阿帕替尼联合埃克替尼治疗EGFR基因21号外显子L858R突变型NSCLC的临床观察

目的探究对表皮生长因子受体(EGFR)基因21号外显子L858R突变型非小细胞肺癌(NSCLC)采用阿帕替尼联合埃克替尼治疗的临床效果。方法将EGFR基因21号外显子L858R突变型NSCLC患者101例按随机数表法分为观察组(n=51)与对照组(n=50)。观察组采用阿帕替尼联合埃克替尼治疗,对照组仅采用埃克替尼治疗,治疗时间为56 d,2个周期。比较2组近期疗效、不良反应,并采用K-M生存分析曲线图分析2组远期疗效。结果观察组与对照组的客观缓解率(ORR)(74.51%vs 74.00%)与疾病控制率(DCR)(92.16%vs 94.00%)差异均无统计学意义(P>0.05);治疗期间2组未出现2级以上不良反应,观察组高血压和蛋白尿发生率分别为52.94%、50.98%,分别高于对照组的16.00%、10.00%,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组生存率显著高于对照组(69.3%vs 43.1%),差异有统计学意义(P<0.05)。结论EGFR基因21号外显子L858R突变型NSCLC采用阿帕替尼联合埃克替尼治疗,可延长患者的无进展生存时间,不良反应的发生可接受。

甲磺酸伏美替尼一线治疗1例EGFR 20号外显子插入突变肺腺癌患者

随着基因组学、蛋白组学和分子生物检测技术的不断创新,晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的治疗模式逐渐多样化,已经从传统的化疗逐渐过渡到免疫治疗及靶向治疗。其中,以靶向酪氨酸激酶通路为靶点的分子肿瘤标志物在临床中发挥着越来越重要的作用。针对NSCLC患者表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变阳性,现阶段市面上已经有众多一线治疗药物上市,且均有较为明显的治疗效果。在中国患者中EGFR常见的变异位点位于19、20和21号外显子上,其中19和21号外显子突变是较为常见的突变类型,除此以外,EGFR突变还有一种亚型,被称为EGFR 20号外显子插入(EGFR exon 20 insertion,EGFR20ins)突变。我们针对1例EGFR20ins突变肺腺癌患者接受甲磺酸伏美替尼治疗进行总结,以期为临床诊疗提供有效借鉴。

肝细胞癌相关基因CTNNB1的3号外显子突变研究

目的探讨CTNNB1基因3号外显子突变与肝细胞癌(HCC)发生的相关性。方法收集100例HCC患者的肿瘤组织及配对远端正常组织样本200份,采用直接测序的方法筛选突变情况;免疫组化法对筛选到突变的患者检测其肿瘤及正常组织中CTNNB1基因编码蛋白(β-catenin)表达情况,并进一步分析CTNNB1基因3号外显子突变与患者临床病理特征之间的关系。结果 CTNNB1基因3号外显子错义突变3例(3%),分别引起第32、36位密码子编码氨基酸改变。免疫组化结果显示,3例突变患者的肿瘤组织中β-catenin蛋白表达明显强于配对正常组织(P<0.05)。CTNNB1基因3号外显子突变与患者临床病理特征未见显著相关性(P>0.05)。结论 CTNNB1基因3号外显子突变存在于HCC患者中,可能与HCC的发生相关。

肝豆状核变性患者ATP7B基因8、12号外显子突变的DNA分析

目的对肝豆状核变性(Wilson disease,WD)ATP7B基因的外显子8、12进行DNA测序分析并建立直接基因诊断方法。方法102例WD患者和82例对照正常人提取基因组DNA,PCR扩增ATP7B第8、12号外显子,8号外显子及12号外显子扩增产物分别行MspⅠ及Tail内切酶酶切分析;后对所有患者及对照组DNA外显子扩增产物行直接测序。结果102例WD患者,8号外显子35例存在MspⅠ酶切反应异常,测序示Arg778Leu纯合或杂合突变(占34.31%),其中12例伴Leu770Leu多态性;12号外显子13例存在Tail酶切反应异常,测序示Thr935Met杂合错义突变(占12.75%),1例存在Arg919Gly杂合错义突变,Arg952Lys在患者及对照组中均检出。结论ATP7B基因外显子8、12为WD突变热点,其中8号外显子以Arg778Leu、12号外显子以Thr935Met为主要突变形式,临床上可用PCR-MspⅠ酶切、PCR-Tail酶切反应作为WD患者初步筛选方法。

