急性脑缺血/再灌注后细胞病理改变及星形胶质细胞活化规律

目的观察脑缺血/再灌注后不同时间点细胞病理改变及星形胶质细胞活化的规律。方法本实验共采用85只SD雄性SPF级大鼠,将其随机分为假手术组、大脑中动脉闭塞90 min再灌注不同时间点组,后者分为再灌注3、6、12、24、48 h组。HE染色观察细胞病理改变,采用透射电镜观察脑缺血/再灌注后星形胶质细胞的亚显微结构,免疫印迹联免疫荧光法检测脑缺血/再灌注损伤后的GFAP表达。结果脑缺血/再灌注后不同时间点可导致神经细胞发生不同程度的缺血/再灌注损伤,再灌注后24 h细胞损伤最为严重。透射电镜结果提示星形胶质细胞亚显微结构发生改变,细胞出现不同程度肿胀,线粒体嵴断裂等。脑缺血/再灌注后在缺血区GFAP表达呈时间依赖性逐渐升高,再灌注48 h后表达最高,而在梗死区表达逐渐减少。结论脑缺血/再灌注后24 h神经细胞损伤最重,缺血半暗带区的星形胶质细胞形态发生变化,星形胶质细胞激活,伴随再灌注的推移,梗死区、缺血区边界逐渐清晰,可能出现胶质瘢痕。

曲马多对坐骨神经痛大鼠脊髓c-jun、c-fos表达及星形胶质细胞活化的影响

目的 探究曲马多对坐骨神经痛大鼠脊髓组织中Jun原癌基因蛋白(c-jun)、fos原癌基因蛋白(c-fos)表达及对星形胶质细胞活化的影响。方法 采用腰椎间孔外口植入髓核法建立SD大鼠坐骨神经痛模型,随机分为模型组、曲马多低(10 mg/kg)、中(20 mg/kg)、高(30 mg/kg)剂量组、阳性对照组(吲哚美辛,7.5 mg/kg),每组10只,另设置假手术组10只(自体髓核不植入神经部位),于造模后3 d开始给药,1次/d。给药14 d后,观察大鼠一般行为活动;检测机械缩足痛敏阈值(PWT)及热辐射刺激缩爪反应潜伏期(PWL);酶联免疫吸附法(ELISA)检测疼痛标志物前列腺素(PG)E2、P物质(SP)水平;苏木素-伊红(HE)染色检测脊髓病理形态变化;免疫组化法检测脊髓星形胶质细胞活化标志物胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达;Western印迹法检测脊髓c-fos、c-jun、活化蛋白(AP)-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、一氧化氮合酶(iNOS)和环氧化酶(COX)-2表达。结果 与假手术组相比,模型组大鼠活动量降低并出现易激惹行为,神经纤维紊乱及坏死严重,PWT、PWL显著降低(P<0.05),血清PGE2、SP水平、脊髓GFAP、TNF-α、IL-1β、c-fos、c-jun、AP-1、iNOS、COX-2表达水平显著升高(P<0.05);与模型组相比,曲马多各剂量组大鼠易激惹行为减少,神经纤维病理损伤减轻,PWT、PWL显著升高(P<0.05),血清PGE2、SP水平、脊髓组织GFAP、TNF-α、IL-1β、c-fos、c-jun、AP-1、iNOS、COX-2表达水平均显著降低(P<0.05);阳性对照组与曲马多高剂量组的上述各项指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 曲马多可通过抑制c-jun/c-fos通路激活,抑制星形胶质细胞活化,缓解坐骨神经痛模型大鼠神经炎症损伤及疼痛症状。

