显微操作法提取混合斑中精子细胞方法的探讨

目的尝试建立一种提取混合斑中精子细胞的检测方法。方法在人为控制条件下,制备精液—阴道液混合斑,分别使用显微操作法与差异裂解法分离精子细胞,提取DNA,进行STR基因型检测。结果采用显微操作法检测成功率11/12,差异裂解法成功率1/12,两者有显著性差异。结论显微操作法可有效获取精子细胞,排除女性物质和其它杂质的干扰,STR分型成功率优于差异裂解法。

显微操作法在获取孕妇外周血中胎儿有核红细胞的应用

目的 :探讨显微操作法对获取孕妇外周血中胎儿有核红细胞 (NRBCs)的可行性和准确性。方法 :将妊娠 6～ 38周 4 1例孕妇的外周血进行不连续密度梯度离心 ,将分离后的细胞进行制片 ,在光学显微镜下识别NRBCs,然后用微操作仪获取NRBCs,并用聚合酶链反应 (PCR)在基因水平进行验证。结果 :4 1例孕妇有 2 2例在外周血中检出NRBCs ,检出率为 5 3.7% ,PCR结果显示 2 2例中有 10例呈现Y特异带 ,总符合率为 95 .4 %。结论

单细胞显微操作法克隆技术

普通和特殊单克隆细胞株（系）的选择与培育日益重要、广泛和普及。探索不用特殊设备、操作简单、高效并适合任意批量单克隆细胞株（系）的选育技术将有利于这一重要而繁重工作的简化和推广。在实验中作者曾试过多种细胞克隆技术。为了简化技术模式，争取一次性准确获得欲选育量的可靠单克隆细胞株（系）并节省耗材，提高效率，减轻工作量，作者探索了仅利用细胞培养室常规配置设备进行的单细胞显微操作法克隆技术。

单细胞显微操作法克隆技术

在生命科学飞速发展的今天，特异单克隆细胞株(系)的选择与培育日益广泛和重要。不用特殊设备、操作简单、快捷、经济、高效、可靠并适合大批量克隆化培养的技术将有利于这一繁重工作的简化和普及。我们在实验中曾试过：有限稀释法、平皿克隆分离法、自制毛细吸管单细胞显微操作法等细胞克隆技术(司徒镇强等，2000．4)。

小鼠受精卵显微操作方法的改进

目的 :改进小鼠受精卵显微操作方法 ,提高小鼠受精卵的存活率、假孕母鼠生产率及得仔率。方法 :以一定长度大小及浓度的 DNA片段为材料 ,分别进行常规及改进的显微操作后 ,统计分析受精卵存活率、假孕母鼠生产率及得仔率。 结果 :经改进后缩短操作时间的显微操作法与常规显微操作法相比 ,小鼠受精卵的存活率由 6 0 .3%提高至 79.5 %、假孕母鼠生产率由 35 .7%提高至 5 6 .8%、得仔率由 10 .1%提高至 14.1%,均有显著差别 (P<0 .0 1)。 结论 :改进的显微操作法可推广应用于常规的转基因小鼠制备。

显微操作方法捕获精子细胞及对其DNA分型结果研究

目的:研究显微操作方法捕获精子细胞的可行性,及精子细胞的分型结果。方法:用显微操作方法捕获精子细胞,并用QIAampDNAMicro-kit提取DNA,应用Identifiler试剂盒,采用二次扩增和添加酶量、增加循环数的方法进行扩增,最后用ABI3100遗传分析仪检测分型结果。结果:用显微操作方法成功提取到了细胞数目为100、50、10、5个的精子细胞样品并得到其分型结果。

经显微内窥镜治疗腰椎间盘突出症的临床应用

目的 介绍一种新型的显微内窥镜椎间盘切除系统(MED)治疗腰椎间盘突出症的临床应用及手术适应征。方法 对20例腰椎间盘突出症患者23个间隙用MED治疗,对该组资料进行回顾性总结。结果 20例术后功能评定按改良Macnab分级:优17例,良2例,可1例。结论 MED系统是一种新型的腰椎间盘摘除手术系统,该技术在髓核摘除基础上又保证神经根充分减压,并具有手术切口小、创伤少、恢复快等特点,近期效果十分满意。

显微外科技术一期处理Ⅱ区屈肌腱损伤

采用改良Ｋｅｓｌｅｒ法一期显微缝合，并结合早期被动性活动方法治疗手部Ⅱ区屈肌腱损伤３２例５９指１１２条肌腱的疗效，术后随访３个月至５年，优良率达８１．１９％。详细介绍了手术方法及早期活动的方法，强调严格清创和精细的显微无创操作，是手术成功的保证，尽可能修复腱鞘，早期保护性被动活动是预防肌腱粘连的有效措施。

