红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)耐低温性状和生长性状遗传参数评估

采用人工控温的方式,对构建的31个F1红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)全同胞家系开展低温胁迫实验,获得耐低温性状低温累计存活时间(CDH),基于混合线性模型分别开展耐低温性状和生长性状遗传参数评估,对每一性状是否需要考虑共同环境效应所构建的两种模型进行似然比检验。结果显示,经似然比检验,最终选用模型A和模型BF进行耐低温和生长性状遗传评估;耐低温性状CDH遗传力为(0.27±0.08),属于中等遗传力;体重BW遗传力为(0.36±0.13),属于中等遗传力,体长BL遗传力为(0.14±0.06),属于低等遗传力,经检验,遗传力估计值均达到极显著水平(P<0.01)。CDH和体重、体长的遗传相关分别为(–0.40±0.22)和(–0.44±0.24),表型相关分别为(–0.09±0.06)和(–0.16±0.05),均为负相关;体重和体长之间的遗传相关为(0.92±0.05),表型相关为(0.80±0.02),呈正相关且结果极显著(P<0.01)。研究结果表明,红鳍东方鲀的耐低温性状和生长性状都具有较好的改良潜力,考虑到两性状间存在负遗传相关,在开展耐低温选育时,对首先不同性状进行品系选育,然后利用品系间杂交培育出耐高温、生长快的新品种。该项研究首次完成了红鳍东方鲀耐低温性状的遗传参数评估,为制订红鳍东方鲀耐低温选育育种规划提供了理论依据。

丁香油对红鳍东方鲀幼鱼血液生化指标的影响

通过研究丁香油对红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)幼鱼血液生化指标的影响,为分析其麻醉机理及使用安全性奠定基础。分别用8、16、24 mg·L^(-1)浓度的丁香油溶液,对红鳍东方鲀幼鱼进行麻醉处理,在麻醉后1/4、4、8、24 h以及复苏后24 h,对鱼体血糖(GLU)、血清中总蛋白(TP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆红素(T-BIL)、尿素氮(BUN)等血液生化指标和血清溶菌酶(LZM)活性进行测定。结果显示,丁香油麻醉对红鳍东方鲀幼鱼的多项血液生化指标以及血清溶菌酶活性均产生了显著影响,且该影响在高麻醉浓度下更显著。经丁香油麻醉及复苏24 h后,大部分的幼鱼血液生化指标与血清溶菌酶活性与未麻醉前不同。该试验得出了适宜红鳍东方鲀幼鱼运输和操作的丁香油浓度范围,为丁香油麻醉红鳍东方鲀幼鱼提供理论依据。

海水池塘半滑舌鳎-日本对虾-菊黄东方鲀混养试验

为全面推广半滑舌鳎养殖技术,提高海水池塘养殖效益,进行了不同规格半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)与日本对虾(Penaeus japonicus)和菊黄东方鲀(Takifugu flavidus)的池塘混养对比试验,其中半滑舌鳎放养密度2250尾/hm^(2),放养规格分别为150~250、5~10、20~50 g/尾,日本对虾放养密度6万尾/hm^(2),菊黄东方鲀放养密度6000尾/hm^(2),规格0.54~0.56 g/尾。结果显示,放养规格不小于150 g/尾的半滑舌鳎高雌苗种,当年可收获规格500 g/尾以上的商品鱼,实现综合产量2801.0 kg/hm^(2),综合效益99404元/hm^(2)。

星点东方鲀胚胎发育的观察

为探讨星点东方鲀(Takifgu niphobles)作为海水鱼遗传生物学和鱼类行为学研究实验动物的可行性提供科学依据,选取北戴河海域自然成熟的星点东方鲀亲鱼,经人工催产授精,受精卵在水温20. 0～21. 0℃条件下,于300 L玻璃钢水槽循环水中孵化。参考暗纹东方鲀(Takifugu obscure)、青鳉(Oryzias layioes)和斑马鱼(Barchydanio rerio var)胚胎发育分期形态指标,按分裂球数目、大小,胚盘形状、延展、下包,神经系统发育,体节数目,视觉和听觉器官的发育以及血液循环系统的不同发育阶段,记录了星点东方鲀完整的胚胎发育过程。研究结果表明,星点东方鲀受精卵卵径约为756～863μm,胚胎发育可分为33期,主要分期与对应时间点为:2细胞期:受精后1 h 40 min;囊胚期:受精后8 h 6 min;原肠期:受精后13 h 48 min;心脏原基期:受精后58h 45 min;孵化期:受精后99 h 31 min;初孵仔鱼期:受精后108 h 31 min。值得注意的是,在32细胞期,观察到了与青鳉相同的边缘细胞和部分水平分裂。本实验中的星点东方鲀卵径在东方鲀属鱼中是最小的,也明显小于日本的星点东方鲀。本研究星点东方鲀胚胎发育不仅快于暗纹东方鲀和红鳍东方鲀(Takifgu rubripes),而且大大快于日本种群。

