星形孢菌素产生菌电转化条件的优化及其高产菌株的构建

目的提高星形孢菌素的产量。方法本研究以星形孢菌素产生菌(Streptomyces sp.ST-07)为出发菌株,采用电转化方法和应用PCR扩增星形孢菌素生物合成的调控基因staR,成功构建含不同启动子(kasO*p和ermE*p)的加强表达staR基因的重组工程菌,分别命名为ST-D-5和ST-H-23。结果通过对电转化条件的甘氨酸浓度、电场强度、菌丝体浓度、质粒浓度、孵育时间和孵育温度等关键参数优化,使电转化的效率从4×10^(6)提高至9.6×10^(8)(CFU/μg DNA);工程菌摇瓶发酵结果表明,与星孢菌素原始菌株ST-07相比,采用kasO*p启动子构建的工程菌ST-D-5星形孢菌素的产量提高了17%,最高单位可达923 mg/L。结论本文系统摸索了星形孢菌素产生菌的电转化条件,显著提高了电转化效率,不但为该菌株的高产遗传改造奠定了基础,而且对其他放线菌的遗传操作体系建立提供了有益借鉴。

海洋链霉菌Streptomyces sp. SCSIO1667产星形孢菌素的初步研究

星形孢菌素(Staurosporine,STS)是蛋白激酶C抑制剂,具有很强的抗肿瘤活性。该研究对来自中国南海的链霉菌Strep-tomyces sp.SCSIO1667发酵产物星形孢菌素进行发酵工艺优化。结果表明,30℃、60h是星形孢菌素最佳收获温度和时间;木薯淀粉和酵母粉是最适碳、氮源;木薯淀粉和海盐是培养基成分的重要影响因子。利用爬坡路径试验和响应面分析法进行优化显示当培养基中木薯淀粉和海盐含量分别为48.64g/L和1.13g/L时STS最大理论值为(50.53±0.52)μg/mL,摇瓶实测值为(50.89±0.24)μg/mL,其发酵水平比优化前提高了2.76倍。

海洋链霉菌M518产的新星形孢菌素衍生物的生物活性

从海洋放线菌M518中分离到1个新结构化合物N-甲酰胺基-星形孢菌素（N-carboxamido-staurosporine） （1c）,以及两个同类型已知化合物星形孢菌素（staurosporine）（1a）和N-甲酰基-星形孢菌素（N-formyl-staurosporine）（1b）.为了解新化合物的生物活性,对37株人类肿瘤细胞和9种受试微生物细胞株进行了抑制活性筛选,发现化合物1c具有强烈的抗肿瘤活性,对37株肿瘤细胞的平均抑制浓度IC50,IC70和IC90分别为0.016、0.171和2.352μg·mL-1.其活性强于专利化合物1b.通过测定发现,分离到的三种孢菌素类化合物都具有较好的抗微藻活性.菌株M518经16S rRNA系统进化学分析,属于链霉菌属（Streptomyces sp.）.

他克林对星形孢菌素诱导NG108-15细胞凋亡的保护作用

目的 用星形孢菌素诱导 NG1 0 8-1 5细胞损伤建立凋亡模型 ,观察乙酰胆碱酯酶 (ACh E)抑制剂他克林是否具有抗凋亡作用。方法 LDH活性测定判断细胞损伤状况 ,DNA染料 Hoechst3 3 3 42染色观察细胞核形态 ,SDS-PAGE和 Western blot印迹分析 Bax及 Bcl-2的蛋白表达水平。结果 NG1 0 8-1 5细胞经 0 .1μmol/ L星形孢菌素处理 2 4h,细胞内大量 LDH释放至培养液中 ,用 0 .1 mmol/ L 他克林预处理 2 h可使 LDH释放量由 45 %减至 3 2 % (P<0 .0 1 )。他克林预处理能延迟和减少星形孢菌素诱导的 Bax表达的上调 ,同时增加了星形孢菌素诱导 1 2～ 2 4h后 Bcl-2的表达水平。结论 他克林预处理对星形孢菌素诱导的凋亡性损伤有显著保护作用 ,可能通过抑制或延迟 Bax表达及促进