大鼠弥漫性轴索损伤后海马区caveolin-1的表达及其与星形胶质细胞活化的关系

目的研究大鼠弥漫性轴索损伤(diffuse axonal injury,DAI)后小窝蛋白1(caveolin-1)在大鼠脑海马区的表达,探讨caveolin-1的表达变化与星形胶质细胞活化的关系。方法运用Western blot检测大鼠海马中caveolin-1的表达,运用免疫组化检测海马区胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达,并通过免疫荧光共定位分析caveolin-1与GFAP之间的相互作用。结果 Western blot结果提示DAI后海马区caveolin-1的表达从1d开始显著降低,并持续降低至7d(P<0.05);免疫组化结果提示DAI后星形胶质细胞活化标志物GFAP的表达从1d后逐渐升高,3d后达峰,7d后稍降低,但仍高于正常(P<0.05);免疫荧光共定位提示DAI后caveolin-1与GFAP的共定位细胞数随着时间的延长逐渐增加。结论大鼠DAI后海马区caveolin-1的表达减少,GFAP的表达增加,星形胶质细胞内caveolin-1的表达变化可能是导致GFAP升高及星形胶质细胞活化的机制之一。

星形胶质细胞活化对神经病理性疼痛的影响

疼痛是人类对伤害性感受的知觉,是一种与组织损伤相关的不痛快的感觉和情绪体现。正常情况下,这种与生俱来的保护性反射可以带来强烈的一过性的不快感,从而促使人体避免进一步的伤害。

糖尿病模型大鼠海马区星形胶质细胞活化与凋亡的观察

目的:探讨糖尿病高血糖状态对于大鼠海马星形胶质细胞的影响。方法:应用链脲佐菌素(STZ)诱导Ⅰ型糖尿病SD大鼠模型,分为糖尿病模型1、2、3、4周和5周组(DM1,DM2,DM3,DM4,DM5),同周龄SD大鼠作为对照组。采用免疫荧光、免疫组化和Western Blot等技术,对比观察糖尿病大鼠海马区星形胶质细胞的形态、caspase-3和GFAP的表达情况。结果:免疫荧光和免疫组化检测结果显示:DM1和DM2大鼠海马区星形胶质细胞的胞体增大,突起增粗;DM3和DM4大鼠海马内星形胶质细胞的突起增粗、变长,其数量明显多于正常对照组(P<0.05);而DM5大鼠海马内星形胶质细胞的突起僵硬,细胞数量有所减少,但仍高于正常对照组(P<0.05)。Western Blot结果显示:DM3,DM4,DM5大鼠海马区GFAP含量明显高于对照组和DM1,DM2(P<0.05)。caspase-3/GFAP免疫组化双标结果显示:DM1和DM2大鼠海马区偶见caspase-3阳性标记的星形胶质细胞;而DM3,DM4,DM5大鼠海马区caspase-3/GFAP双标细胞数明显多于正常对照组(P<0.05);其中DM5双标阳性细胞数明显多于DM3和DM4(P<0.05)。结论:糖尿病高血糖早期可激活星形胶质细胞,持续性糖尿病高血糖可诱导海马区星形胶质细胞活化的抑制,并引起星形胶质细胞凋亡。

星形胶质细胞活化与表皮生长因子受体表达的相关性研究

目的观察活化后星形胶质细胞(astrocyte,AST)的表皮生长因子受体(epithelial growth factor recep-tor,EGFR)表达变化。方法分离培养星形胶质细胞,实验分为对照组、活化组、抑制组,以睫状神经营养因子(cili-ary neurotrophic factor,CNTF)活化星形胶质细胞,并用EGFR抑制剂染料木黄酮(Genistein)干预活化星形胶质细胞,通过免疫荧光化学、RT-PCR分别观察胶原纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及EGFR mRNA表达变化。结果星形胶质细胞活化后,不仅GFAP表达增高,EGFR表达亦明显增高,与对照组比较有显著差异(P<0.01);应用EGFR抑制剂Genistein干预后,星形胶质细胞活化被抑制,GFAP表达下降,与活化组比较有显著差异(P<0.01)。结论形胶质细胞活化后,EGFR表达明显上调;抑制EGFR表达,可抑制星形胶质细胞活化。

