香烟提出物对被动吸烟大鼠肺泡巨噬细胞源性明胶酶的表达和酶活性的影响

目的:探讨香烟烟雾对被动吸烟大鼠肺泡巨噬细胞源性明胶酶A(MMP-2)和明胶酶B(MMP-9)表达及酶活性的影响。方法:复制被动吸烟大鼠模型,从其支气管肺泡灌洗液(BALF)中分离与培养大鼠肺泡巨噬细胞(AM),经Giemsa染色法鉴定,以台盼蓝染色计数和检测其活性;制备香烟提出物(CSM),刺激培养的AM。以半定量RT-PCR法检测MMP-2、MMP-9 mRNA表达水平;以明胶酶谱法检测MMP-2、MMP-9酶活性水平。结果:以0%、1%、3%、5%、10%、15%CSM刺激AM时,MMP-9和β-actin mRNA灰密度值比分别为:0.095±0.006、0.215±0.018、0.468±0.038、0.837±0.047、0.159±0.028、0.092±0.002;而MMP-2和β-actin mRNA灰密度值比分别为:0.109±0.023、0.176±0.036、0.317±0.024、0.370±0.051、0.274±0.025、0.087±0.005。MMP-2酶活性的相对灰密度值分别为6 007.83±147.39、38 202.00±3 160.40、70 532.00±3 225.18、90 074.00±925.62、70 070.17±2 060.33、17 487.67±2 060.33;MMP-9酶活性的相对灰密度值分别为10 904.67±1 697.005、2 627.83±3 974.05、95 284.83±3 098.891、03 400.50±3 441.309、4 650.33±3 825.08、27 571.17±2 129.48。组间均存在显著差异(P<0.05)。结论:香烟烟雾可诱导AM源性MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,并导致其酶活性升高;AM及其分泌的明胶酶活性异常可能在吸烟相关的COPD中起重要作用。

凝血酶调控肾小球系膜细胞产生明胶酶A、B的分子机制研究

在体外培养条件下观察了凝血酶对人肾小球系膜细胞表达细胞外基质降解酶——明胶酶Ａ（ＭＭＰ－２）及明胶酶Ｂ（ＭＭＰ－９）的调节作用。发现在无血清ＲＰＭＩ１６４０培养１２ｈ后，酶谱法显示系膜细胞培养上清液中ＭＭＰ－２活性极低，未检测出明显的ＭＭＰ－９酶解活性，但加入凝血酶后，可剂量依赖性地上调其ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９活性；ＲＴ－ＰＣＲ结果表明，在无血清ＲＰＭＩ１６４０培养１２ｈ后，系膜细胞仅表达低水平ＭＭＰ－９ｍＲＮＡ，加入凝血酶后，ＭＭＰ－９ｍＲＮＡ转录水平随刺激浓度的增加而明显上调，但凝血酶对ＭＭＰ－２ｍＲＮＡ的转录过程无明显影响；凝血酶的上述作用可被其特异性阻断剂——水蛭素部分性地拮抗。说明凝血酶分别在基因转录和（或）蛋白质修饰水平调节人肾小球系膜细胞表达ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９，从而参与肾小球组织重构及炎症性损伤。

尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白对脑动脉支架置入术后造影剂肾病严重程度的预测价值

目的 评价老年患者尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）对脑动脉支架置入术后致造影剂肾病（CIN）的早期诊断价值及其严重程度的预测价值.方法 选择CIN患者15例（CIN组）,其中CIN Ⅰ期12例,CINⅡ期3例;非CIN患者15例（对照组）,连续收集尿标本进行NGAL分析.结果 与对照组比较,CIN组及CIN Ⅰ期、CINⅡ期患者术后3、6、12、24 h和CINⅡ期患者术后48 h尿NGAL明显增高,CIN组及CIN Ⅰ期、CINⅡ期患者尿NGAL术后0～3 h、0～6 h、0～12 h、0～24 h、0～48 h绝对变化值明显增高（P＜0.05）.与CIN Ⅰ期比较,CINⅡ期患者尿NGAL术后0～6 h、0～12 h绝对变化值明显增高（P＜0.05）.CIN组术后0～6h尿NGAL绝对变化值与术后48 h估算肾小球滤过率呈负相关（r=-0.480,P=0.001）.结论 动态监测尿NGAL既可早期诊断CIN,也可对CIN严重程度有一定的预测作用.