他克林和双他克林抗星形孢菌素致凋亡作用的比较

用星形孢菌素 (STS)诱导NG10 8 15细胞和HeLa细胞凋亡 ,观察他克林和双他克林是否具有抗凋亡作用 .相差显微镜和Hoechst 33342染色观察细胞及胞核形态 ;噻唑蓝 (MTT)测定分析细胞损伤状况 ;DNA提取及琼脂糖凝胶电泳观察凋亡特征性梯带 ;蛋白质印迹分析Bcl 2和Bax的表达水平 .结果表明 ,经 0 1mmol/L他克林预处理后 ,由STS诱导的NG10 8 15细胞凋亡受到明显抑制 .双他克林预处理无保护作用 .蛋白质印迹分析表明他克林可显著抑制Bax的表达 ,同时还可促进Bcl 2的表达 .他克林和双他克林预处理对STS诱导的HeLa细胞损伤无明显的保护作用 .结论为 :a 他克林对STS诱导的神经细胞损伤有显著的保护作用 ,但这种保护作用与其AChE抑制作用似乎没有明显关联 .b 他克林对STS损伤的保护作用有细胞选择性 .

星形孢菌素对前列腺癌细胞株PC-3增殖和凋亡的影响

目的:探讨蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素(ST)对前列腺癌细胞株PC-3增殖及凋亡的影响。方法:以ST(10-8mol/L)处理体外培养的PC-3细胞株。采用Western印迹检测细胞周期蛋白cyclin A、cyclin D1表达的变化。通过MTT实验、平板克隆实验检测ST对PC-3细胞增殖能力的影响。流式细胞仪检测各组细胞凋亡的情况。光镜观察细胞形态学的改变。结果:PC-3细胞经ST处理后cyclin A、cyclin D1蛋白表达明显降低。MTT实验结果显示ST对PC-3细胞的抑制作用自48 h后(19.35%)有显著性(F=31.06,P<0.01)。平板克隆实验结果显示组细胞克隆形成率ST组[(37.10±3.43)%]明显低于对照组((64.80±4.34)%,χ2=14.59,P<0.05]及DMSO组[(62.80±4.36)%,χ2=12.50,P<0.05]。流式细胞术结果显示ST组凋亡率(19.6±2.20)%与对照组(5.33±1.40)%和DMSO组(5.50±0.96)%比较显著增加(F=104.36,P<0.01)。光镜下可见:与对照组及DMSO组比较ST组细胞生长状态明显变差,细胞变圆,边缘模糊。结论:ST可以抑制前列腺癌细胞的生长和增殖,诱导细胞凋亡。

菌株H41-38中星形孢菌素浸提条件优化

星形孢菌素存在于菌株H41-38的菌体中,采用二次回归旋转组合设计法对菌体浸提获得星形孢菌素的4个因素(乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度)进行了优化,优化后的浸提参数为:乙醇浓度80%、料液比1∶6、提取时间5 h和提取温度50℃,浸提效果达到2 879.53μg/g。

HSP70的表达在不同预处理下星形孢菌素诱导的大鼠神经细胞毒性应激损伤模型中的意义

目的评估不同预处理对抑制星形孢菌素(STS)诱导的神经细胞毒性应激损伤的作用。方法选取SD大鼠乳鼠120只,分为对照组(n=20)、STS模型组(n=20)、姜黄素组(n=20)、槲皮素+STS模型组(n=20)、姜黄素+STS预处理组(n=20)、姜黄素+槲皮素+STS处理组(n=20)6个组。取乳鼠海马神经细胞,利用STS诱导建立神经细胞毒性应激损伤模型。对照组研究期间不作任何特殊处理,STS模型组、槲皮素+STS模型组、姜黄素+STS预处理组、姜黄素+槲皮素+STS处理组、姜黄素组分别加入终浓度为20μmol/L的STS、终浓度为10μmol/L槲皮素+20μmol/L STS、终浓度为20μmol/L的姜黄素和槲皮素、终浓度为10μmol/L的槲皮素+20μmol/L的姜黄素和槲皮素、终浓度为20μmol/L的姜黄素。利用噻唑蓝(MTT)法、乳酸脱氢酶(LDH)释放率和Western Blot法分别测定各组细胞存活率、细胞毒性损伤程度和HSP70表达量。结果姜黄素+STS预处理组、姜黄素组细胞存活率明显高于STS模型组,差异具有统计学意义(P<0.01);姜黄素+STS预处理组和姜黄素组神经细胞毒性率明显低于STS模型组,差异有统计学意义(P<0.01);姜黄素+STS预处理组HSP70表达量高于STS模型组和姜黄素组,差异有统计学意义(P<0.01);姜黄素+STS模型组神经元存活率高于槲皮素+STS预处理组、姜黄素+槲皮素+STS预处理组和STS模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素能增强HSP70的表达并抑制STS诱导的SD乳鼠神经元细胞毒性损伤,而槲皮素通过阻断HSP70表达使姜黄素的抑制作用被抵消。