NMDA受体在匹罗卡品癫痫小鼠海马星形胶质细胞活化中的作用

目的:探讨在匹罗卡品诱导的小鼠癫痫持续状态(SE)模型中,N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体在海马星形胶质细胞增生中的作用及其可能的分子机制。方法:将32只6周龄雄性C57/BL6小鼠随机分为对照组、SE组、SE后注射NMDA受体拮抗剂MK-801组和单纯注射MK-801组,每组8只。腹腔注射300 mg·kg^(-1)匹罗卡品建立SE模型。免疫组化方法检测各组小鼠海马脑区星形胶质细胞的形态差异,同时利用western Blot方法检测海马脑区神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达和转录因子c AMP反应元件结合蛋白(CREB)的磷酸化水平。结果:SE组小鼠海马星形胶质细胞出现显著活化现象,免疫组化结果显示SE组小鼠海马GFAP免疫反应强度显著高于对照组(P<0.01),而在SE后给予MK-801阻断NMDA受体则显著抑制了SE诱导的海马星形胶质细胞活化。与免疫组化结果一致,Western Blot结果显示SE组小鼠海马GFAP蛋白表达水平显著高于对照组(P<0.05),而在SE后给予MK-801阻断NMDA受体则显著抑制了SE诱导的海马GFAP蛋白表达水平的升高。同时我们的研究结果发现,SE组小鼠海马CREB蛋白磷酸化水平显著高于对照组,而阻断NMDA受体则显著抑制了SE诱导的海马CREB蛋白磷酸化。结论:匹罗卡品癫痫小鼠持续状态7 d后海马星形胶质细胞被显著活化,而这一活化过程依赖于NMDA受体的激活。同时,海马星形胶质细胞活化的过程伴随CREB的磷酸化,提示海马CREB磷酸化参与了NMDA受体介导的匹罗卡品癫痫小鼠星形胶质细胞活化过程。

脑动脉微栓子对APP／PS1双转基因小鼠脑星形胶质细胞活化和神经元凋亡的影响

目的建立APP／PS1双转基因叠加脑梗死阈值下脑动脉微栓子的小鼠模型，进一步探讨脑梗死阈值下脑动脉微栓子对阿尔茨海默病的神经损伤叠加机制。方法将实验动物分为野生型小鼠对照组（n=12），APP／PS1双转基因小鼠假手术组（n=12）和APP／PS1双转基因小鼠叠加微栓子组（n=12），微栓子组经左侧颈内动脉注入25-50μm大小的全血凝块微栓子100个／300μL，假手术组和对照组注入等量的生理盐水，造模后3d和7d，HE染色观察有无梗死灶，TUNEL染色检测神经细胞的凋亡，GFAP免疫组化检测星形胶质细胞的激活。结果3组小鼠HE染色均未发现缺血梗死灶，脑梗死阈值下微栓子模型造模成功。凋亡细胞阳性率和GFAP表达阳性细胞数，对照组〈假手术组〈微栓子组，3组两两比较有统计学意义（P〈0．001）；并且在微栓子组，凋亡细胞和GFAP阳性表达随着时间的延长而增加，7d组较3d表达更多，差异有统计学意义（P〈0．001）。结论脑梗死闯值下的微栓子，虽未导致脑梗死，但可以促进APP／PS1双转基因小鼠脑胶质细胞的激活，诱发并加重AD的炎症反应进程，促进神经细胞凋亡。