COMT基因第四外显子与帕金森遗传易感性关系的研究

目的:探讨研究人群儿茶酚胺氧位甲基转移酶(Catechol-O-Methyl Transferase,COMT)基因第四外显子G/A多态性与帕金森病(Parkinson Disease,PD)遗传易感性的相关性研究。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态方法,观察90例PD患者及95例健康对照个体COMT基因多态分布,通过其比值研究COMT基因变异与PD发作相关性。结果:①PD患者与正常人群之间存在COMT基因第四外显子G/A各等位基因频率分布的差异(P<0.05);相关分析提示PD与COMT基因第四外显子存在关联(P<0.05)。②按年龄分组后分析显示≤60岁组人群及>60岁组人群中均存在COMTG/A多态在PD患者与正常组的差异(P<0.05)。结论:研究结果未发现COMT基因G/A多态性与帕金森病遗传易感性具有相关性。

绵羊ras基因第一、二外显子的扩增及序列测定

对JSRV感染羊及健康绵羊H-ras、N-ras、K-ras基因第一、二外显子区克隆并测序,研究其变异状况。方法:本研究从JSRV感染羊及健康绵羊肺组织中提取基因组DNA,应用PCR技术扩增Hras、Nras、Kras基因第一、二外显子序列,并通过T-A克隆的方法将其克隆入pMD-18T载体中,鉴定为阳性的重组质粒进行序列测定分析。结果:与其他物种ras基因相比,所克隆的ras基因与其他物种之间的差异率较小,基本保守,且与牛的ras基因同源性最高。所克隆的H-ras、K-ras基因在第一、二外显子区域序列完全相同;N-ras第81位氨基酸A-V的不同;但试验中检测的2例JSRV感染羊与健康绵羊的ras无论是在核酸水平上,还是在氨基酸水平上均未发现突变。结论:克隆测序了绵羊ras基因第一、二外显子,为下一步实验奠定了基础。

非综合征性学语前聋患者肌球蛋白7a基因部分外显子突变的检测

目的 探讨中国人非综合征性学语前聋患者肌球蛋白 7a基因的突变频率和特性。方法 收集非综合征性学语前聋家系 34个 ,大部分来自湖南地区 ,共计 6 5例 ;散发患者 31例 ;健康对照组 10 0例。聚合酶链反应扩增肌球蛋白 7a基因的部分外显子 ,单链构象多态性分析初筛可疑突变者 ,发现异常构象带后再行DNA测序确定是否突变。结果 在 2个患者中检测出肌球蛋白 7a基因 7号外显子的 6 17号核苷酸G→A杂合突变 ,在同一家族的正常人中未发现该突变。该突变发生在肌球蛋白 7a分子的一个保守区段 ,可导致 2 0 6位上的精氨酸改变为谷氨酰胺 (R2 0 6Q )。结论 肌球蛋白 7a基因的R2 0 6Q突变很可能是导致非综合征性学语前聋的一个新突变 。

PCR扩增肺癌组织puma基因第四外显子的实验研究

目的探讨PCR扩增肺癌组织中puma基因第四外显子(GC含量76.44%)的最适实验条件.方法通过改变PCR反应体系各组分的浓度和反应条件,探讨PCR反应体系最适浓度和反应条件.结果PCR反应体系为dNTP200μmol/L,普通MgCl21.0mmol/L,引物500nmol/L,Taq DNA聚合酶0.1U/μL,模板量不低于4000ng,普通10×扩增体系缓冲液5μL,总体积50μL.反应条件为94℃预变性5min,94℃45s、61℃45s、72℃45s循环33次,最后72℃延伸5min.结论确立了puma基因第四外显子的PCR扩增条件,为后续的突变研究奠定了基础.

