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用显微注射法建立转bcl-x_l基因小鼠 被引量:8
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作者 肖文伍 王芙蓉 +5 位作者 张苏明 赵浩斌 郑新明 樊俊华 魏庆信 张旻 《中国神经科学杂志》 SCIE CAS CSCD 2002年第3期630-633,共4页
建立转bcl xl基因小鼠 ,继而传代建系 ,用于缺血性脑血管疾病的研究。采用显微注射法 ,将人bcl xl基因注入昆明小白鼠受精卵获得子代鼠 ,然后作PCR ,Southern blot ,mRNA ,Western blot检测以获得阳性鼠。实验中注射受精卵 16 5 4枚 ,... 建立转bcl xl基因小鼠 ,继而传代建系 ,用于缺血性脑血管疾病的研究。采用显微注射法 ,将人bcl xl基因注入昆明小白鼠受精卵获得子代鼠 ,然后作PCR ,Southern blot ,mRNA ,Western blot检测以获得阳性鼠。实验中注射受精卵 16 5 4枚 ,移植卵数 14 4 8枚 ,受体鼠 4 9只 ,怀孕鼠 7只 ,子代鼠 13只 ,整合数 4只并均有表达 ,植入受精卵的存活率 83% ,受精卵的总存活率 0 .78% ,移植鼠的怀孕率 14 .3% ,整合效率 30 .7% ,总有效率为 0 .2 4 %。初步获得了转bcl 展开更多
关键词 显微注射法 转bcl-x1基因 小鼠 脑缺血 动物模型
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显微注射法制备转基因小鼠的技术研究 被引量:9
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作者 鞠丽梅 三好一郎 +1 位作者 笠井憲雪 蔡有余 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 1999年第1期11-15,共5页
转基因技术是发生工程学或胚胎操作技术中的一部分。这一技术包括有受精卵的采集,受精卵的体外培养,胚胎移植等技术,转基因动物制作是其应用技术之一,它是将外源DNA片段用显微注射法直接注入受精卵原核,使外源DNA随机整合到... 转基因技术是发生工程学或胚胎操作技术中的一部分。这一技术包括有受精卵的采集,受精卵的体外培养,胚胎移植等技术,转基因动物制作是其应用技术之一,它是将外源DNA片段用显微注射法直接注入受精卵原核,使外源DNA随机整合到寄主基因组中而形成转基因小鼠。我们建立完善这一技术的目的是在实验动物的生产中为转基因动物的生产提供稳定可靠的保证。我们将pCXTGAP、pCSLN等基因分别注入受精卵原核制备相应的转基因动物模型,并从中总结较佳的操作技术。结果经检测阳性转基因小鼠占出生幼鼠的1638%。我们认为不仅要有精细的微注射技术、动物的选用和饲育、严密的胚胎操作都是转基因动物制作成功的重要条件。 展开更多
关键词 转基因小鼠 原核 胚胎 生产中 受精卵 转基因动物 术中 外源DNA 显微注射法 主基因
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显微注射法培育转基因哺乳动物的研究进展 被引量:12
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作者 郭勇 倪和民 朱裕鼎 《生物工程进展》 CSCD 1997年第1期42-47,共6页
加州大学医学院 Teh Ping Lin 博士早在1966年即利用小鼠受精卵原核显微注射技术,系统地研究了微注射不同量外源物质(石蜡油、牛γ-球蛋白溶液)对小鼠胚胎受体移植后的分裂、发育的影响程度,并预见该技术用于研究小鼠或其它种类哺乳动... 加州大学医学院 Teh Ping Lin 博士早在1966年即利用小鼠受精卵原核显微注射技术,系统地研究了微注射不同量外源物质(石蜡油、牛γ-球蛋白溶液)对小鼠胚胎受体移植后的分裂、发育的影响程度,并预见该技术用于研究小鼠或其它种类哺乳动物胚胎分化及遗传效应具有潜在价值。直到1980年,随着分子生物学技术的迅速发展,Gordon 等人首先采用显微注射法育成带有人胸苷激酶基因这一外源 DNA 片断的'新型'转基因小鼠后。 展开更多
关键词 遗传工程 转基因哺乳动物 显微注射法
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显微注射法制备转基因小鼠模型的研究 被引量:3
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作者 刘薇 卢光秀 卢惠霖 《动物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第2期32-35,共4页
将外源基因MTLMP,pZipNeoSV(X1)LMP及HLADRα分别注入昆明小鼠受精卵雄原核中,结果得到有这三种外源基因整合的三个转基因小鼠系,导入基因的整合率分别为8%,80%及667%,它们的子一代(... 将外源基因MTLMP,pZipNeoSV(X1)LMP及HLADRα分别注入昆明小鼠受精卵雄原核中,结果得到有这三种外源基因整合的三个转基因小鼠系,导入基因的整合率分别为8%,80%及667%,它们的子一代(F1)及子二代(F2)基因组中也均有外源基因整合,并且导入pZipNeoSV(X1)LMP基因后经反转录聚合酶链式反应(RTPCR),检测mRNA发现有该基因的表达,说明本法制备转基因小鼠是可行的。应用荧光原位杂交技术(FISH),对子四代(F4)部分小鼠进行了整合定位研究,结果发现外源基因在体内为随机整合。本文对以上结果进行了讨论。 展开更多
关键词 显微注射法 转基因小鼠 动物模型
