疏松,厚度较CG组薄;而TM组大鼠视网膜RGC数目轻度减少、空泡化、内核层细胞状态与MG相比均较轻,厚度较MG组厚。(4)RGC数量和凋亡率:MG组大鼠造模后14、21 d视网膜RGC数量低于CG组(t_(14 d)=-5.886,P=0.000;t_(21 d)=-4.424,P=0.001),1、7、14、21 d RGC凋亡率高于CG组(t_(1 d)=22.165、t_(7 d)=36.737、t_(14 d)=20.285、t_(21 d)=17.176,均P=0.000);TM组大鼠造模后14、21 d视网膜RGC数量高于MG组(t_(14 d)=3.014,P=0.010;t_(21 d)=3.444,P=0.004),7、14、21 d RGC凋亡率低于MG组(t_(7 d)=-9.762、t_(14 d)=-8.639、t_(21 d)=-9.674,均P=0.000),差异均有统计学意义。其他时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(5)视网膜HSP72:CG组大鼠视网膜HSP72几乎无表达,MG、TM组HSP72随时间表达增加;相同时间点比较,TM组HSP72表达高于MG组。结论HSP72对青光眼模型大鼠RGC具有保护效应,而通络明目方可能是通过增强并维持HSP72阳性表达,以增加RGC存活率,从而保护青光眼视神经。

滋阴明目方通过Akt/FoxO1/FasL通路抑制感光细胞凋亡治疗视网膜色素变性的机制研究

目的观察滋阴明目方对视网膜色素变性(retinitis pigmentosa,RP)小鼠视网膜组织中磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-Akt)、叉头框蛋白1(forkhead box transcription factor O1,FoxO1)以及凋亡相关因子配体(Fas ligand,FasL)表达的影响,探讨滋阴明目方抑制感光细胞凋亡的机制。方法将60只rd10小鼠随机分为模型组、滋阴明目方低剂量组[10 g/(kg·d)]、滋阴明目方中剂量组[20 g/(kg·d)]、滋阴明目方高剂量组[40 g/(kg·d)]、维生素A组[5 g/(kg·d)],每组12只;选取12只C57小鼠作为空白对照组(等量生理盐水),每组连续干预28 d。通过眼底照相观察小鼠眼底形态改变;进行视网膜电图检查并记录A波和B波振幅;HE染色观察病理形态学变化并测定外核层厚度;Western blot法检测小鼠视网膜组织p-Akt、FoxO1、FasL、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白(cysteine aspartate-specific protease,Caspase)-3和Caspase-8蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组小鼠视盘苍白、变形,血管萎缩,视网膜电图的A波与B波振幅均降低(P<0.01),视网膜结构模糊,各层界限不清,感光细胞大量丧失,外核层明显变薄(P<0.01),视网膜组织中p-Akt蛋白表达水平明显降低(P<0.01),FoxO1、FasL、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与模型组比较,滋阴明目方中、高剂量组及维生素A组小鼠眼底血管较清晰,无视盘苍白表现;视网膜各层结构清晰,细胞排列相对整齐。与模型组、滋阴明目方低剂量组比较,滋阴明目方中、高剂量组的A波与B波振幅、视网膜外核层厚度均明显升高(P<0.01),维生素A组的B波振幅、视网膜外核层厚度明显升高(P<0.01);与滋阴明目方中剂量组比较,滋阴明目方高剂量组的A波与B波振幅、视网膜外核层厚度均明显升高(P<0.01),维生素A组的A波与B波振幅均明显降低(P<0.01);与滋阴明目方高剂量组比较,维生素A组的A波与B波振幅、视网膜外核层厚度均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,滋阴明目方低、中、高剂量组和维生素A组p-Akt蛋白表达水平明显升高(P<0.01),FoxO1、FasL和Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05,P<0.01),滋阴明目方中、高剂量组Caspase-8蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与滋阴明目方低剂量组比较,滋阴明目方高剂量组和维生素A组p-Akt蛋白表达水平明显升高(P<0.01),滋阴明目方中、高剂量组FoxO1、FasL、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。与滋阴明目方中剂量组比较,滋阴明目方高剂量组和维生素A组p-Akt蛋白表达水平明显升高(P<0.01),滋阴明目方高剂量组FoxO1、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显降低(P<0.01),维生素A组FoxO1、FasL、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。与滋阴明目方高剂量组比较,维生素A组p-Akt蛋白表达水平明显降低(P<0.01),FoxO1、FasL、Caspase-3和Caspase-8蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论滋阴明目方可能通过调控Akt/FoxO1/FasL通路,增强p-Akt表达,抑制FoxO1及下游基因FasL、Caspase-3和Caspase-8的蛋白表达,从而减少rd10小鼠视网膜细胞的凋亡,保护视网膜结构和功能,延缓RP的进展。