星形孢菌素诱导TR3由细胞核向线粒体转运

背景和目的:星形孢菌素(staurosporine,STS)是一种非特异性蛋白激酶抑制剂,能够诱导多种类型细胞凋亡。孤生受体(orphanreceptor)TR3是一种立早基因(immediate-earlygene)产物,属于类固醇/甲状腺激素受体超家族成员。当细胞受到凋亡因子刺激时,TR3表达并从细胞核转运至线粒体,从而诱导细胞凋亡。本研究旨在探讨STS诱导人胃癌细胞BGC-823凋亡及其与TR3转运的相关性。方法:荧光显微术观察经STS处理3h和24h后BGC-823细胞凋亡的形态变化并测定细胞凋亡率;激光共聚焦显微术和Westernblot对STS处理后BGC-823细胞中TR3蛋白和细胞色素c蛋白进行定位;流式细胞术和激光共聚焦显微术检测细胞线粒体的膜电位。结果:STS处理BGC-823细胞3h和24h后,细胞凋亡率分别从对照组的4.0%和4.7%提高到15.7%和39.4%;STS处理24h后,细胞出现核膜消失、染色体聚集成发亮的小体等典型的细胞凋亡形态变化。BGC-823细胞中TR3蛋白定位于细胞核,STS处理3h后TR3蛋白由细胞核转运至线粒体上,导致线粒体膜电位下降,并伴随着细胞色素c释放至胞浆。结论:孤生受体TR3参与STS诱导的细胞凋亡事件。在STS诱导下,TR3从细胞核移位至线粒体膜,引起线粒体膜电位下降,细胞色素c的释放,进而诱导细胞凋亡。

星形孢菌素通过PI3K/Akt信号途径影响人宫颈癌细胞增殖与侵袭能力的研究

目的探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂星形孢菌素(STS)对人宫颈癌细胞增殖与侵袭能力的影响,并初步探讨其信号机制。方法培养人宫颈癌细胞Hela细胞株,建立STS组与空白对照组。采用MTT法观察各组细胞增殖能力,Transwell检测细胞侵袭能力,以Real-time PCR与Western Blot检测细胞PKCα、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)在mRNA水平与蛋白水平表达量以及对PI3K磷酸化的作用。结果 MTT实验中,0.5μmol/L STS组24 h后吸光度A值显著低于空白对照组,而增殖抑制率显著高于空白对照组(P<0.05);Transwell实验STS组穿越细胞数少于空白对照组[(77.3±9.4)个vs.(127.3±6.8)个],差异有统计学意义(P<0.05);Real-time PCR结果显示STS组PKCα、PI3K、Akt mRNA表达量分别为空白对照组的43.4%、65.8%、55.6%,差异有统计学意义(P<0.05);Western Blot检测STS组PKCα、PI3K、Akt、P-PI3K蛋白表达量为空白对照组的34.7%、38.8%、80.6%,75.3%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 STS可以有效抑制人宫颈癌细胞Hela的增殖与侵袭能力,其机制可能与降低PKCα的表达后抑制了下游PI3K/Akt信号的激活有关。

星形孢菌素生物合成途径的研究进展

早形孢菌素（Staurosporine，STA）是从Streptomyces Staurosporeus AM-2282分离得到的一种生物碱。X射线晶体结构分析发现它由一个吲哚咔唑核心和通过双C—N键连接的氨基己糖构成。1986年，人们发现它是一种对蛋白激酶C（proteinkinaseC，PKC）非常有效的拮抗剂，

星形孢菌素脂质体运载系统

星形孢菌素（STS）是一种作用很强的抗癌物质，但是30年来，由于STS在血液中不稳定，且其不具选择性，在杀死癌症细胞的同时会杀死正常细胞等问题，STS一直无法用于临床。日前，美国加州大学圣地亚哥医学院的研究人员提供了一个有效解决上述问题的途径，相关的研究结果发表在2013年10月20日的《International Journal of Nanomedicine》上。

