明胶/白芨胶-三七多孔材料对糖尿病溃疡大鼠创面修复及β-catenin、GSK-3β、RSPO-3表达的影响

目的研究自制明胶/白芨胶-三七多孔材料对糖尿病溃疡大鼠模型创面愈合的影响,探讨其促进慢性溃疡愈合的机制。方法将60只高糖高脂喂养4周后SPF级SD雄性大鼠随机分为明胶/白芨胶-三七组、明胶/白芨胶组、凡士林组和空白组,每组15只。各组大鼠均采用磁石在背部脊柱两侧制作直径为2cm大小的全层皮肤缺损模型,分别用明胶/白芨胶-三七多孔材料、明胶/白芨胶多孔材料、凡士林敷纱和无菌纱布覆盖创面,无菌敷料和绷带固定,每天换药1次,单笼饲养防止互舔。分别于致伤后第3天和第7天取材(每组每次各5只),光学显微镜下观察大鼠背部组织细胞生长分化和创面组织中毛细血管生长情况,并用Westernblot法检测各组创面组织中β-连环素(β-catenin)、糖原合成激酶-3β(GSK-3β)、R-脊椎蛋白3(RSPO-3)表达情况。结果造模第3天,4组创面均可见增生的毛细血管,其中明胶/白芨胶-三七组最多,明胶/白芨胶组次之;造模第7天,明胶/白芨胶-三七组、明胶/白芨胶组皮肤结构基本恢复正常,凡士林组和空白组皮肤结构与正常皮肤结构差异大,新生的毛细血管亦较少。造模第3天、第7天,明胶/白芨胶-三七组β-catenin、RSPO-3蛋白表达水平均明显高于其他组(P均<0.05),GSK-3β蛋白表达水平均明显低于其他组(P均<0.05)。结论明胶/白芨胶-三七多孔材料可明显促进糖尿病溃疡大鼠创面愈合,其机制可能与上调Wnt/β-catenin通路中β-catenin、RSPO-3表达,下调GSK-3β蛋白表达相关。

明胶-白芨胶/丹参多孔材料的理化性质研究

目的评价明胶-白芨胶/丹参多孔材料作为组织工程皮肤支架的理化性质。方法以明胶和白芨胶为基质材料,复合丹参提取液制备多孔材料。参照ISO10993-1标准,观察材料性状、吸水性和体外降解性,并采用急性毒性试验、热原试验和溶血试验,评价材料的理化性质。结果实验材料具有较好的韧性、吸水性及可降解性。材料浸提液注入小鼠腹腔未引起急性毒性反应,注入家兔耳缘静脉内未引起发热反应,材料浸提液溶血率为2.59%,符合规定。结论明胶-白芨胶/丹参多孔材料具有良好的理化性质,具备成为组织工程皮肤支架的条件。

明胶/白芨胶-微米三七海绵材料对创面愈合影响的实验研究

目的将微米三七赋以新型复合材料载体,制作出一种新型止血材料,并通过理化试验初步评估其性能及生物相容性。研究该材料对大鼠背部创伤模型愈合的影响,探讨其促进创面愈合的机制。方法应用高能球磨法制备超微米级的三七粉,与明胶、白芨胶按一定比例通过冷冻干燥法制备出可降解的复合性海绵。经过常规理化分析及溶血率测定,证实具有良好的生物相容性。选取SPF级健康SD雄性大鼠60只,将其随机分为空白对照组(A组)、明胶海绵组(B组)、明胶/白芨胶海绵材料组(C组)和明胶/白芨胶-微米三七海绵材料组(D组),各15只。先制备全层皮肤缺损的大鼠动物模型,再分别用无菌纱布、明胶海绵、明胶/白芨胶海绵材料(不载有微米三七)、明胶/白芨胶-微米三七海绵材料覆盖创面,并分别于术后第3、7、14天测量伤口面积并取材(每组每次各取5只),计算各组的创面愈合速率,并用免疫组织化学染色(SABC法)检测各组干预措施对创面组织VEGF(血管内皮生长因子)的表达情况。结果明胶/白芨胶-微米三七海绵材料的理化性能符合创面敷料基本要求,具有组织相容性;各组在术后第3、7天的创面愈合速率差异均有统计学意义(P<0.05),在第14天,各组间比较差异无统计学意义(P>0.05);各组各时间点VEGF的阳性表达差异均有统计学意义(P<0.05),其中材料治疗组创面肉芽组织中VEGF阳性表达显著性升高。结论明胶/白芨胶-微米三七海绵可作为一种新型创面止血敷料,它具有良好的组织相容性、制备工艺简便、成本低等特点。通过动物模型实验初步证实该材料可促进创面的愈合,其作用机理可能与促进创面VEGF的高表达相关。