增视明目方联合低浓度阿托品治疗儿童假性近视的临床观察

分析对于儿童假性近视的治疗来说,采用增视明目方联合低浓度阿托品治疗能够获得的效果。方法 筛选出共90例在2022年1月-2023年12月间的假性近视儿童作为对象实施研究,分组方法为随机数字表法,组内患者数量分别是45例。通过对各项临床指标进行对比和分析,明确不同治疗方法的应用效果。结果 对比后可知,观察组的治疗总有效率显著高于对照组,不良反应发生率低于对照组,差异均体现出统计学意义(P<0.05)。干预前,两组的中医证候积分和视力检查结果对比无统计学意义(P>0.05),干预后,观察组的积分低于对照组,视力检查结果好于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 增视明目方联合低浓度阿托品应用效果显著,能够获得较好的治疗效果。

疏肝健脾明目方超声雾化联合睑板腺按摩治疗老年睑板腺功能障碍临床观察

目的:观察疏肝健脾明目方超声雾化联合睑板腺按摩综合疗法对老年睑板腺功能障碍(MGD)的临床疗效。方法:纳入老年MGD患者109例,随机分为对照组(n=55)和试验组(n=54),对照组采用灭菌注射用水进行超声雾化,试验组采用疏肝健脾明目方汤剂超声雾化,两组均配合睑板腺按摩治疗。于治疗前和治疗4周后,观察两组患者的主观症状、睑缘异常情况及睑板腺分泌物性状并评分,获取两组患者非侵入泪河高度(NITMH)、非侵入泪膜破裂时间(NITBUT)及睑板腺缺失程度,进行疗效评估。结果:两组患者治疗后主观症状总分、睑板腺分泌物性状评分较治疗前降低(均P<0.05),且试验组低于对照组(均P<0.05);治疗后,试验组患者NITBUT较治疗前明显延长(P<0.05),且试验组NITBUT明显长于对照组(P<0.05);对照组治疗后眼磨、分泌物增多和黏腻感症状评分明显低于治疗前(均P<0.05),而试验组治疗后干涩、眼痛、眼磨、异物感、分泌物增多和黏腻感症状评分明显低于治疗前(均P<0.05)。结论:疏肝健脾明目方超声雾化联合睑板腺按摩治疗可有效缓解老年MGD患者的主观症状,改善睑板腺分泌物性状,延长泪膜破裂时间,恢复泪膜稳态。

滋阴明目方结合中医灸法促进玻璃体切割术患者康复效果观察

目的观察滋阴明目方结合中医灸法促进玻璃体切割术患者康复效果。方法共纳入增生型糖尿病性视网膜病变患者97例(2020年2月—2021年12月收治),将患者以随机数字表法分成两组(对照组与观察组),对照组48例患者均行玻璃体切割术干预及常规术后干预,观察组49例患者在对照组干预基础上采取滋阴明目方结合中医灸法干预,数据观察:临床干预有效率、术后并发症发生率、干预前后中医证候积分变化及眼动脉血流动力学指标变化、术后患者生活质量评分(SF-36量表)及干预满意度评分、安全性情况。结果观察组患者有效率为95.92%(47/49),对照组患者有效率为81.25%(39/48),观察组有效率更高,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,观察组患者术后总并发症率更低,差异有统计学意义(P<0.05);干预前,两组患者中医证候积分、眼动脉舒张末期血流速度(Edv)与收缩期峰值血流速度(Psv)、平均血流速度(Vm)、搏动指数(PI)及阻力指数(RI)等眼动脉血流指标比较,差异无统计学意义(P>0.05),干预后各组患者中医证候积分、Edv、Psv、Vm、PI、RI等眼动脉血流指标均改善,观察组患者干预后中医证候积分、Edv、Psv、Vm、PI、RI等眼动脉血流指标均优于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,观察组患者术后生活质量评分及干预满意度评分均更佳,差异有统计学意义(P<0.05);两组患者血尿常规、血压及血糖、肝肾功能等检查均正常,无不良反应。结论滋阴明目方结合中医灸法可较好促进玻璃体切割术患者康复,患者干预效果提升,症状好转,生活质量改善,患者十分认可,且安全可靠,值得应用。