血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测诊断急性肾损伤的临床价值

目的探讨血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)检测诊断急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的临床价值。方法采用酶联免疫吸附法和苦味酸法对52例AKI患者(研究组)和50例健康体检者(对照组)血清NGAL和肌酐进行检测。结果 1、2、3期AKI患者血清NGAL均显著高于对照组(P<0.01);AKI患者血清NGAL与肌酐呈正线性相关(r_s=0.702,P<0.01)。结论血清NGAL可以作为AKI发生的血清学指标,对AKI的早期诊断具有重要作用。

利用组织芯片研究明胶酶及其抑制因子在乳腺癌中的表达

目的研究明胶酶(MMP-2、MMP-9)及其抑制因子(TIMP-1、TIMP-2)在乳腺癌侵袭转移中的表达意义。方法采用组织芯片平台,应用免疫组织化学方法结合计算机图像分析技术检测160例浸润性乳腺癌组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达及其相应比值大小。结果乳腺癌组织MMP-2、MMP-9蛋白表达和MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2蛋白表达比值均与腋淋巴结受累、TNM分期呈正相关(P<0·01);TIMP-2蛋白表达与腋淋巴结受累呈负相关(P<0·05);MMP-9/TIMP-1和MMP-2/TIMP-2比值大小均与肿块大小呈正相关(P<0·05);MMP-9表达与年龄呈负相关(P<0·05)。在乳腺癌组织MMP-2和TIMP-2蛋白表达、MMP-9和TIMP-1蛋白表达均呈显著正相关(r=0·665、0·702,P<0·01)。结论明胶酶及其抑制因子在乳腺癌的侵袭转移中发挥了重要作用,两者表达比值可作为一个提示肿瘤侵袭转移的重要潜在标志。

老龄大鼠脑缺血再灌注损伤与明胶酶系基因表达的关系

目的研究老龄大鼠脑缺血再灌注不同时期微血管基底膜损伤与明胶酶系基因表达的关系。方法制备SD雄性大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,将56只青年大鼠分为青年假手术组、青年模型组,56只老龄大鼠分为老龄假手术组、老龄模型组,其中青年与老龄模型组又分缺血3h和再灌注6、12、24h,3、6天时间点。观察脑微血管结构基底膜病理形态变化和明胶酶系的基因表达变化。结果老龄假手术组大鼠脑皮质微血管结构基本正常,老龄模型组与同时间点青年模型组比较病理损伤较重。随再灌注时间的延长,基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA表达递增,基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA和金属蛋白酶组织抑制-1(TIMP-1)mRNA表达呈先增强后降低趋势。与青年模型组相同时间点比较,老龄模型组MMP-2、MMP-9mRNA表达水平增强;TIMP-1mRNA仅在再灌注24h表达水平降低,差异均有显著性。结论随着增龄,大鼠脑微血管基底膜损伤改变与MMPmRNA、TIMPmRNA的变化有关。老龄大鼠较青年大鼠病理损伤严重。

全脑血管造影术后患者中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白变化的研究

目的观察数字减影血管造影术(DSA)后患者血中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的变化,以及与血肌酐、尿微量白蛋白(U-MA)的关系。方法选择行DSA的患者60例,分别于术前、术后6、24和48h行NGAL、血肌酐和U-MA检测。结果与术前24h比较,术后6hNGAL明显升高,术后48h血肌酐、U-MA明显升高;与术后6h比较,术后24和48hNGAL明显降低,术后48h血肌酐、U-MA明显升高;与术后24h比较,术后6hNGAL明显升高,术后48h血肌酐、U-MA明显升高(P<0.01)。血NGAL与血肌酐(r=0.605,P=0.00)、U-MA(r=0.593,P=0.00)均有相关性。结论测定血液中NGAL的变化可早期发现DSA后患者肾功能的异常。

乳腺癌中Twist的表达及其与明胶酶关系的研究

目的研究Twist和明胶酶(MMP-2和MMP-9)蛋白在乳腺癌组织中的表达及其相互关系。方法建立组织芯片平台,应用免疫组化SP法检测159例乳腺癌组织Twist、MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况。结果乳腺癌中Twis的高表达率为73.8%,MMP-2和MMP-9阳性率分别为96.9%和95.0%;Twist的表达与乳腺癌腋淋巴结受累、TNM分期均呈正相关(P<0.01);Twist高表达患者总生存期和无复发生存期显著低于低表达患者(P<0.01,P<0.05);MMP-2、MMP-9蛋白表达与Twist表达均呈正相关(P<0.01)。结论乳腺癌中Twist表达与肿瘤侵袭转移、患者预后有密切关系,Twist可能在一定水平上调控明胶酶表达。