利用高分辨熔解曲线快速鉴定红鳍东方鲀与星点东方鲀

为了通过DNA软件分析河鲀鱼保守序列,试验设计了河鲀鱼扩增引物,首次建立了利用高分辨熔解曲线方法快速鉴定红鳍东方鲀与星点东方鲀。结果表明:该方法不仅可以快速鉴定河鲀鱼,而且可以通过高分辨熔解曲线区分红鳍东方鲀与星点东方鲀,正确率为100%。

温度和白消安对星点东方鲀成鱼生殖细胞枯竭的影响

为了解高温和白消安注射对星点东方鲀(Takifugu niphobles)成鱼生殖细胞发生的影响,设置32℃高温组、32℃高温-白消安组和空白对照组,比较3组的生长、存活率以及生殖细胞凋亡情况。结果显示,高温-白消安组的体重、肥满度显著低于其他组(P<0.05),而全长与其他各组差异不显著(P>0.05),各组的存活率均在90.9%以上。高温-白消安组对生殖细胞的凋亡作用比高温组更加明显,卵巢基本看不到正常的生殖细胞,且有大量的吞噬作用造成的黄褐色沉积,生殖细胞凋亡造成的空白面积比例要显著地高于高温组(P<0.05);精巢中生殖细胞凋亡的精小囊占总的精小囊的比例高达100.0%±0.0%,也显著高于高温组空泡精小囊占总的精小囊的比例(P<0.05)。得出结论:高温-白消安组较高温组更易诱导星点东方鲀内源生殖细胞凋亡,从而可制备出生殖细胞移植的适宜受体。

光照周期对红鳍东方鲀雌鱼繁殖调控的初步研究

光周期是鱼类季节性繁殖最可靠的环境信号。红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)是一种春季产卵鱼类,具有非常高的经济价值。为了探究光周期调控对红鳍东方鲀成熟产卵时间的影响,在循环水养殖条件下开展了本研究。将90尾亲鱼随机分配至加速组和自然组。自然组亲鱼在3月产卵,而加速组亲鱼在1月产卵,最早产卵时间提前约2个月。结果表明,加速光周期季节变化速率能够促进红鳍东方鲀性腺成熟。光周期调控方法能够应用于红鳍东方鲀全年繁殖调控。

影响红鳍东方鲀生长性状的候选基因及其SNP的研究进展

文章归纳了目前已被挖掘的与红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)生长性状相关的候选基因以及相关的SNP位点的研究进展。

红鳍东方鲀体表溃烂病优势菌的分离、鉴定及治疗

2021年11月,辽宁大连某养殖场红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)出现死亡。通过对患病红鳍东方鲀病灶部位进行细菌分离培养、细菌革兰氏染色、以及细菌16S rDNA序列分析,从患病红鳍东方鲀中共分离出3株优势菌且均为弧菌,分别为哈维弧菌(Vibrio harveyi)、大菱鲆源弧菌(V.scophthalmi)、费氏弧菌(Aliivibrio fischeri)。药敏检测结果表明,费氏弧菌对复方新诺明、氟苯尼考、多西环素3种抗生素敏感;大菱鲆源弧菌仅对恩诺沙星敏感;哈维弧菌对环丙沙星、复方新诺明、氟苯尼考、多西环素、恩诺沙星5种抗生素敏感。3种优势菌对16种抗生素的药物敏感实验结果表明3种优势菌均为多重耐药菌。结合药敏实验结果与相关研究,推荐联合多西环素与山苍子植物精油对红鳍东方鲀体表溃烂病进行防治。

红鳍东方鲀“海陆接力”前后管理及运输关键点

对红鳍东方鲀(Takifugu rubripus)“海陆接力”养殖模式中,运输前后的管理方法和运输的关键点,进行了详细的介绍,包括红鳍东方鲀运输入海前的工厂化越冬管理、红鳍东方鲀剪齿的注意事项、操作过程、剪齿后的管理方法、运输集港和运输途中的注意事项和运输至网箱养殖的恢复阶段管理方法。

红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)Vtg基因实时荧光定量PCR分析的引物设计与评估

为应用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)卵黄蛋白原(Vitellogenin,Vtg)基因的组织表达谱,利用Primer5.0软件设计了扩增红鳍东方鲀Vtg基因片段的引物并进行了qPCR评估。结果显示:引物对VtgF-VtgR在qPCR扩增时,熔解曲线为单一尖锐峰;标准曲线分析显示:引物的扩增效率为105.32%,R^2值为0.999。上述结果说明该对引物具有良好的扩增特异性和扩增效率,满足了qPCR扩增的要求。