用于功能热流体的相变材料微胶囊力学性能研究进展

相变材料微胶囊悬浮液用作传热流体时,具有传热温差小、载热密度高、储放热时间短等突出优点,但在研究和应用实践中常发现微胶囊经若干次泵送循环后严重变形、塌陷甚至破损,引起相变物质泄漏、聚结、黏壁、堵塞管路等后果,使体系性能显著恶化。为使这种悬浮液性能更稳定、循环寿命更长,本文综述了从微胶囊自身力学性能和循环流动稳定性两方面开展的实验和理论研究工作进展,认为微胶囊自身力学性能是影响其循环稳定性的内因,泵送作用是导致微胶囊破裂的主要外因。总结了两方面研究存在的问题,指出相关研究应朝规范测试表征方法、拓展研究客体范围、充分利用数值模拟技术等方向发展,使该领域的研究更加深入。

微穿刺治疗视网膜静脉阻塞的实验研究

目的 :探讨视网膜静脉微穿刺介入治疗视网膜静脉阻塞的技术方法、并发症及其处理措施 ,观察疗效。方法 :利用自行研制的眼超显微手术系统 ,实现活体视网膜静脉微穿刺 ;采用光动力学方法建立视网膜静脉阻塞动物模型 ,在阻塞的视网膜静脉内注入溶栓剂tPA ,观察溶栓效果和术中、术后视网膜及其血管改变。结果 :超显微手术系统能够实现稳定的视网膜血管微穿刺 ,并向血管内持续注药。在视网膜静脉血栓形成早期 ,该方法能使血栓迅速溶解脱落 ,疏通血管 ,恢复静脉血流。病理结果显示 ,视网膜静脉微穿刺介入溶栓后 ,不但能够逆转视网膜静脉阻塞的病理改变 ,而且对视网膜及其血管无明显损伤。结论 :视网膜静脉微穿刺 ,注入溶栓剂可能为视网膜静脉阻塞早期治疗提供一条新途径。该技术的不断完善 ,不仅可望用于视网膜静脉阻塞的临床治疗 ,而且还可用于清除视网膜下出血、视网膜组织活检。

MiniFiler试剂盒进行微量细胞STR分型可行性探讨

目的探讨采用MiniFiler试剂盒进行微量细胞STR分型的可行性。方法利用显微操作法捕获微量口腔上皮细胞,采用MiniFiler试剂盒进行STR复合扩增,ABI 3130遗传分析仪检测STR分型。结果10个口腔上皮细胞能够获得稳定的STR分型;1、3、5个口腔上皮细胞能够获得完整的STR分型,但存在随机性。结论微量细胞进行STR分型具有不稳定性,目前还难以在实际检案中应用,但可以通过增加模板量来提高分型的成功率。

减少细胞质对激活小鼠卵母细胞体外发育的影响

以溶液的表面张力为主要动力 ,辅以显微操作法去除一定量的卵母细胞胞质。测量了去除的细胞质体的直径 ,第一组为 38.6 4 μm ,第二组为 6 1.5 2 μm。小鼠卵母细胞的平均直径为 80 μm ,则第一组细胞质体占卵母细胞体积的 11.3% ,第二组细胞质体占卵母细胞体积的 4 5 .5 %。去除细胞质后两组卵母细胞均被氯化锶激活 ,其培养后卵裂率没有显著差异 (80 .0 %vs 77.9% ) ,两者都显著低于未经去质处理的激活卵母细胞和受精卵的卵裂率。两者的囊胚发育率虽没有显著差异 (37.3%vs 36 .8% ) ,但均显著低于未经去质处理的激活卵母细胞和受精卵的囊胚发育率 (4 8.3%和 73.3% )。去除 11.3%和 4 5 .5 %细胞质的卵母细胞孤雌激活胚、未经去质处理的激活卵母细胞和受精卵 ,体外培养的囊胚细胞数 (17.2 8± 7.16 ,11.5 0± 6 .83,2 1.86± 7.5 2 ,4 4 .6 7± 6 .86 ) ,各组间差异显著。