抗明胶酶单链抗体与力达霉素融合蛋白抗肿瘤作用机制及疗效研究

目的探讨抗明胶酶单链抗体Fv与力达霉素(LDM)融合蛋白的抗肿瘤作用机制及疗效。方法采用三联径向加压C4柱制备LDM发色团AE,体外分子重建将其装入融合蛋白Fv-LDP中,Superdex 75层析获得Fv-LDP-AE。反相HPLC测定纯度或相对含量。流式细胞术测定DNA含量;采用SA-β-gal染色、Western blot和细胞伤口愈合实验分别检测药物对细胞衰老、蛋白表达和迁移的影响;通过动物模型评价药物疗效。结果 Fv-LDP-AE承袭了LDM诱导肿瘤细胞周期阻滞、凋亡和裂亡的作用特点,并显示出更强的诱导衰老和抗迁移作用。Fv-LDP-AE诱导凋亡和抑制迁移依次与caspases通路激活和MMP-2降调节有关。Fv-LDP-AE可抑制小鼠和裸鼠移植瘤生长,抑制率分别可达到86.6%和82.5%。结论 Fv-LDP-AE对小鼠和裸鼠移植瘤有效,可能与其对细胞周期阻滞、凋亡、裂亡和衰老的诱导以及迁移的抑制有关。

造影剂使用对中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白水平的影响

目的:观察接受CT增强扫捕和静脉肾盂造影检查的患者使用造影剂前后尿液中中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平的变化,探讨造影剂对肾脏的损伤作用。方法:选择34例接受CT增强扫描和静脉肾盂造影检查的患者,分别留取造影剂使用前后不同时间点的血液和尿液标本,测定血液标本中的肌酐(Scr)水平和尿液标本中的NGAL水平。结果:34例患者无1例发生造影剂肾病;注射造影剂后2、8、24、48和72 h的Scr水平与造影前相比,差异无统计学意义(P>0.05);注射造影剂后2、8 h尿NGAL水平明显升高,与造影前相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:造影剂使用后Scr水平升高不明显的患者,尿NGAL水平在早期已有明显升高,提示已出现早期的肾脏损害。

普罗布考对不稳定型心绞痛患者血清明胶酶的影响

目的:探讨普罗布考对不稳定型心绞痛(UAP)患者血清明胶酶的影响。方法:连续入选UAP患者80例,随机分为普罗布考治疗组(40例)和常规治疗组(40例)。常规治疗组采用硝酸酯类、阿司匹林、β受体阻滞剂等常规药物治疗;普罗布考组在常规治疗基础上加用普罗布考口服,观察治疗前及治疗一个月后血清明胶酶水平。结果:与治疗前比较,普罗布考治疗组治疗后基质金属蛋白酶(MMP)-2[(54.04±6.54)ng/ml比(32.43±1.81)ng/ml]、MMP-9[(56.33±7.25)ng/ml比(34±1.45)ng/ml]水平均明显下降(P均<0.01),且明显低于常规治疗组治疗后[MMP-2:(37.21±2.86)ng/ml、MMP-9:(39.96±1.75)ng/ml],P<0.05。结论:普罗布考能促进不稳定型心绞痛患者血清明胶酶水平的下降,起到稳定粥样斑块的作用。

明胶酶及其抑制剂在慢性格林-巴利综合征中的表达

目的观察MMP-9、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2在慢性格林-巴利综合征(CIDP)腓肠神经中的表达部位及水平,探讨它们在CIDP发病机制中的作用。方法收集CIDP和NIN腓肠神经活检蜡块,用免疫组化分别检测CIDP组和NIN组腓肠神经中MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白的表达,光镜观察表达部位,并比较各指标在两组中表达水平的差异性。结果MMP-9、TIMP-1、TIMP-2在CIDP腓肠神经中的血管、T淋巴细胞和神经纤维均有阳性表达且高于对照组(均P<0·05)。结论MMP-9在CIDP的发病机制中起重要作用;TIMP-1和TIMP-2在CIDP中可能通过增加表达来拮抗明胶酶而起保护作用。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测在新生儿败血症中的应用

目的探讨新生儿败血症患者对血清、尿液中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平的影响。方法检测93例新生儿败血症患者(其中败血症55例、严重败血症38例)血清及尿液NGAL水平,在感染治疗期间连续监测3 d。35例无感染新生儿为对照组。同时检测C-反应蛋白(CRP)、血清降钙素原(PCT)等炎症标志物。结果在后续3 d观察中发现败血症特别是严重败血症患者血清和尿液中NGAL水平均升高。血清、尿液中NGAL水平升高的程度与CRP、PCT等炎症标志物有明显的相关性。与新生儿治疗干预评分系统(NTISS)评分也存在明显的相关。结论 NGAL不仅仅是急性肾损伤的指标,也能反映败血症的严重程度。