慢病毒介导星形胶质细胞活化基因-1沉默对葡萄膜黑色素瘤生物学行为的影响

目的探讨星形胶质细胞活化基因-1（AEG-1）对葡萄膜黑色素瘤（UM）生物学行为的影响。方法培养不同侵袭转移潜能的MUM-2B和MUM-2C细胞系，根据AEG-1基因序列设计出有效RNA干扰（RNAi）靶点序列及RNAi阴性对照scramble序列进行慢病毒载体的制备和病毒包装。在2株细胞系中，经AEG-1-RNAi慢病毒感染的细胞作为慢病毒感染组，空白慢病毒载体感染的细胞作为阴性对照组，未处理的细胞作为正常对照组。采用Real-time PCR、Western blot法分别检测各组细胞中AEG-1转录水平和蛋白表达水平；采用MTT法、Annexin V-APC法、细胞侵袭试验和细胞Transwell试验检测慢病毒介导AEG-1沉默对人UM细胞系生物学行为的影响。结果成功制备RNAi慢病毒载体而进行病毒包装，然后分别转染对数生长期的MUM-2B、MUM-2C细胞系，2株细胞系中的正常对照组、阴性对照组和慢病毒感染组间细胞中AEG-1 mRNA相对表达量总体比较差异均有统计学意义（F=130.02，P<0.01；F=144.17，P<0.01）。在MUM-2B细胞系中和MUM-2C细胞系中，染组较阴性对照组AEG-1 mRNA相对表达量分别下降约77.1%和79.8%，差异均有统计学意义（均P<0.01）；正常对照组与阴性对照组细胞中AEG-1 mRNA相对表达量比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）。Western blot法检测结果显示，AEG-1蛋白表达水平在2株细胞系中的各组比较，差异均有统计学意义（F=146.17，P<0.01；F=156.79，P<0.01），其中慢病毒感染组较阴性对照组蛋白相对表达均显示下调，差异均有统计学意义（均P<0.01）。MTT法检测发现，2株细胞系实验第2～5天，慢病毒感染组细胞增生倍数较阴性对照组明显下降，差异均有统计学意义（t=5.78、30.68、23.99、29.40，均P<0.01；t=7.88、7.09、5.56、6.60，均P<0.01）；Annexin V-APC法检测发现，2株细胞系中慢病毒感染组凋亡率明显高于阴性对照组，差异均有统计学意义（t=54.34，P＜0.01；t=11.68，P＜0.01）；细胞侵袭试验发现，在2株细胞系中慢病毒感染组侵袭倍数明显低于阴性对照组，差异均有统计学意义（t=16.04，P＜0.01；t=13.98，P＜0.01）；细胞Transwell试验发现，在2株细胞系中慢病毒感染组转移倍数均明显低于阴性对照组，差异均有统计学意义（t=12.04，P＜0.01；t=22.43，P＜0.01）。结论慢病毒介导AEG-1沉默后，通过抑制UM细胞AEG-1的转录水平和蛋白表达水平，从而改变UM细胞的生物学行为，一定程度上减缓细胞增生，促进细胞凋亡并降低细胞侵袭和转移的能力。

星形胶质细胞活化基因-1(AEG-1)在葡萄膜黑色素瘤中的表达及其与临床组织病理学的关系

目的研究葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UM)组织中星形胶质细胞活化基因-1(astrocyte elevated gene-1,AEG-1)的表达及其与临床组织病理学的关系。方法收集北京同仁医院眼科2013年1月至2017年5月,经眼科病理室确诊为UM且临床资料完善的50例患者(50眼)UM石蜡组织标本为实验组,11例(11眼)因外伤行眼球摘除但大部分葡萄膜组织正常的石蜡组织标本为对照组。应用免疫组织化学法检测所有石蜡标本中氉AEG-1的表达,并分析UM临床病理学特征与AEG-1的相关性。结果 AEG-1蛋白染色呈粉红色或者红色,主要定位于UM核周、细胞浆和细胞膜。实验组中,AEG-1阴性表达21眼(42.0%),阳性表达29眼(58.0%);对照组中AEG-1均呈阴性表达,两组AEG-1表达比较差异有显著统计学意义(P=0.000),提示AEG-1在UM中高表达。在实验组中,当UM患眼存在临床组织病理学高危因素时,即存在肿瘤累及睫状体、虹膜新生血管生成、肿瘤基底最大直径>16 mm、肿瘤高度>8 mm、肿瘤细胞为混合细胞型、肿瘤细胞属于上皮样或混合细胞型、肿瘤眼外生长的患者,其AEG-1阳性表达率分别为73.1%、73.9%、95.2%、82.4%、83.3%、74.1%、69.4%,明显高于非高危因素患者,以上各特征组AEG-1表达比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。而患者性别、眼别、年龄、累及视盘与否、继发视网膜脱离与否、上皮样细胞型、侵犯巩膜导管与否组AEG-1表达差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 AEG-1在UM组织中高表达,且与UM临床组织病理学多种高危因素呈显著相关性,提示AEG-1的高表达有可能成为判断UM患者预后的重要指标之一。

抑制星形胶质细胞活化:氯胺酮在脊髓镇痛作用中的新机制?