热休克蛋白70在Curcumin抑制STS介导的神经元毒性损伤中的作用

目的探讨HSP70表达在姜黄素(Curcumin)预处理抑制星形孢菌素(Staurosporine,STS)介导的神经元毒性应激损伤中的作用。方法采用SD大鼠乳鼠海马神经元原代培养细胞,STS诱导建立神经细胞毒性应激损伤模型,在培养基中加入槲皮素(Quercetin)阻断热休克蛋白70(heat shock protein70,HSP70)表达。将细胞按添加药物的不同分成以下6组:正常对照组、STS模型组、Quercetin+STS模型组、Curcumin+STS预处理组、Curcumin+Quercetin+STS处理组、Curcumin组。采用噻唑蓝(MTY)法测定各组细胞活性,通过检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率研究各组对细胞的毒性作用,Western Blot法检测各组HPS70表达情况。结果 MTY结果显示Curcumin+STS预处理组的细胞活性比STS模型组细胞活性明显升高(P<0.001);与Quercetin+STS模型组相比,Curcumin+quereetin+STS处理组的细胞活性无明显变化。LDH结果显示Curcumin+STS预处理组的神经细胞毒性明显小于STS模型组(P<0.001)。Western Blot结果显示,与STS模型组相比,Curcumin+STS预处理组HSP70蛋白表达量明显增加(P<0.001)。结论Curcumin可通过上调HSP70的表达抑制STS介导的神经元毒性应激损伤;当加入Quercetin阻断神经细胞HSP70的表达后,Curcumin抑制STS介导的神经元毒性应激损伤作用被抵消。

逆转录病毒载体导入重组ICAD和ICAD-DM对STS诱导大鼠C6细胞凋亡的影响

为了观察caspase依赖的脱氧核糖核酸酶(CAD)及其抑制剂ICAD对星形孢菌素(STS)诱导的C6细胞凋亡的影响,用含有ICAD/DFF45和caspase抗性的ICAD/DFF45突变体ICAD DM基因的复制缺陷型逆转录病毒载体转染包装细胞,并用产生的病毒感染大鼠神经胶质瘤细胞株C6,筛选获得稳定表达目的蛋白的细胞.结果发现STS可显著诱导ICAD组的C6细胞出现DNA凋亡梯带,而ICAD DM组不出现DNA凋亡梯带;与ICAD DM组相比,STS对ICAD组MTT代谢的抑制作用更强(P<0.05);透射电镜观察显示ICAD DM组的细胞核形态改变弱于ICAD组.表明ICAD/DFF45的切割应在CAD/DFF40的激活中占主导地位,抑制ICAD/DFF45的切割并不能阻止凋亡的发生,但可延迟细胞死亡的速度,对染色质凝聚和核固缩的出现亦有一定抑制作用.

ERK1/2介导姜黄素抑制STS诱导神经元毒性损伤的作用

目的观察姜黄素对星形孢菌素(staurosporine,STS)介导的神经元毒性损伤细胞存活率的影响,以阐明细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)介导姜黄素抑制STS诱导神经元毒性损伤的作用。方法运用SD大鼠乳鼠海马神经元原代培养细胞,STS诱导建立细胞毒性损伤模型。实验随机分6组:正常对照组、STS模型组、PD098059+STS模型组、姜黄素+STS预处理组、姜黄素+PD098059+STS组和姜黄素组。用MTT法测定细胞活性,以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)释放率分析细胞毒性,4',6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞凋亡效应,Western blot法检测ERK1/2在姜黄素预处理对STS介导神经元凋亡抑制中的作用。结果姜黄素+STS预处理组的细胞活性比STS模型组明显升高(P<0.001);与PD098059+STS模型组比较,姜黄素+PD098059+STS预处理组细胞活性差异无统计学意义;与姜黄素+STS预处理组比较,姜黄素+PD098059+STS神经元存活率明显降低(P<0.001);姜黄素+STS预处理组的细胞毒性明显小于STS模型组(P<0.001)。STS模型组呈现典型的细胞凋亡特征,姜黄素可抑制STS介导的神经元凋亡;姜黄素+STS预处理组p-ERK1/2蛋白表达量明显高于STS模型组(P<0.001)。结论姜黄素通过上调p-ERK1/2的表达抑制STS介导的神经元毒性损伤;PD098059阻断神经细胞p-ERK1/2的表达后,姜黄素抑制STS介导的神经元毒性损伤作用未能顺利实施,说明ERK1/2能够介导姜黄素抑制STS诱导神经元毒性损伤。