表皮生长因子受体19号外显子非经典突变肺腺癌1例

患者女性,65岁,无吸烟史,2016年3月出现咳嗽、咳痰。胸部CT示:右肺上叶见一大小3.8 cm×3.1 cm的团片样高密度影,病灶边缘欠清,其周围可见斑片样模糊影,其内可见扩张扭曲的支气管影,邻近胸膜局限性不均匀增厚。患者靶向治疗前:右肺下叶背段支气管截断术术后改变,两肺多发小结节及环状高密度影,考虑肿瘤转移。靶向治疗后:两肺小结节及环状高密度影较前减少(图1)。予抗炎、补液、止血等对症处理后,症状减轻。患者于2016年5月11日在全麻下行右上肺癌根治术,术中查见胸腔少许粘连,右上肺后段肿瘤大小5 cm×6 cm×7 cm,质硬,与中叶粘连。

非小细胞肺癌EGFR20号外显子插入突变的药物研究进展

EGFR20号外显子插入突变是EGFR罕见突变中最常见的一种,由于这类突变目前来说对EGFR-TKI原发耐药,临床预后差,且国际上无相关人群的大量临床试验研究,NCCN指南也无相应的治疗推荐,各个药物对此罕见突变患者的疗效至今仍然不清楚。该文将对该罕见突变的治疗药物的研究进展进行综述,并阐述常用药物的作用机制及相互作用,为携带EGFR20ins突变的晚期非小细胞肺癌患者合理选择治疗方案提供建议和药学指导。

EGFR/HER220号外显子插入突变型非小细胞肺癌靶向治疗的研究进展

近年来,随着驱动基因的不断发现和相应靶向药物的上市,开启了非小细胞肺癌(NSCLC)精准治疗的新纪元,尤其是人表皮生长因子受体(EGFR)基因常见突变及间变性淋巴瘤激酶重排的NSCLC患者,相应靶向药的问世给其生存期带来了质的飞跃。然而,部分罕见基因突变,如EGFR和人表皮生长因子受体2(HER2)20号外显子插入突变仍是肺癌治疗中最为棘手的问题,临床前研究及临床试验的不断更新,为此突变患者带来新的治疗希望,现就近年来EGFR/HER220号外显子插入突变靶向治疗的研究进展作一综述。

EGFR 20号外显子插入突变型非小细胞肺癌的治疗现况

基于表皮生长因子受体(EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的靶向治疗是携带EGFR突变型晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的一线靶向治疗。目前,针对EGFR 19号外显子缺失和21外显子点突变等常见位点突变的TKI靶向治疗取得了显著疗效。然而,10%~20%的NSCLC患者携带罕见的EGFR位点突变,这些罕见突变位点对EGFR TKI治疗常不敏感。EGFR 20号外显子插入突变(EGFR ex20ins)是最常见的EGFR罕见突变之一,由于其结构的特异性,传统的TKI治疗并不适用于该类患者,目前尚无针对EGFR ex20ins NSCLC的有效治疗方法。因此,该领域的研究值得高度关注。

3号外显子点突变对人PAX9蛋白结构的影响

目的 研究3号外显子不同的点突变对人PAX9蛋白结构的影响。方法 通过Pubmed和ClinVar数据库检索人PAX9基因3号外显子点突变的DNA和氨基酸序列信息,并对3号外显子突变位点影响的氨基酸序列在不同的物种及不同的PAX基因进行比对。应用Phyre2和RaptorX两个数据库对突变后的氨基酸序列进行蛋白三维结构的预测与分析。结果 人PAX9基因的3号外显子点突变影响的氨基酸位点高度保守。25、26、28、43、51、56、59、87、91、143号氨基酸参与Alpha helix二级结构的组成。6、73、80、136、143、145、168、172号氨基酸的位置有强的致病性。Gly6Arg和Pro20Leu的改变使PAX9蛋白的DNA结合区域的Alpha helix二级结构发生明显改变。其他氨基酸改变,可使PAX9蛋白的空间折叠和构象出现不同程度的变化。结论 3号外显子不同点突变导致的氨基酸变化会引起PAX9蛋白的结构出现不同的改变,这也可能是不同的PAX9突变导致的牙缺失或发育不全的表型不完全一样的原因。