明胶-白芨胶/丹参多孔材料与大鼠组织相容性研究

目的评价明胶-白芨胶/丹参多孔材料的组织相容性。方法以明胶和白芨胶为基质材料,复合丹参提取液,制备多孔材料及其浸提液。参照ISO10993-1标准,浸提液与L929细胞共同培养,观察材料细胞毒性。通过试验和皮下植入试验,评价此材料的组织相容性。结果实验材料与L929细胞共同培养时,细胞生长良好,未见毒性反应;材料植入大鼠皮下,于术后第3天、1、2、3、4、6、8周取材观察。材料在体内约8周内完全降解,无明显炎症和异物排斥反应,符合规定。结论明胶-白芨胶/丹参多孔材料与大鼠组织具有良好的组织相容性,具备成为组织工程皮肤支架的条件。

明胶白芨胶/纳米血竭多孔材料对大鼠创面组织血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的:探讨明胶白芨胶/纳米血竭多孔材料对大鼠创面组织血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响。方法:选用沉淀法制备血竭纳米混悬液,应用冷冻干燥法制备明胶白芨胶/纳米血竭多孔材料,制作大鼠背部全层皮肤缺损动物模型,分为材料治疗组、空白对照组和材料基质对照组,分别用明胶/白芨胶纳米血竭多孔材料、无菌纱布(用注射用水浸湿)、明胶/白芨胶多孔材料(不含纳米血竭)覆盖创面,于致伤后7d取材,免疫组织化学染色(SABC法)检测明胶/白芨胶载药多孔材料对创面组织VEGF的表达。结果:明胶/白芨胶血竭多孔材料组大鼠皮肤VEGF免疫组化染色细胞平均吸光度值较无菌纱布组及明胶/白芨胶多孔材料组高(p<0.01,p<0.05)。结论:明胶/白芨胶血竭多孔材料能促进创面肉芽组织及毛细血管生长,能促进创面组织VEGF的高表达。

明胶/白芨胶载药多孔材料的体外抑菌试验

目的:观察明胶/白芨胶载药多孔材料的体外抑菌作用。方法:用灭菌后明胶/白芨胶载药多孔材料和培养液制备浸提液,再用无菌蒸馏水稀释成1%、0.5%、0.25%、0.125%等4种浓度。用琼脂扩散纸片法对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等菌种做抑菌试验。结果:明胶/白芨胶载药多孔材料对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌均具有抑制作用,不同浓度的明胶/白芨胶载药多孔材料的抑菌作用不同。高浓度明胶/白芨胶载药多孔材料抑菌比低浓度明胶/白芨胶载药多孔材料的抑菌作用要强。明胶/白芨胶载药多孔材料浓度为0.125%时即可起到一定的抑菌作用。结论:明胶/白芨胶载药多孔材料具有较好的抑菌作用。

明胶-白芨胶／丹参多孔材料的生物相容性

目的观察明胶．白芨胶／丹参多孔材料的生物相容性。方法小鼠腹腔注射材料浸提液，观察其急性毒性反应；家兔耳缘静脉注射浸提液，观察其发热反应；分光光度法分析0．02g/ml浓度浸提液溶血率；噻唑蓝（MTr）比色法观察3种浓度（0．10、0．02、0．01g／ml）浸提液对L929细胞生长的影响；材料植入SD大鼠皮下，分别于第1、2、4、8周取出，评价材料组织相容性。结果浸提液腹腔注射未引起小鼠急性毒性反应；注入家兔耳缘静脉内未引起发热反应；浸提液溶血率为2．59％，符合规定；3种浓度浸提液在1d时RGR分别为102．8、101．2、100．5，3d时RGR分别为104．5、100．6、103．4，7d时RGR分别为109．7、104．6、106．7；材料在体内约8周完全降解，未见异常反应。结论明胶-白芨胶／丹参多孔材料无毒性，无热源性，无溶血性及细胞毒性，具有良好的生物相容性。

明胶-白芨胶/丹参多孔材料复合大鼠真皮成纤维细胞构建组织工程真皮的实验研究

目的:探讨明胶-白芨胶/丹参多孔材料复合大鼠真皮成纤维细胞制成组织工程真皮。方法:制备明胶-白芨胶/丹参多孔材料及其浸提液,与L-929细胞共同培养,观察浸提液与L-929细胞相容性。提取大鼠真皮层中成纤维细胞,与材料复合构建组织工程真皮。复合组织采用苏木精-伊红染色及电镜下观察结合效果。结果:L-929细胞在浸提液中生长情况良好。大鼠真皮成纤维细胞与材料共同培养2周,苏木精-伊红染色及电镜观察,细胞能在材料上正常粘附与生长。结论:明胶-白芨胶/丹参多孔材料无细胞毒性。能与大鼠真皮成纤维细胞成功复合为组织工程真皮。