映山红花总黄酮促进大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性H_(2)S的关系

目的探讨映山红花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)促大鼠脑血管内皮细胞体外形成血管作用及与VEGFR_(2)和神经源性硫化氢(H_(2)S)的关系。方法采用大鼠脑血管内皮细胞单独培养及和与海马神经元共培养,分别采用不同的实验方法检测细胞增殖、迁移、成管及H_(2)S含量和钙离子荧光强度,包括CCK-8法、细胞划痕法、Transwell法、基质胶成管、H_(2)S试剂盒及钙离子荧光探针法。结果在单独培养的大鼠脑血管内皮细胞上,H_(2)S供体NaHS(200μmol·L^(-1))和TFR(90、270、810 mg·L^(-1))对大鼠脑血管内皮细胞的增殖、迁移、成管及[Ca^(2+)]i荧光强度都有明显的促进作用。而VEGFR_(2)阻断剂SU5416(10μmol·L^(-1))可抑制TFR的促进内皮细胞增殖、迁移和形成血管及[Ca^(2+)]i荧光强度;在与海马神经元共培养的大鼠脑血管内皮细胞上,TFR显著地升高共培养中H_(2)S含量,并被CBS抑制剂AOAA(200μmol·L^(-1))抑制。与此同时,TFR明显地促进共培养中大鼠脑血管内皮细胞的形成血管作用,并可被AOAA和VEGFR_(2)阻断剂SU5416显著地抑制。结论TFR在体外可通过VEGFR_(2)升高[Ca^(2+)]i来促进脑血管内皮细胞形成血管,并可通过诱导神经元中CBS生成H_(2)S作用于大鼠脑血管内皮细胞的VEGFR_(2)来促进血管形成。

映山红花总黄酮对盐酸异丙肾上腺素诱导大鼠心肌缺血的保护作用

目的观察映山红花总黄酮(TFR)对盐酸异丙肾上腺素诱导的实验性心肌缺血的保护作用。方法采用皮下(sc)注射盐酸异丙肾上腺素(Iso)(8 mg.kg-1×2 d)诱导大鼠实验性心肌缺血模型,测定血清中MDA含量、GSH-PX活力、SOD及心肌组织中ATPase活性。同时行心肌组织病理组织学检查。结果TFR 30 mg.kg-1显著降低血清中MDA的生成,30,15 mg.kg-1及60,30 mg.kg-1升高SOD,GSH-PX的活力,60,30 mg.kg-1TFR可抑制心肌组织中Na+-K+-ATPase,Ca2+-Mg2+-AT-Pase,总ATPase活力的降低,TFR 60,30 mg.kg-1能显著改善sc Iso后心肌病理损伤程度,降低其病理损伤评分。结论TFR对盐酸异丙肾上腺素诱导的实验性心肌缺血有保护作用,其机制可能与减少体内自由基生成、改善心肌能量代谢有关。

不同花色映山红花中熊果酸和齐墩果酸的含量比较

结合超声技术提取不同花色映山红花中熊果酸和齐墩果酸,建立RP-HPLC法测定其含量。采用Kromasil C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.2%磷酸水溶液(88∶12),光电二极管阵列检测器,检测波长210nm,流速0.8mL/min,柱温30℃。以保留时间和紫外光谱对分离出的组分予以定性确证,用峰面积进行定量。组分的质量浓度与其峰面积在一定的范围内呈现良好的线性关系,相关系数均为0.9999,熊果酸进样量在0.443～7.088μg,齐墩果酸进样量在0.247～3.952μg时呈现良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.53%和98.36%,RSD分别为1.3%和1.5%(n=5)。方法灵敏、准确,重现性好,可用于不同花色映山红花中熊果酸和齐墩果酸含量的测定。

映山红花总黄酮对大鼠神经元及EA.hy926内皮细胞超极化作用及机制

目的:观察映山红花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)对大鼠海马神经元及EA.hy926内皮细胞膜超极化作用及机制研究。方法:体外培养大鼠海马神经元和EA.hy926内皮细胞,利用Di BAC_4(3)荧光染料在钙离子成像系统488 nm激发波长下检测EA.hy926和大鼠海马神经元荧光强度变化以反映膜电位改变情况。结果:与Control组比较,TFR(270 mg/L)和TFR(810 mg/L)能显著降低EA.hy926内皮细胞内荧光强度,即细胞发生了超极化现象,且BK_(Ca)特异性阻断剂Ib TX及联用IK_(Ca)阻断剂Ch TX和SK_(Ca)阻断剂apamin均能抑制TFR(270 mg/L)引起的荧光强度降低现象,而内源性硫化氢(hydrogen sulphide,H_2S)合成酶抑制剂DL-炔丙基甘氨酸(DL-propargylglycine,PPG)对这一超极化效应无显著影响;与Control组比较,TFR(270 mg/L)和TFR(810 mg/L)也能显著降低大鼠海马神经元荧光强度,且Ib TX能抑制TFR(270 mg/L)引起的荧光强度降低现象。结论:TFR可引起大鼠海马神经元和EA.hy926细胞膜超极化,其作用机制可能与激活细胞膜上钙激活钾通道(Ca^(2+)-sensitive K^+ channels,K_(Ca))有关。