增视明目方联合低浓度阿托品治疗儿童假性近视的临床观察

目的观察增视明目方联合低浓度阿托品治疗儿童假性近视的疗效。方法选取2021年12月至2022年12月于湖南中医药大学第一附属医院眼科门诊收治的假性近视儿童患者100例作为研究对象,采用随机数字表法分为干预组和对照组,每组50例。对照组患儿予以一般生活干预及0.01%低浓度阿托品滴眼液滴眼,干预组患儿在对照组基础上予以增视明目方口服,在治疗前后,分别采用国际E视力表、检影验光等检测两组患儿裸眼视力、睫状肌麻痹前后屈光度,检测两组患儿眼轴长度、眼压,评估治疗效果。结果治疗3个月后,干预组裸眼视力为(0.89±0.32),显著高于对照组的(0.81±0.30)(t=10.135,P<0.001),干预组治疗后屈光度(睫状肌麻痹后)为(–0.24±0.12)D,显著低于对照组的(–0.27±0.09)D(t=10.526,P<0.001),干预组治疗后眼轴长度为(23.02±0.12)mm,显著低于对照组的(23.34±0.45)mm(t=7.236,P<0.05);干预组总有效率为92.00%,高于对照组的86.00%(χ^(2)=18.422,P<0.05)。结论增视明目方联合低浓度阿托品可对假性近视眼儿童的裸眼视力等有所改善,具有良好的防治效果,值得临床推广应用。

清肝明目方对急性葡萄膜炎患者细胞因子mRNA表达的干预作用

目的研究清肝明目方对急性葡萄膜炎患者细胞因子mRNA表达的干预作用。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测技术在使用清肝明目方干预治疗前后,检测急性葡萄膜炎患者外周血中白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)、转化生长因子β(transforminggrowthfactorβ,TGF-β)和mRNA的表达强度。结果葡萄膜炎急性发作期患者外周血中IL-2mRNA表达较正常人增高,而TGF-βmRNA降低;经清肝明目方干预治疗后患者IL-2的mRNA表达水平降低,TGF-βmRNA表达升高,其中TGF-βmRNA表达的升高与单纯使用激素组比较差异有显著性意义。结论清肝明目方对急性葡萄膜炎患者细胞因子mRNA表达有一定干预作用。并具有保持激素减量后病情稳定,减少复发的作用。

养阴通络明目方治疗单纯型糖尿病视网膜病变40例临床观察

目的:观察养阴通络明目方治疗单纯型糖尿病视网膜病变(DR)的临床疗效。方法:将78例患者随机分为观察组40例73眼和对照组各38例71眼。对照组采用羟苯磺酸钙胶囊治疗,每次0.5 g;观察组采用养阴通络明目方,每天1剂。2组疗程均为12周。观察治疗前后视力和眼底,检验治疗前后血液流变学指标。结果:总有效率观察组82.2%,对照组66.2%,2组比较,差异有显著性意义(P<0.05)。2组治疗后视力及眼底检查评分均较治疗前上升(P<0.01),观察组视力及眼底检查评分均高于对照组(P<0.01);2组治疗后全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原和红细胞沉降率等指标均治疗前改善(P<0.01),观察组的改善优于对照组(P<0.01)。结论:养阴通络明目方改善单纯型DR患者视力,改善眼底,改善血液循环,临床疗效优于常规西药。