氯胺酮作为一种静脉麻醉药，由于其具有显著的镇痛作用而多被作为一种麻醉性镇痛药用于治疗神经病理性痛以及癌性痛等。尽管镇痛疗效很确切，但作用机制却不完全清楚。近年来，越来越多的研究开始关注星形胶质细胞在神经病理性痛中的作用，而且体外研究也证实脂多糖（LPS）诱导的星形胶质细胞的活化能够被氯胺酮所抑制。

小续命汤对急性脑缺血再灌注损伤星形胶质细胞活化的影响

探讨小续命汤对脑缺血再灌注损伤后星形胶质细胞活化的影响。采用大脑中动脉闭塞法建立脑缺血再灌注损伤模型,应用星形胶质细胞活化抑制剂氟代柠檬酸(FC)抑制星形胶质细胞活化。将大鼠随机分成假手术组、模型组、小续命汤组、小续命汤+FC组、小续命汤+Vehicle组,观察各组大鼠脑缺血再灌注24 h后的神经行为学变化和脑梗死情况,HE染色观察组织病理学变化,透射电镜观察星形胶质细胞亚显微结构,免疫荧光测定胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、血小板反应蛋白1(TSP1)荧光强度,免疫印迹法测定脑组织GFAP、TSP1的表达。结果显示,模型组大鼠神经行为评分、脑梗死面积显著增加,小续命汤组、小续命汤+FC组和小续命汤+Vehicle组均可减轻大鼠神经行为学改变;模型组大鼠病理改变明显,小续命汤组、小续命汤+FC组和小续命汤+Vehicle组大鼠脑缺血再灌注损伤较轻;模型组大鼠星形胶质细胞亚显微结构肿胀明显,小续命汤组、小续命汤+FC组和小续命汤+Vehcile组可保护星形胶质细胞亚显微结构;模型组GFAP、TSP1荧光强度及蛋白表达量较假手术组表达增加,小续命汤组、小续命汤+FC组和小续命汤+Vehicle组均可下调GFAP、TSP1的表达,小续命汤与FC联用效果更明显。以上结果表明小续命汤可以改善脑缺血再灌注损伤,可能与通过抑制星形胶质细胞活化并下调GFAP、TSP1的表达有关。

氢对脓毒症相关性脑病小鼠海马A1型星形胶质细胞活化的影响

目的评价氢对脓毒症相关性脑病(SAE)小鼠海马A1型星形胶质细胞活化的影响。方法清洁级健康雄性C57BL/6J小鼠164只,6~8周龄,体重20~25 g。采用随机数字表法分为4组(n=41):假手术组(Sham组)、假手术+氢气组(Sham+H2组)、SAE组和SAE+氢气组(SAE+H2组)。采用盲肠穿孔结扎法制备SAE模型。Sham+H2组和SAE+H2组分别于术后1和6 h时吸入2%氢气1 h。每组取20只小鼠,观察术后7 d生存率。于术后12 h处死其余小鼠,取脑组织,光镜下观察海马CA1区病理学结果,计算异常神经元比率;TUNEL法确定神经元凋亡率;采用免疫荧光染色法检测海马胶原纤维酸性蛋白(GFAP)与补体C3共表达情况;采用Western blot法测定海马C3表达水平,采用ELISA法检测海马TNF-α、IL-6、高迁移率族蛋白1(HMGB1)含量;于术后7 d,每组取6只小鼠行Y迷宫新异臂探索实验。结果与Sham组比较,SAE组术后7 d生存率降低,海马CA1区异常神经元比率和神经元凋亡率升高,TNF-α、IL-6、HMGB1含量升高,C3表达上调,GFAP/C3共表达细胞计数增多,新异臂探索时间缩短,偏好指数降低(P<0.05)。与SAE组比较,SAE+H2组术后7 d生存率升高,海马CA1区异常神经元比率和神经元凋亡率降低,TNF-α、IL-6、HMGB1含量降低,C3表达下调,GFAP/C3共表达细胞计数减少,新异臂探索时间延长,偏好指数升高(P<0.05)。Sham组和Sham+H2组各项指标比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论氢改善脓毒症小鼠SAE的机制可能与抑制海马A1型星形胶质细胞活化有关。