产前诊断SMN1基因7、8号外显子缺失突变致脊髓性肌萎缩症1例

目的探讨SMN1基因7、8号外显子缺失突变致SMA的基因产前诊断结果及再生育指导。方法分析一例SMA家族史的产前诊断病例,利用高通量DNA测序法+STR连锁分析及多重连接探针扩增技术(MLPA)进行产前诊断及家系分析和验证。结果通过MLPA检测到父母均为SMN1基因7、8号外显子杂合缺失突变,胎儿产前诊断高通量测序结果为7号染色体q11.21处重复0.68 Mb区域,MLPA检测结果为SMN1基因7、8号外显子纯合缺失突变。结论脊髓性肌萎缩症是一种遗传性神经肌肉疾病,导致进行性肌肉无力和萎缩等临床症状,产前基因检测确诊有助于预后评估、干预,进而降低出征缺陷率,对于有先证者的家庭,常规染色体核型分析及高通量测序无异常,建议进一步进行MLPA基因诊断。对于此类家庭提供优生遗传指导,并为再生育给予相应的指导和建议。

非小细胞肺癌表皮生长因子受体20号外显子插入突变检测临床实践中国专家共识(2024版)

中国肺癌人群中约82%为非小细胞肺癌,表皮生长因子受体(EGFR)基因则是中国肺癌人群中最常见的驱动基因突变(51.7%~54.4%)。近年来靶向治疗特别是EGFR酪氨酸激酶抑制剂的快速发展及广泛应用显著提高了中国肺癌患者的生存时间及生存质量。EGFR基因20号外显子插入突变(EGFR ex20ins)在中国非小细胞肺癌患者中发生率约为0.3%~2.9%,居EGFR基因突变第3位,目前已有多个针对性靶向药物研发。然而EGFR ex20ins的变异类型众多,具有高度分子异质性,检测难度较高,临床检测需进一步规范。明确EGFR ex20ins检测临床意义、适用人群及不同检测方法优劣势,规范报告内容,对提高EGFR ex20ins检测准确性具有重要意义。针对EGFR ex20ins检测的实际问题,中国抗癌协会肿瘤病理专业委员会分子病理协作组和中国医师协会肿瘤多学科诊疗专业委员会结合国内外多中心研究及临床实践经验,组织专家讨论并制定了非小细胞肺癌EGFR ex20ins检测临床实践中国专家共识(2024版),以期指导临床EGFR ex20ins检测实践。

中国人肝豆状核变性ATP7B基因8号外显子突变研究

目的分析肝豆状核变性(WD)ATP7B基因8号外显子在中国人中的突变特点。方法提取141个无血缘关系家系的146例中国人WD患者和50例健康对照者的外周血DNA,聚合酶链反应(PCR)扩增ATP7B基因8号外显子,并对产物进行直接测序。应用Sequencing AnalysisTM软件分析测序结果。结果146例WD患者中共发现93例存在基因突变,c.2333G>T(Arg778Leu)错义突变频率为40.78%,包括26例纯合突变,63例杂合突变,且均伴c.2250C>G(Leu770Leu)多态;1例c.2294A>G(Asp765Gly)错义突变发生频率为0.35%;5例c.2298_2299insC(Pro767Pro)插入突变发生频率为1.77%,其中2例并c.2333G>T(Arg778Leu)杂合突变。50例健康对照者均未发现突变。结论在146例中国人WD病患者中,除Arg778Leu热点突变和c.2294A>G错义突变外,c.2298_2299insC为中国患者中未曾报道的新型插入突变。