温阳固本明目方治疗葡萄膜炎黄斑水肿临床研究

目的观察温阳固本明目方治疗脾肾阳虚型葡萄膜炎黄斑水肿(UME)的临床疗效。方法将60例脾肾阳虚型UME患者按照随机数字表法分为治疗组30例(30只眼)和对照组30例(30只眼),两组基础治疗均给予曲安奈德注射液(TA)40 mg球旁注射1次,治疗组在基础治疗上给予温阳固本明目方口服治疗,疗程均为1个月,随访3个月。观察治疗1个月后的视力、视网膜中央厚度(CRT)及黄斑水肿复发率的情况。结果(1)有效率:治疗1个月后,治疗组(96.67%)优于对照组(66.67%),差异具有统计学意义(c2=7.124,P=0.007)。(2)BCVA:治疗1个月后,治疗组BCVA明显低于治疗前,差异有统计学意义(t=3.532,P=0.001);而对照组BCVA治疗前后比较,差异无统计学意义(t=4.436,P=0.126)。2组间比较,差别无统计学意义(t=1.781,P=0.080)。随访3个月,治疗组和对照组BCVA均低于治疗前,差异均有统计学意义(t治疗组=4.130,P=0.000;t对照组=2.090,P=0.041)。2组间比较,治疗组BCVA为(0.30±0.21),低于对照组(0.42±0.18),差别有统计学意义(t=2.376,P=0.021)。(3)CRT:治疗1个月,2组治疗前后比较,t治疗组=8.387,t对照组=4.436,均P=0.000。2组间比较,治疗组CRT为(254.50±36.05)μm,低于对照组(322.77±70.82)μm,t=4.705,P=0.000,差别均有统计学意义。随访3个月,2组治疗前后比较,t治疗组=11.027,t对照组=6.444,均P=0.000。2组间比较,治疗组CRT为(258.07±33.52)μm,低于对照组(310.67±42.28)μm,t=5.340,P=0.000,差别均有统计学意义。(4)黄斑水肿复发率:随访3个月,治疗组(6.67%)复发率低于对照组(30.00%),差异有统计学意义(c2=5.454,P=0.020)。结论口服温阳固本明目方联合曲安奈德球旁注射治疗脾肾阳虚型葡萄膜炎黄斑水肿(UME)患者,视力、黄斑水肿均有改善,且优于对照组。

消渴明目方治疗糖尿病性干眼症效果观察

目的观察消渴明目方对糖尿病性干眼症患者临床症状和泪液中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达水平的影响。方法纳入该院2018年7月—2019年7月96例糖尿病性干眼症患者(192只眼)进行研究,采用随机数字表法将受试者分为观察组、对照组各48例(96只眼),对照组在糖尿病治疗的基础上予以羧甲基纤维素钠滴眼,观察组在对照组的基础上辅以消渴明目方口服。比较两组患者治疗4周后临床疗效及治疗前、治疗4周后症状积分,临床指标[基础泪液分泌量(SIT)、泪膜破裂时间(BUT)、角膜荧光染色(FL)、角膜知觉],泪液生化指标[MMP-9、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平变化。结果治疗4周后,观察组治疗总有效率高于对照组(P<0.05);两组症状积分均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P<0.05);两组SIT、BUT、FL、角膜知觉评分均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P<0.05);两组泪液MMP-9、TNF-α均较治疗前降低,且观察组低于对照组(P<0.05)。结论消渴明目方治疗糖尿病性干眼症疗效确切,可缓解炎性刺激,改善临床症状。

明目方对准分子激光手术并发症的疗效

目的:探究对接受准分子激光手术治疗且术后出现干眼症并发症患者应用明目方治疗的临床疗效。方法:选择2017年5月至2018年5月在汕头市博德眼科医院接受准分子激光手术治疗且术后出现干眼症并发症患者186例作为临床研究对象,按照投掷硬币的方式将其随机平均分为对照组、观察组两组,各93例。对照组患者应用常规西医治疗,观察组患者在对照组基础上联合明目方治疗,比较所有患者治疗后的临床疗效。结果:治疗后,观察组患者术后1周以及术后1个月的干眼症状评分、角膜荧光素钠染色评分显著低于对照组患者;观察组患者术后1周以及术后1个月的泪膜破裂时间(BUT)测定显著高于对照组患者,差异均具有统计学意义(P <0.05)。结论:对接受准分子激光手术治疗且术后出现干眼症并发症患者应用明目方治疗,可有效延长泪膜破裂时间,改善干眼症状,提高临床治疗效果。

滋阴明目方在糖尿病视网膜病变患者中的应用

目的探讨滋阴明目方在糖尿病视网膜病变患者中的应用效果。方法选取2018年1月至2019年6月我院收治的糖尿病视网膜病变患者86例为研究对象,将其随机等分为对照组和观察组。两组根据病情均给予血糖控制药物,对照组给予羟苯磺酸钙胶囊,观察组给予滋阴明目方汤剂,观察并比较两组患者的疗效、生活质量评分。结果加服滋阴明目方汤剂后,观察组疗效优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);观察组CLVQOL评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论滋阴明目方能够明显改善糖尿病视网膜病变患者生活质量,提高诊疗效果,对促进疾病康复进程具有积极意义。