中枢神经系统中星形胶质细胞活化机制的研究进展

星形胶质细胞在中枢神经系统(CNS)中含量丰富,对神经元起着支持、营养、修复等多种重要作用。在CNS损伤或外源性物质作用时,星形胶质细胞发生活化。JAK-STAT3、核因子κB(NF-κB)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、TGF-β/Smad等多条信号通路共同作用,调节星形胶质细胞内相应基因的转录与表达。探究星形胶质细胞活化的机制,对深入理解CNS疾病的发生发展有着重要意义,但这一领域研究仍有许多未知与不足。文中综述近年CNS中星形胶质细胞活化机制的研究进展,阐述星形胶质细胞活化的可能机制,以期对该领域研究做归纳总结并为将来的研究提供新的依据和方向。

星形胶质细胞活化在视神经损伤中的研究进展

视神经是视觉传入中枢的唯一通路,主要细胞成分包括神经节细胞和神经胶质细胞。星形胶质细胞(AS)是一种存在于中枢神经系统(包括视神经)的神经胶质细胞,生理状况下起着支持神经细胞、清除代谢产物的功能。由于影响因素的差异,AS活化可以分为具有神经毒性的A1型AS活化和具有神经保护作用的A2型AS活化。因此管理AS活化途径对视神经损伤后减少视神经元凋亡以及促进神经轴突再生有着潜在的价值。本文将从AS的基本生理功能出发,围绕这2种不同类型的AS活化,对其活化机制、诱导因素以及应用价值进行综述,以期为视神经损伤的治疗提供新的思路及方向。

星形胶质细胞在缺血性脑卒中的活化及常见的信号通路

缺血性脑卒中发生后,炎症反应、氧化应激、兴奋性毒性和细胞凋亡等一系列病理过程导致严重的脑损伤。缺血后星形胶质细胞活化并极化为两种不同的功能表型,即神经毒性A1型和神经保护性A2型。通过调节星形胶质细胞的活化及A1/A2型极化表型,既可以减少神经毒性,又可以加强神经保护作用,从而减轻缺血性脑卒中造成的脑损伤。缺血区星形胶质细胞的激活与极化机制复杂,涉及多条信号通路。本综述总结了参与星形胶质细胞活化与极化的常见信号通路,为缺血性脑卒中的深入研究及潜在治疗靶点提供参考。

星形胶质细胞在脊髓损伤修复中的作用

脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）的发病率为（233．755）／百万，年发病率为（10．4—83）／百万,而我国也是SCI高发国家，SCI患者给家庭和社会带来了沉重的负担。SCI后的病理生理机制复杂．星形胶质细胞活化和分泌的神经抑制因子以及胶质瘢痕的形成均阻碍了脊髓神经功能的修复与重建。笔者就SCI后星形胶质细胞在胶质瘢痕形成及脊髓神经功能修复中的作用进行综述。

激活星形胶质细胞KATP通道对抗MPP＋所致神经元的损伤作用

目的：研究星形胶质细胞上ATP敏感性钾通道（ATP—sensitive potassium channel，KATP）在神经损伤中的重要作用。方法：将源自Kir6．2基因敲除（Kir6．2-/-）小鼠和野生型（Kir6．2＋/＋）小鼠原代培养的中脑神经元和星形胶质细胞共培养，应用神经毒素MPP＋建立离体神经损伤模型，应用免疫荧光、免疫细胞化学和westernblot等方法研究共培养体系中，MPP-对星形胶质细胞通道亚基Kir6．1表达、星形胶质细胞活化、胶质递质D．serine及其合成酶丝氨酸消旋酶（serineracemase，SR）表达，以及神经元数目及形态的影响。

星形胶质细胞在中枢神经系统疾病中的作用

星形胶质细胞起源于神经外胚层,是中枢神经系统内数量最多,分布最广泛的胶质细胞,具有许多重要的功能,包括参与血脑屏障(blood-brain barrier, BBB )的形成、细胞外环境的维护、脑血流量调节、细胞通讯的稳定、神经递质合成和抗氧化应激的作用等。当中枢神经系统受到不同程度与形式的损伤和病变,如感染、颅脑损伤、中风、神经退行性疾病等,均会导致星形胶质细胞活化,对中枢神经系统起到保护和损伤的双重作用。