红鳍东方鲀两个群体的遗传结构及与经济性状的相关性分析

本文利用21对多态性微卫星标记对河北省红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)良种场引进的日本群体和选育的秦皇岛群体进行了遗传结构分析。日本与秦皇岛两个群体的有效等位基因数分别为3.3697和2.8593,期望杂合度分别是0.6516和0.6073,多态信息含量分别是0.6009和0.5509。研究结果表明这两个群体遗传多样性较高,多态信息含量丰富,具有较大的遗传改良和育种潜力。同时,本文通过对21个微卫星座位与日本群体的体长、体重和体高三个经济性状进行最小二乘方差分析,得到6个与经济性状显著相关的微卫星标记,f161、f273与体重显著相关(P<0.05),f170、f501与体长显著相关(P<0.05),而f53、f331与体高显著相关(P<0.05)。对同一标记不同基因型间进行多重比较,找到与4种性状相关的基因型。

暗纹东方鲀致病性维氏气单胞菌的分离鉴定

从濒死的暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)体内分离到一株优势菌株,经形态观察、生化、16 S rDNA聚合酶链式反应(PCR)以及人工感染健康暗纹东方鲀和ICR小鼠等试验可知,该菌对小鼠和暗纹东方鲀半数致死量(LD50)分别为2.26×106CFU/mL、5.96×104CFU/mL;其16 S rDNA序列与维氏气单胞菌具有高度的同源性,根据该菌的形态特征、生理生化特性,初步鉴定该菌为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii),命名为NT-HV。选择9种水产常用药物进行药敏试验,结果显示该菌对氟苯尼考、复方新诺明、新霉素、氧哌嗪青霉素敏感,对养殖场常用的四环素、强力霉素、羧苄青霉素、氨苄青霉素不敏感,提示在药物的使用过程中应注意药物的浓度和合理轮换。

暗纹东方鲀血细胞发生的观察

通过对暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)血液涂片及头肾、体肾、脾脏和肝脏四种脏器印片的光镜观察,发现血细胞的发育大致经过三个阶段,即原始阶段、幼稚阶段、成熟阶段。实验对不同发育阶段的红血细胞、淋巴细胞、单核细胞、粒细胞进行了观察和测量,并对暗纹东方鲀血细胞的发生过程做了初步探讨。实验结果表明暗纹东方鲀血细胞的发育主要在头肾和体肾,肝脏印片未观察到原始造血细胞,提示肝脏可能不是暗纹东方鲀的造血器官。

暗纹东方鲀胚胎发育的观察

采用连续观察法对暗纹东方鲀（TakifuguObscurus）人工授精的受精卵的发育进行观察，详细记录了暗纹东方纯胚胎发育各阶段的形态特征。结果显示：经人工催产所获得的暗纹东方纯受精卵为圆形，鹅黄色且透明，平均卵径为1．118—1．274mm，受精卵在水温21oC±0．5℃下，受精3h10min后开始第1次卵裂，受精后40h30min开始形成器官，受精后131h15min开始孵出仔鱼。刚孵出的仔鱼全长（2．550±0．675）mm，肌节26—28对，卵黄囊大而侧扁，长径为（1．014±0．075）mm，短径为（0．904±0．095）mm。整个胚胎发育过程可划分为33个时期。

红鳍东方鲀精子超低温保存前后的超微结构观察

应用透射电镜技术,研究超低温保存前后红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)精子的超微结构。观察发现,受冷冻损伤精子的被膜膨胀、破裂、脱落;线粒体内嵴变形,结构模糊,甚至消失;鞭毛在基部或主段、末段断裂,或被膜膨胀脱落。结果表明,经超低温保存后,部分红鳍东方鲀精子由于膜结构及鞭毛轴丝损伤导致精子活力下降。

暗纹东方鲀生长性状相关微卫星标记筛选

为了筛选与暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)生长相关的分子标记,作者采用SSR结合BSA技术对同龄孵化群体的同池养殖暗纹东方鲀生长差异性状标记进行筛选。利用85对微卫星引物对暗纹东方鲀生长快、慢各30尾个体构建的两个基因池进行分析,共筛选到14个差异位点。然后分析这14个差异微卫星位点在这60个暗纹东方鲀个体中的基因型差异,结果表明:位点TOP03、TOG01、fms15、fms75与生长性状呈现极显著负相关关系(P<0.01),fms89与生长性状呈现极显著正相关关系(P<0.01)。用另外30个个体(生长快慢各15个)进行验证实验后,结果只有位点fms15、fms75与生长性状显著相关,相关系数分别为–0.411和–0.384。这两个微卫星位点对于暗纹东方鲀生长性状有显著效应,为开展暗纹东方鲀的分子标记辅助育种提供了有价值的参考标记。