混合斑中精子细胞分离及其DNA制备方法

目的尝试建立一种检测混合斑中精子细胞的方法。方法使用显微操作法捕获精子细胞,全基因组扩增(多重置换扩增)精子细胞DNA。结果对10管精斑检材的全基因组扩增,获得了高产、保真的产物。使用50μL体系对20个精子细胞直接进行全基因组扩增,省去了对起始模板的纯化过程,DNA扩增倍数达30000倍以上,片段长度大多在15 kb以上,其STRs复合扩增分型结果有可参照性。结论显微操作法可以有效捕获精子细胞,排除干扰,多重置换扩增可以提供足够量的产物用于法医DNA分析,该方法具有可行性。

显微输卵管复通手术与异位妊娠关系的探讨

目的探讨显微输卵管复通术与异位妊娠的关系及术中、术后与异位妊娠发生有关的因素。方法随访１０２９例绝育后行显微输卵管复通术的妇女，对其中发生异位妊娠及其相关因素进行分析。结果１０２９例妇女中子宫内妊娠９６０例，异位妊娠１２例（均为输卵管妊娠）。异位妊娠占复通手术妇女的１．１７％，占妊娠妇女的１．２３％，与子宫内妊娠的比例为１８０。手术后第一、二及年两年后复通手术妇女和妊娠妇女中异位妊娠率差异均无显著意义；术后６月内及７～１２月异位妊娠率差异亦无显著意义。手术后进行早期通液者异位妊娠率升高；绝育方法、复通术式、绝育至复通的时间均与异位妊娠无关系。结论复通术中彻底切除绝育部位病变、穿过粘膜缝合及不进行早期通液，可控制异位妊娠率；手术后６个月内避孕并不影响异位妊娠率。

钙蛋白酶抑制蛋白转基因小鼠的构建和鉴定

目的将人的钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)外源基因整合到C57BL/6J小鼠中,构建高表达CAST的转基因小鼠模型。方法利用Gateway技术构建pRP.EX3d-EF1A-CAST-IRES-eGFP载体,回收片段后通过显微注射法将目的基因片段注入到C57BL/6J小鼠受精卵中,将其胚胎移植至同期发情的假孕受体母鼠输卵管内获得子代小鼠。采用PCR方法鉴定出阳性的转基因小鼠,确定首建鼠,通过与C57BL/6J小鼠回交后互交数代建系。利用RT-PCR和Western blotting方法检测CAST基因和蛋白在各组织中的表达情况。结果将90枚注射受精卵移植到3只假孕鼠中,3只均怀孕,移植成功率100%,产下23只子鼠,经PCR鉴定得到2只转基因阳性首建鼠,阳性率为9%。子代小鼠进行RT-PCR检查显示,CAST基因在转基因小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑和骨骼肌中均有表达;Western blotting检查显示,CAST蛋白表达在转基因小鼠中显著高于同窝阴性小鼠。结论通过显微注射法成功构建CAST高表达的转基因小鼠,为进一步研究CAST奠定了良好的模型基础。

经后路腰椎间盘镜治疗腰椎间盘突出症

目的 探讨经后路腰椎间盘镜治疗腰椎间盘突出症的临床应用及适应症。方法 采用 Med· 型腰椎间盘镜经后路行腰椎间盘突出髓核摘除及神经根管扩大术。结果 本组共治疗腰椎间盘突出症 37例 (包括术转型 2例 ) ,疗效满意。结论 本术式创伤小 ,较好地保持了脊柱后柱的完整性 ,减少了手术对脊柱稳定性的影响 ,提高了手术的安全性及疗效的可靠性。本术式特别适用于比较年轻的、单节段。

Telomerase activity analysis of esophageal carcinoma using microdissection-TRAP assay

OBJECTIVES: To investigate telomerase activity in esophageal squamous cell carcinoma (SCC) and its preneoplasia lesions, and to study the relationships between telomerase activity and cancer differentiation, cancer invasiveness, and lymphatic metastasis. METHODS: Telomerase activity in esophageal SCC tissues, adjacent dysplasia tissues and normal epithelia from the surgical edge were assessed by microdissection-TRAP (telomeric repeat amplification protocol)-silver staining assay. RESULTS: Telomerase activity was detected in 37 (82.2%) of 45 esophageal tumors, 23 (79.3%) of 29 dysplasias, and 2 (5%) of 40 normal epithelia. There was a significant difference in activity between dysplasia and normal epithelium, as well as between tumor and normal epithelium. Twenty-six (92.9%) of 28 tumors with lymphatic metastasis had detectable telomerase activity compared to 11 (64.7%) of 17 non-lymphatic metastasis tumors. These relationships were statistically significant (P