人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白真核表达载体的构建和鉴定

目的构建人NGAL重组蛋白真核表达载体并转染HEK293T细胞进行瞬间表达。方法从人白细胞中提取总RNA,经RT-PCR扩增NGAL基因并将其克隆到真核表达载体pcDNA3.1/HisA中构建真核重组表达质粒pcDNA3.1/His A-NGAL,经测序鉴定正确后用脂质体转染HEK293T细胞,用Western blot和ELISA方法鉴定表达产物。结果获得长度597bp的NGAL蛋白基因并构建pcDNA3.1/His A-NGAL真核表达载体,测序正确后转染,用Western blot和ELISA方法证实HEK293T细胞可以表达NGAL重组蛋白并分泌出胞。结论成功构建人NGAL重组蛋白真核表达载体,转染HEK293T细胞表达出相应蛋白,为下一步的研究奠定了基础。

二乙基亚硝胺诱导大鼠肝细胞癌过程中明胶酶的动态变化

目的观察肝癌形成过程中明胶酶表达(蛋白及mRNA水平)的动态变化,探索明胶酶在肝癌生长浸润中的作用。方法应用免疫组化法、明胶酶谱法和RT-PCR法对大鼠肝癌形成过程中各期明胶酶表达情况进行观察,并与正常对照组进行比较分析。结果正常肝组织及肝硬化组织内明胶酶有表达,肝癌形成后主要在癌细胞内表达;明胶酶原在正常肝组织中有低表达,诱癌过程中呈持续增高趋势;明胶酶-2 mRNA与其酶蛋白表达趋向一致。结论在肝癌形成过程中明胶酶转录和翻译水平均呈持续增高趋势。

明胶酶在脑胶质瘤大鼠中的活性

目的:通过观察脑胶质瘤大鼠动物模型中明胶酶的活性变化,为以明胶酶为靶点的脑胶质瘤治疗奠定实验基础。方法:实验于2004-10/2005-12在解放军军事医学科学院野战输血研究所干细胞生物学研究室完成。9L大鼠胶质瘤细胞购自广州南方医科大学。①选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,24只建立大鼠脑胶质瘤模型,造模后随机数字表法分为建模后7,14,21,28d组,6只/组,每组3只用于灌注固定做免疫组化分析,另3只用于反转录多聚酶链反应和明胶酶谱分析。剩余3只大鼠作为正常对照。②采用反转录多聚酶链反应技术、免疫组织化学和明胶酶谱等方法检测胶质瘤中明胶酶2(matrixmetalloproteinase2,MMP-2)和明胶酶9(matrixmetalloproteinase2,MMP-9)的活性变化。结果:实验选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,全部进入结果分析。①MMP-2和MMP-9mRNA的表达:9L胶质瘤细胞中均可见MMP-2和MMP-9mRNA的表达,MMP-2的表达量高于MMP-9;大鼠脑胶质瘤组织中可见两者mRNA的表达,而正常脑组织MMP-2mRNA低表达,检测不到MMP-9mRNA的表达;随着肿瘤的生长,MMP-9mRNA的表达量增高。②MMP-2和MMP-9免疫组织化学观察结果:9L胶质瘤细胞的免疫组化显示,MMP-2和MMP-9均呈现阳性染色,主要为胞浆和胞膜染色;肿瘤组织MMP-2和MMP-9染色阳性,为胞浆染色,在血管内皮和肿瘤侵袭边缘细胞胞阳性染色明显。随脑胶质瘤的生长,MMP-2和MMP-9染色程度加深。③MMP-2和MMP-9酶活性检测结果:9L细胞无血清培养上清中可见Pro-MMP2(Mr72000)与Pro-MMP9(Mr92000)及其活化形式activeMMP-2(Mr66000)与activeMMP-9(Mr83000)的表达,MMP-2的表达量较高;MMP-2酶原与活化的MMP-2在脑胶质瘤组织中明显表达,而在正常脑组织低表达。MMP-9酶原与活化的MMP-9在脑肿瘤组织中表达,正常脑组织中未检测到其表达。④MMP-2和MMP-9在肿瘤组织中的定位情况:脑胶质瘤组织冰冻切片原位明胶酶谱结果显示,肿瘤组织因表达活性的明胶酶降解载片上的明胶,致使不被染色,肿瘤部位很透亮。对侧脑组织因不表达明胶酶,不能降解明胶,被染黑。结论:脑胶质瘤模型中表达高活性的MMP-2和MMP-9,且与胶质瘤生长速度密切相关。