暗纹东方鲀Amhr2基因外显子9的SNP7271检测及其与性别相关分析

利用传统PCR和ABI 3730测序技术对暗纹东方鲀(Takifugu obscurus)Amhr2基因外显子9进行了SNP7271检测和测序分析,并对该SNP位点与暗纹东方鲀性别相关性进行了研究。结果显示,在SNP7271位点发生了G/C碱基突变,产生了CG、CC两种基因型。SNP7271和暗纹东方鲀性别存在显著相关性(P<0.01)。基因型为CG的个体生理性别为雄性,基因型CC的个体生理性别为雌性。

主要营养素源组合对暗纹东方鲀生长、消化吸收和水环境的效应

为探讨主要营养素源组合对暗纹东方鲀（Takifugu obscures）（172.87g±6.71g）生长、消化吸收和水环境的影响和效应,作者采用3×2×2三因素设计,蛋白质水平—43%、40%、37%,分别以P43、P40、P37表示,脂肪水平——10%、7%,分别以L10、L7表示;蛋白源鱼粉水平——高鱼粉（49%～55%）、低鱼粉（39%～45%）,分别以FH、FL表示,形成12种试验处理组（1#-12#）饲粮。试验期77 d。结果表明：1#（P43L10FH）、9#（P40L10FL）增质量率和饲料系数最优,显著或明显优于较好的3#（P40L10FH）、11#（P37L10FL）和7#（P43L10FL）,9#饲料系数较3#显著降低28.3%;低鱼粉组（9#、11#、7#）显著提高胰蛋白酶和肠脂肪酶活性,9#其活性较1#分别显著提高21.09%、14.39%;高脂肪极显著提高吸收酶活力（P〈0.01）,且具有增强多数消化酶活力的趋势;高鱼粉组和低鱼粉高蛋白组的氨氮、亚硝酸氮、磷酸盐相对浓度变化呈现普遍高于其他低鱼粉组的趋势或特征,以11#、9#、7#、1#相对较低,11#、9#氨氮浓度较3#分别显著降低73.97%、58.75%;9#、11#、1#亚硝酸氮、磷酸盐浓度不同程度极显著降低（P〈0.01）;高脂肪有降低磷酸盐和COD的趋势。总之,本研究值得关注的新发现是：低鱼粉组9#、11#、7#饲粮分别显著或明显提高生长、消化性能,并显著改善水生态环境,营养素源组合正效应突出,不仅节约鱼粉资源,且饲粮组成更经济,具有重要理论和应用价值。

饥饿及恢复投喂对菊黄东方鲀生长和血清生化的影响

为了解菊黄东方纯的补偿生长机制,发掘其生长潜力,在室内可控条件下,对体质量(128.23±16.67)g的菊黄东方纯进行饥饿0 d(对照)、5 d(F5)、10 d(F10)、15 d(F15)和随后恢复投喂25 d的处理,分别于饥饿开始前、饥饿结束及恢复投喂结束时进行采样,分析饥饿及恢复投喂对菊黄东方纯生长和血清生化的影响。结果显示:饥饿期间,F15组菊黄东方纯的体质量显著低于对照组和F5组(P<0.05);F10和F15组的增重率和特定生长率均呈负增长,差异不显著(P>0.05),但均显著低于F5组和对照组(P<0.05)。恢复投喂后,F15组的增重率和特定生长率显著高于对照组(P<0.05),各组试验鱼的平均体质量、总增重率和总特定生长率与对照组间均无显著差异(P>0.05),但F5组总增重率和总特定生长率较对照组分别提高了36.68%和34.09%。随着饥饿时间的延长,试验鱼的成活率呈下降趋势。受饥饿胁迫,试验鱼体内血糖、总蛋白、胆固醇、甘油三酯的含量呈下降趋势,饥饿至15 d时达显著水平(P<0.05);血清碱性磷酸酶和谷丙转氨酶无显著影响(P>0.05)。恢复投喂后,除F15组的血清甘油三酯含量显著低于对照组(P<0.05),F10组的血清胆固醇含量低于对照组(P<0.05)外,各处理组的血清生化指标与对照组之间均无显著差异(P>0.05)。研究结果表明,饥饿5 d的菊黄东方纯表现出超补偿生长能力.适当延长投饲间隔或减少投饲次数对提高养殖经济效益有积极作用。