映山红花总黄酮阻断Rho激酶促进大鼠冠状动脉舒张作用的机制

目的:探讨映山红花总黄酮(total flavones of rhododendra,TFR)阻断Rho激酶促进大鼠冠状动脉舒张作用的机制。方法:用siRNA技术分别制备ROCK1-siRNA和ROCK2-siRNA大鼠,Western-blot测定冠状动脉组织中ROCK1和ROCK2,用微血管张力法测定冠状动脉血管张力,用Y27632和TFR检测正常血管和干扰后血管的舒张功能。结果:与Control组比较,ROCK1-siRNA组中ROCK1和ROCK2-siRNA组中ROCK2表达明显降低,而Negative siRNA和Transfection reagent组中ROCK1和ROCK2表达无明显差异,即siRNA干扰技术能有效降低冠状动脉组织中ROCK1和ROCK2表达;与溶媒组比较,TFR和Y27632能引起干扰后的血管产生舒张作用,而与正常组比较,TFR和Y27632显著减弱干扰后的血管的舒张作用;TFR对ROCK2-siRNA转染的冠状动脉舒张作用的Emax高于ROCK1-siRNA转染的血管的Emax。结论:TFR对大鼠冠状动脉的舒张作用与阻断ROCK有关,并且可能选择性作用于ROCK1。

映山红花总黄酮对大鼠心肌细胞收缩性的影响及其机制

目的探讨映山红花总黄酮(TFR)对大鼠心肌细胞收缩性的影响及其可能机制。方法利用图像分析系统观察原代培养新生大鼠心肌细胞收缩幅度及收缩频率的变化,并用钙离子成像系统测定细胞内游离的Ca2+含量。结果10、100 nmol/L人尾加压素Ⅱ(h UⅡ)显著加快心肌细胞收缩频率,10 nmol/L h UⅡ可增强心肌细胞收缩幅度,但100nmol/L h UⅡ却降低心肌细胞收缩幅度; TFR 300 mg/L可显著地减慢大鼠心肌细胞收缩频率和增强心肌细胞的收缩幅度,TFR在33. 3～300 mg/L范围内,可明显地抑制100nmol/L h UⅡ诱导的心肌细胞收缩频率的增快、收缩幅度的降低及细胞内游离的Ca2+含量的增加。结论 TFR可减慢大鼠心肌细胞收缩频率,增强其收缩性,其作用可能与降低心肌细胞内游离的Ca2+含量有关。

基于PPARγ/STAT1通路探讨映山红花总黄酮对川崎病小鼠冠状动脉炎症及心肌损伤的影响

目的:观察映山红花总黄酮(TFR)对川崎病(KD)小鼠冠状动脉炎症的抑制及心肌损伤的影响。方法:选取48只BALB/C雄性小鼠腹腔注射1 mg/mL的干酪乳酸杆菌建立KD小鼠模型。将造模成功小鼠随机分为模型组、TFR低剂量(50 mg/kg)组、TFR高剂量(100 mg/kg)组、西药(阿司匹林250 mg/kg)组,各12只;另设对照组(12只)。给药期间,观察小鼠饮食、体质量等一般情况。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肌红蛋白(Mb)、肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察冠状动脉组织病理学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测小鼠冠状动脉组织过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、信号传导和转录激活因子1(STAT1)mRNA及蛋白表达情况。结果:与模型组比较,TFR低剂量组、TFR高剂量组和西药组小鼠体质量增加,血清TNF-α、IL-1β、IL-6、Mb、CK、CK-MB、PPARγ和STAT1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。与TFR低剂量组比较,TFR高剂量组和西药组小鼠体质量增加,血清TNF-α、IL-1β、IL-6、Mb、CK、CK-MB、PPARγ和STAT1 mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:TFR可调节KD小鼠炎性因子水平,减轻冠状动脉炎症反应,一定程度改善心肌损伤,可能与PPARγ/STAT1信号通路有关。

映山红花总黄酮减轻缺血性脑损伤的作用机制

研究映山红花总黄酮(total flavonoids of Rhododendra simsii,TFR)对大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠脑损伤和PC12细胞氧糖剥夺/复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤的作用,并探讨其潜在的作用机制。采用MCAO法建立大鼠局灶性缺血脑损伤模型,将雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、TFR用药组,MCAO处理后连续用药TFR(60 mg·kg^(-1))3 d。ELISA检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量;HE和TTC染色法分别观察脑组织的病理变化和脑梗死情况;RT-qPCR和Western blot分别检测脑组织中钙释放激活钙通道调节分子1(calcium release-activated calcium channel modulator 1,ORAI1)、基质相互作用分子1(stromal interaction molecule 1,STIM1)、基质相互作用分子2(STIM2)、蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase-3)mRNA水平及蛋白含量。建立PC12细胞OGD/R损伤模型,随机分为正常组、模型组、基因沉默组、TFR(30μg·mL^(-1))组、TFR(30μg·mL^(-1))+基因过表达质粒组。运用激光共聚焦显微镜和流式细胞仪分别检测PC12细胞内Ca^(2+)浓度和细胞凋亡率;基因沉默和基因过表达技术观察STIM-ORAI调控的钙库操纵性钙内流(store-operated calcium entry,SOCE)通路对TFR作用的影响。结果显示,TFR连续用药3 d后可显著减轻MCAO大鼠脑组织病理学损伤,降低血清中TNF-α、IL-1、IL-6的含量,下调MCAO大鼠脑组织中ORAI1、STIM1、STIM2、caspase-3基因表达水平,上调PKB基因表达;TFR可显著降低OGD/R诱导的PC12细胞内Ca^(2+)超载和细胞凋亡。而沉默ORAI1、STIM1、STIM2基因可产生类似TFR的作用。过表达这些基因,可以显著阻断TFR降低PC12细胞Ca^(2+)超载和凋亡的作用。结果表明,在局灶性脑缺血再灌注损伤早期和OGD/R诱导的PC12细胞损伤中,TFR减轻缺血性脑损伤的作用可能与其抑制STIM-ORAI调控的SOCE通路,降低Ca^(2+)超载,减少炎症因子表达和细胞凋亡有关。