姜黄素对不稳定型心绞痛患者血清明胶酶水平的影响(英文)

目的:探讨姜黄素对不稳定型心绞痛患者血清明胶酶水平的影响。方法:选择2010年1月至2010年9月住院的不稳定型心绞痛患者共80例,随机分为常规治疗对照组(n=40)和姜黄素治疗组(n=40),分别测定两组治疗前及治疗30d后血清明胶酶[包括基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9]的水平。结果:与治疗前比较,姜黄素治疗组治疗后血清明胶酶水平明显下降[MMP-2:(52.64±6.77)ng/ml:(32.65±1.67)ng/ml,MMP-9:(56.75±7.34)ng/ml:(35±1.88)ng/ml],P<0.01。姜黄素治疗组治疗后血清明胶酶水平明显低于常规治疗对照组治疗后[MMP-2:(32.65±1.67)ng/ml:(37.78±2.76)ng/ml,MMP-9:(35±1.88)ng/ml:(40.23±1.95)ng/ml],P<0.05。结论:姜黄素能降低不稳定型心绞痛患者血清明胶酶水平,起到稳定粥样斑块的作用。

明胶酶A在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义

目的 :探讨明胶酶A在甲状腺乳头状癌中的表达及其与甲状腺乳头状癌侵袭与转移的关系 ,方法 :用原位杂交、免疫组化SP法检测95例甲状腺乳头状癌及 5 9例癌旁组织中明胶酶AmRNA、蛋白的表达水平。结果 :明胶酶AmRNA和蛋白在甲状腺乳头状癌中的阳性率分别为 74 7% ( 71/95 )、77 9% ( 74/95 ) ,而在癌旁组织中的阳性率分别为 10 2 % ( 6/5 9)、2 5 4% ( 15 /5 9) ,两者差异有统计学意义 ,P <0 0 1。明胶酶AmRNA及其蛋白在甲状腺乳头状癌 (微小癌、腺内型、腺外型 )的阳性率分别为5 9 3 % ( 16/2 7)、 80 0 % ( 4 0 /5 0 )、 83 3 %( 15 /18) ;66 7% ( 18/2 7)、 80 0 % ( 4 0 /5 0 )、88 9% ( 16/18) ,癌组织各型间差异无统计学意义 ,P >0 0 5。淋巴结有癌转移组的阳性率分别为 91 4% ( 3 2 /3 5 )、97 1% ( 3 4/3 5 ) ,淋巴结无癌转移组的阳性率分别为 65 0 % ( 3 9/60 )、66 7%( 4 0 /60 ) ,两者差异有统计学意义 ,P <0 0 1。结论 :明胶酶A在甲状腺乳头状癌中呈高表达 。

血清中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白在健康成年人中的参考值范围调查

目的：评估中性粒细胞明胶酶相关性脂质运载蛋白（NGAL）在健康成年人中的参考值范围。方法采用丹麦Bio-porto公司试剂盒，用胶乳增强免疫比浊法在日立全自动生化分析仪上测定252例健康成年体检者血清NGAL 浓度并进行统计学分析，建立NGAL参考值范围。同时分别测量同型半胱氨酸（Hcy）、半胱氨酸抑制酶 C（CysC）、β2微球蛋白（β2-MG）水平，分析年龄、性别及所测肾功能各项参数与NGAL的相关性。结果 NGAL 在健康人群中呈近似正态分布。17～＜50岁的NGAL水平与50～＜90岁比较差异有统计学意义（P＜0．05）。NGAL 与年龄的相关性最为密切（r＝0．268，P＜0．01），其次是β2-MG （r＝0．180，P＜0．01）。此外，CysC也与NGAL有一定的相关性（r＝0．137，P＜0．05）。以50岁为分界年龄，以97．5％为参考值上限，健康成年人不同年龄的NGAL参考值范围是：17～＜50岁NGAL ＜73．94 ng/mL，50～＜90岁NGAL＜87．85 ng/mL。结论年龄及其他生理指标可以影响健康者NGAL分布，仪器、试剂及所检测标本的不同也会使所测NGAL 范围不一致，因此各实验室需建立自己的NGAL参考值范围。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白在心血管疾病中的应用价值

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase-associated Lipocalin,NGAL）,是人脂质运载蛋白家族中的一员。最早是由Kjeldsen等在1993年研究中性粒细胞时发现的一种特殊颗粒组分。现已证明,NGAL与心力衰竭、动脉粥样硬化等多种病理过程相关,对早期发现肾脏损害、判断心力衰竭患者预后、预测斑块不稳定性,评价冠心病患者冠状动脉病变程度具有较大的临床意义。