星形孢菌素产生菌H41-38的发酵工艺条件

本研究对菌株H41-38发酵生产星形孢菌素的工艺进行了研究。结果表明:30°C、96 h为菌株摇瓶培养最适条件。玉米淀粉和酵母粉为最适碳、氮源。采用Fractional factorial design方法确定培养基成分的重要因子:酵母粉和粗盐,然后利用爬坡路径试验和响应面分析法优化了发酵效价取得最大值时酵母粉和粗盐含量,发酵效价最大理论值为252.31μg/mL,摇瓶实测值为251.28μg/mL,其发酵水平比优化前提高了4.33倍。在30 L发酵罐(300 r/min、30°C、V空气=10 L/min^15 L/min)中扩大培养84 h后发酵效价达到286.44μg/mL,比摇瓶培养效价提高了45.16μg/mL,其发酵参数变化曲线可指导生产罐的应用生产。

蛋白激酶C抑制剂星形孢菌素对肺腺癌A549细胞侵袭力的影响研究

目的:探讨蛋白激酶C(PKC)抑制剂星形孢菌素(STS)对肺腺癌A549细胞侵袭移动的影响及作用机制。方法:取A549细胞加入不同浓度STS(1、10、100 nmol.L-1)处理后,应用Transwell小室检测A549细胞移动抑制率和侵袭抑制率;免疫荧光染色法检测细胞内蛋白水解酶基质金属蛋白水解酶-9(MMP-9)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)蛋白表达;激光共聚焦法观测细胞内骨架蛋白微管蛋白α-tubulin的分布,Western blot法检测胞膜和胞浆内PKC-α活性。同时设立不加STS处理的对照组进行比较。结果:与对照组比较,A549细胞的移动抑制率、侵袭抑制率、MMP-9和uPA蛋白表达量均明显下降(P<0.05或P<0.01);胞浆内α-tubulin蛋白分布不均;胞膜内PKC-α蛋白含量减少,而胞浆内PKC-α蛋白含量无明显变化。结论:PKC抑制剂STS能抑制A549细胞移动和侵袭;其机制可能与抑制PKC-α的活性,减弱肿瘤细胞中MMP-9、uPA表达,诱导肿瘤细胞骨架变化相关。

奥沙利铂和7-羟基星形孢菌素联合用药对HCT116细胞的抑杀作用

目的:观察奥沙利铂(Oxaliplatin,L-OHP)与7-羟基星形孢菌素(7-hydroxystaurosporine,UCN-01)单独及联合应用对结肠癌细胞HCT116的增殖抑制作用,探讨其诱导细胞死亡的作用机制。方法:应用MTT法检测L-OHP,UCN-01单药及联用对HCT116细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞术、Western blot方法检测药物处理的结肠癌细胞凋亡;应用HE染色法检测丝裂灾变的形态改变。结果:低浓度L-OHP(6.25μmol·L-1)与UCN-01(100 nmol·L-1)联用对结肠癌HCT116细胞的杀伤可产生协同作用,效果明显强于单独用药组;两药联用Annexin V阳性细胞率与UCN-01单用无明显差别,但死亡细胞明显增加;两药联用HCT116细胞的形态发生改变,巨核多核细胞较单独用药组增多约10%。结论:L-OHP与UCN-01联用对HCT116细胞的增殖具有协同抑制作用,诱导细胞发生凋亡和丝裂灾变。

星形孢菌素诱导小鼠T细胞中Caspase非依赖性细胞死亡方式的研究

目的:研究星形孢菌素(staurosporine,STS)诱导的小鼠T细胞中Caspase非依赖性细胞死亡方式,探讨T细胞死亡的分子机制。方法:在加入或不加Caspase抑制剂z-VAD-fmk(20μmol.L-1)情况下,检测STS(100 nmo.lL-1)刺激后小鼠T细胞的凋亡率,DNA ladder,线粒体膜电位变化以及凋亡相关蛋白AIF,细胞色素C和Bax等的变化。结果:STS诱导的小鼠T细胞凋亡中存在Caspase非依赖性细胞死亡方式,其DNA ladder改变与Caspase依赖性死亡方式不同,线粒体膜电位依然下降,AIF从线粒体转移到细胞质中要早于细胞色素C,且两者的转移需要Bax结合到线粒体上。结论:在STS诱导的小鼠T细胞死亡中,Caspase非依赖性死亡方式可能是Caspase依赖性死亡方式的替代途径,这对于维持T细胞的数量和保证免疫系统功能的正常发挥具有十分重要的意义。

星形孢菌素的发酵条件优化

提高抗生素在产生菌中的表达效价，从而降低生产成本，是实现抗生素生产应用的重要基础。星形孢菌素是一种非特异性的蛋白激酶抑制剂，