滋阴明目方调控GRP78/IRE1/ATF6通路改善视网膜色素变性的体外研究

目的探讨滋阴明目方改善视网膜色素变性的作用机制。方法将20只SD大鼠按随机数字表法分为空白血清组和滋阴明目方含药血清组,每组10只。滋阴明目方含药血清组大鼠灌胃滋阴明目方(46.875 g/kg),空白血清组大鼠灌胃蒸馏水。制备滋阴明目方含药血清及空白血清,采用液质联用技术分析滋阴明目方含药血清的化学成分。采用衣霉素干预人视网膜色素上皮(ARPE-19)细胞构建内质网应激损伤模型。CCK-8法筛选滋阴明目方含药血清最优体积分数。将ARPE-19细胞分为空白组、模型组、空白血清组、滋阴明目方含药血清组、牛磺熊去氧胆酸组,分别进行干预。干预24 h后,采用多时间动态细胞功能分析系统对细胞进行形态观察,CCK-8法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC/PI法检测各组细胞凋亡率,蛋白质印迹法和微滴式数字PCR法检测各组细胞葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)的蛋白及mRNA表达。结果液质联用分析得到滋阴明目方含药血清中包含熊果苷、水杨酸、木犀草素、丹酚酸A、刺桐碱、牛磺酸、檞皮素、麦芽酚、黄芩苷、丹参素等主要化学成分。与模型组比较,滋阴明目方含药血清组细胞数量增多,生长较均匀,漂浮的死亡ARPE-19细胞及碎片减少;滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组的细胞存活率均升高,细胞凋亡率均下降(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组GRP78、IRE1、ATF6蛋白表达降低,牛磺熊去氧胆酸组IRE1、ATF6蛋白表达降低(均P<0.05);滋阴明目方含药血清组和牛磺熊去氧胆酸组GRP78、IRE1、ATF6 mRNA表达降低(均P<0.05)。结论滋阴明目方可以减少ARPE-19细胞内质网应激损伤模型的细胞凋亡,其分子机制可能与下调GRP78、IRE1、ATF6的表达,抑制细胞内质网应激反应有关。

滋阴明目方对视网膜色素变性模型小鼠视网膜组织凋亡及内质网应激的影响

目的探讨滋阴明目方治疗视网膜色素变性的可能机制。方法将60只rd10小鼠采用随机数字表法分为模型组、维生素A组和滋阴明目方低、中、高剂量组,每组12只;另将12只C57BL/6小鼠作为空白组。滋阴明目方低、中、高剂量组小鼠分别给予滋阴明目方13.5、27.0、54.0 g/(kg·d)灌胃,维生素A组小鼠给予维生素A软胶囊750 IU/(kg·d)灌胃,空白组和模型组小鼠给予生理盐水13.5 ml/(kg·d)灌胃。各组均每天灌胃1次,共28天。运用眼底照相、光学相干断层扫描检测小鼠眼底、视网膜形态,TUNEL法检测小鼠视网膜组织细胞凋亡情况,微滴式数字PCR和免疫荧光双染检测小鼠视网膜组织葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、1型内质网转膜蛋白激酶(IRE1)、活化转录因子6(ATF6)、C/EBP同源蛋白(CHOP)mRNA和蛋白表达水平。结果模型组小鼠视盘色蜡黄,眼底萎缩样改变,可见大片色素沉着,视网膜血管变细,可见大量血管白鞘,视网膜细胞核排列紊乱,可见大量凋亡细胞;滋阴明目方各剂量组和维生素A组小鼠眼底状况较模型组均有不同程度改善,凋亡细胞减少,其中以滋阴明目方中、高剂量组改善较显著。与空白组比较,模型组小鼠视网膜厚度减少,GRP78、IRE1、ATF6、CHOP mRNA及蛋白表达均升高(P<0.01)。与模型组比较,维生素A组和滋阴明目方中、高剂量组视网膜厚度均增加,GRP78、IRE1、ATF6mRNA和蛋白表达均降低;滋阴明目方低、中、高剂量组CHOP mRNA和蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01)。与维生素A组和滋阴明目方低剂量组比较,滋阴明目方高剂量组视网膜厚度增加(P<0.01)。与维生素A组比较,滋阴明目方中、高剂量组GRP78、ATF6、IRE1、CHOP mRNA表达降低,GRP78、CHOP蛋白表达降低(P<0.05或P<0.01)。与滋阴明目方低剂量组比较,滋阴明目方中、高剂量组CHOP蛋白表达降低(P<0.01)。结论滋阴明目方可以通过抑制内质网应激反应以减少视网膜组织的细胞凋亡,进而延缓视网膜病变进展,保护视功能,且具有剂量依赖性。