散发性嗜铬细胞瘤SDH5基因2号外显子突变分析

目的:分析散发性嗜铬细胞瘤患者线粒体琥珀酸脱氢酶5(succinate dehydrogenase5,SDH5)基因2号外显子突变特点,探讨SDH5基因2号外显子突变与散发性嗜铬细胞瘤的关系。方法:提取12例散发性嗜铬细胞瘤患者的肿瘤标本DNA,应用聚合酶链反应(PCR)扩增SDH5基因2号外显子并测序,用Blast判读基因突变情况。结果:12例散发性嗜铬细胞瘤患者肿瘤标本SDH5基因2号外显子全部成功扩增,1例(8.3%)出现无意义突变。结论:SDH5基因2号外显子突变可能与散发性嗜铬细胞瘤存在密切关系,有必要加大样本量或对SDH5其他外显子突变情况作进一步研究。

我国汉族人群FⅧ基因14号外显子poly A区缺失或插入A热点突变分析

目的:对FⅧ基因14号外显子poly A区缺失或插入A进行热点突变分析。方法:采用活化部分凝血活酶时间、凝血酶原时间、凝血酶时间、纤维蛋白原、凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:C)及血管性血友病因子抗原及活性(vWF:Ag、vWF:Act)等测定进行血友病A表型诊断,用长链聚合酶链反应和双重PCR进行FⅧ基因内含子22倒位及内含子1倒位检测,采用直接核苷酸测序法检测FⅧ基因启动子区、各外显子及其侧翼序列中的突变。用AccuCopyTM多重基因拷贝数检测试剂盒对未找到突变的患者进行拷贝数检测,采用多重PCR扩增FⅧ基因内外6个短串联重复序列(FⅧUp226、FⅧUp146、FⅧInt13、FⅧInt25、FⅧDown48、DXS1073)进行遗传连锁分析。结果:在近4年检测的343个血友病A家系中,发生于FⅧ基因14号外显子poly A区的插入或缺失A突变共32例,占总血友病A家系的9.33%,占小片段插入或缺失突变的42.11%。这些家系中多数为散发(21例),无血友病家族史,其中10例先证者的FⅧ基因突变为de novo突变,且部分患者表现为轻型或中型血友病(FⅧ:C 2%～10%)。结论:FⅧ基因14号外显子A8/A9区的插入或缺失A为血友病A的突变热点,其致病机制可能与该区域的特殊结构导致的DNA聚合酶在DNA复制过程中的滑移、错配相关,而poly A区DNA复制、转录、蛋白翻译过程的二次错误又可能使患者的表型得到部分"纠正"。

表皮生长因子受体20号外显子插入突变晚期非小细胞肺癌的治疗现状

表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的非小细胞肺癌(NSCLC)代表了一类治疗上具有一定特殊性的肺癌,即具有EGFR敏感突变的晚期NSCLC患者一线治疗优先选用酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)。然而,作为EGFR突变中第三常见的20号外显子插入突变(ex20ins),对肿瘤治疗的反应与敏感突变并不一致,对TKIs整体反应不理想。本文介绍了EGFR ex20ins NSCLC的临床特征和预后,并重点探讨了其对TKIs、化疗和免疫治疗等不同治疗方式的反应,以期能为临床医师的治疗决策提供参考。

表皮生长因子受体基因20号外显子插入突变型非小细胞肺癌的治疗现状与展望

自表皮生长因子受体(EGFR)基因突变被发现以来,酪氨酸激酶抑制剂(TKI)的应用拉开了EGFR阳性非小细胞肺癌精准靶向治疗的序幕。携带EGFR基因常见的两类经典代表性突变,即第19号外显子框内缺失突变和第21号外显子L858R点突变(约占所有EGFR突变的90%)的非小细胞肺癌患者,接受TKI靶向治疗的临床获益远远优于传统化疗。EGFR基因第20号外显子插入突变却与众不同,在剩余10%EGFR少见基因突变中为最常见的类型,且这类突变中的绝大多数对目前临床应用的第一、二、三代TKI原发耐药,临床预后差。目前,国际上亦缺乏针对此突变的深入研究和临床治疗指南。文章介绍了EGFR基因20号外显子插入突变型非小细胞肺癌的发病机制、氨基酸序列亚型和治疗现状,探讨了此突变在目前肺癌治疗领域所面临的挑战与展望。