明目止痒熏洗方调控NLRP3-NF-κB通路治疗免疫性结膜炎的机制研究

目的:探讨明目止痒熏洗方通过调控NLRP3-NF-κB通路治疗免疫性结膜炎的机制。方法:(1)选取免疫性结膜炎患者100例,采用开放标签法分为两组:明目止痒熏洗方组(中药组,n=50),0.1%氟米龙组(西药组,n=50),比较治疗前后两组临床指征变化,同时采集免疫性结膜炎患者泪液,采用微量样本多指标流式蛋白定量技术(CBA)测量NLRP3等炎症因子及TGF-β等抗炎因子蛋白表达,比较两组治疗效果。(2)取7周龄SPF级Balb/c雄性小鼠40只(共80只眼),随机分为4组:空白组、模型组(免疫性结膜炎模型)、中药组(明目止痒熏洗方)、西药组(0.1%氟米龙组);采用CBA技术对小鼠治疗前后泪液、血清中NLRP3等炎症因子及TGF-β等抗炎因子的表达进行测量,比较各组异同。结果:(1)中药组能够显著改善免疫性结膜炎患者临床指征,与西药组相比差异有显著性(n=50,P<0.01),同时中药组能够显著降低患者泪液中NLRP3等炎症因子表达,并促进TGF-β等抗炎因子释放,与西药组相比差异显著(n=50,P<0.01)。(2)动物实验进一步交叉验证了这一结论,研究结果表明,中药组能够显著降低小鼠泪液、血清中NLRP3等炎症因子表达并促进TGF-β等抗炎因子释放,与西药组相比差异显著,(n=20,P<0.01)。结论:明目止痒方独特的熏蒸与清洗相结合模式能够对眼表分泌物进行及时的消炎、抗过敏处理,进而改善眼部的病理状态,极大地提高了治疗效果,降低了复发率。

明目翳障方中药熏药治疗对细菌性角膜炎的临床护理观察

目的:探讨明目翳障方中药熏药治疗细菌性角膜炎的效果。方法:采用随机单盲法将2019年10月—2022年1月诊治的细菌性角膜炎患者80例分为对照组和观察组,每组40例。对照组应用常规西医疗法,观察组在对照组基础上应用明目翳障方中药熏药治疗。对比两组治疗总有效率、不良反应发生率、舒适度(GCQ)及依从性评分情况。结果:观察组治疗总有效率、GCQ评分、治疗依从性评分均高于对照组,不良反应发生率低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:应用明目翳障方中药熏药治疗细菌性角膜炎具有显著效果,能提高患者治疗期间的舒适度,对提升疗效有积极作用,且应用安全性较高。

菊花明目方提取与干燥工艺及抗氧化活性研究

目的优化菊花明目方提取、干燥工艺,研究其提取物体外抗氧化活性。方法以绿原酸、木犀草苷转移率,出膏率为指标,在单因素试验的基础上结合正交试验优化醇提工艺;比较不同的干燥方法,通过吸湿曲线考察不同辅料对真空干燥效果的影响;并以抗坏血酸(Vc)为阳性对照,采用ABTS、DPPH法对菊花明目方提取物体外抗氧化活性进行了研究。结果最佳提取工艺为用15倍量体积分数70%的乙醇,提取2次,每次提取1.5 h,绿原酸与木犀草苷的转移率分别为97.52%、93.64%,浸膏收得率为36.18%;选择D-甘露糖醇辅助醇提物进行真空干燥;抗氧化活性研究表明,菊花明目方提取物对DPPH自由基、ABTS自由基清除率分别可达(99.75±0.30)%、(44.65±0.13)%。结论优选的提取、干燥工艺稳定,重现性良好。菊花明目方提取物具有良好的抗氧化作用。

明目神验方明刊孤本说考辨

重梓于明·弘治年间的《明目神验方》,我国现已罕见其传本,有学者因此提出该书"在国内失传已久",其日藏原版已是"明栞孤本"。事实上该书的残卷和树德堂、存德堂、郑銶三家(下分别简称树本、存本和郑本)复刻的与《明目神验方》内容相同的明刊异名书《明目良方》并未亡佚。本文在考辨《明目神验方》版本流转情况及书名由来基础上,将其与《明目良方》做了全面比较,分析两书的主要差异,并据以明确提出二者的确存在异名同书关系的看法,文中同时根据文献资料和古今学者见解,列举了该书还不足以称为孤本的理由。文章认为:鉴于《明目神验方》残卷和已知的《明目良方》三种明刊版本现今都还留存于世的确凿事实,故《明目神验方》"在国内失传已久"、日藏原版已成"明栞孤本"的观点还难以成立。