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显微注射法和精原干细胞介导法制备乙肝病毒X基因转基因小鼠的方法学比较 被引量:1
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作者 李丹 胡火珍 +2 位作者 李小玉 钟立武 胡以平 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期746-747,共2页
目的 探讨经济简便有效的制备转基因小鼠的方法。方法 分别将线形和环状乙肝病毒 X基因表达载体 pc DNA3- X按常规显微注射入小鼠受精卵 ,导入假孕雌鼠 ,同时应用微量注射针将脂质体包裹的 pc DNA3-X表达载体直接注入 C57BL/ 6 N小鼠... 目的 探讨经济简便有效的制备转基因小鼠的方法。方法 分别将线形和环状乙肝病毒 X基因表达载体 pc DNA3- X按常规显微注射入小鼠受精卵 ,导入假孕雌鼠 ,同时应用微量注射针将脂质体包裹的 pc DNA3-X表达载体直接注入 C57BL/ 6 N小鼠雄性小鼠睾丸的曲细精管内 ,运用 PCR法和免疫组化法对所有转基因仔鼠进行鉴定 ,比较这两种方法的优缺点。结果 显微注射法繁琐 ,技术要求高 ,阳性率相对较高 ,达 16 .6 %。精原干细胞介导法技术简便 ,阳性率为 6 .2 5 %。结论 初步证明用精原干细胞介导法是一种经济简便有效的制备 展开更多
关键词 转基因小鼠 显微注射法 精原干细胞 乙肝病毒
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应用显微注射法建立转基因小鼠 被引量:1
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作者 谢卫兵 陈汉源 +1 位作者 曾位森 罗琛 《解剖科学进展》 CAS 1998年第2期189-191,共3页
应用显微注射法建立转基因小鼠谢卫兵陈汉源曾位森罗琛(第一军医大学组胚教研室广州510515)转基因动物是研究基因表达调控及表达产物生物学效应的最佳体系之一,同时作为一种新型的生物反应器,在医学、农、林、畜牧业等领域有... 应用显微注射法建立转基因小鼠谢卫兵陈汉源曾位森罗琛(第一军医大学组胚教研室广州510515)转基因动物是研究基因表达调控及表达产物生物学效应的最佳体系之一,同时作为一种新型的生物反应器,在医学、农、林、畜牧业等领域有着广泛的应用前景。目前采用基因转移... 展开更多
关键词 转基因 小鼠 显微注射法
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牙齿修复相关转基因研究:显微注射法获得pTet-on-CX转基因工具小鼠G_0代的实验观察
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作者 孙汉堂 肖明振 +2 位作者 吴补领 徐国江 费俭 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第2期50-51,共2页
目的:为便于进行规模化的转基因研究,构建一种四环素调控性转基因体系中的工具小鼠系。方法:实验于2002-06/10在上海南方模式生物研究中心完成。以cβ-actin启动子取代pTet-on-NSE质粒中的NSE启动子,构建转基因载体pTet-on-CX;将XhoI酶... 目的:为便于进行规模化的转基因研究,构建一种四环素调控性转基因体系中的工具小鼠系。方法:实验于2002-06/10在上海南方模式生物研究中心完成。以cβ-actin启动子取代pTet-on-NSE质粒中的NSE启动子,构建转基因载体pTet-on-CX;将XhoI酶切线性化的载体DNA注射到小鼠受精卵的雄原核,移植到假孕母鼠的输卵管。仔鼠出生后,经PCR及SouthernBlotting检测阳性小鼠。结果:注射的受精卵共存活603枚,移卵后产仔64只,阳性6只。阳性鼠分别传代开始建系。结论:通过显微注射的方法获得pTet-on-CX转基因工具小鼠的G代,0为规模化的转基因研究包括与牙齿修复有关的基因,如牙本质涎磷蛋(白基因)奠定了基础。 展开更多
关键词 牙齿 修复 转基因 显微注射法 pTet-on-CX 转基因工具小鼠 实验观察
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用显微注射法制备携带Epstein-Barr病毒膜抗原基因——BLLF1的转基因小鼠 被引量:2
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作者 潘秀芳 刘斌 +2 位作者 郭长占 田枫 王兆绰 《北京医科大学学报》 CSCD 2000年第5期465-468,共4页
目的 :用显微注射法制备携带EB病毒 (Epstein Barrvirus,EBV)膜抗原 (membraneantigen ,MA)基因 BLLF1的转基因小鼠。方法 :对 38只昆明种小鼠进行超排卵 ,收集受精卵 ,将EBVMA基因 BLLF1显微注射到受精卵的原核内。将注射后成活且健... 目的 :用显微注射法制备携带EB病毒 (Epstein Barrvirus,EBV)膜抗原 (membraneantigen ,MA)基因 BLLF1的转基因小鼠。方法 :对 38只昆明种小鼠进行超排卵 ,收集受精卵 ,将EBVMA基因 BLLF1显微注射到受精卵的原核内。将注射后成活且健康的受精卵移植到假孕母鼠的输卵管内使其发育直至分娩。PCR分析检测仔鼠基因组中转基因的整合。结果 :显微注射 6 77个受精卵 ,其中成活且健康的 32 0个 ,卵的成活率为 47.2 %。将其移植到 12只假孕母鼠的输卵管内 ,其中 2只鼠怀孕并产仔 12只 ,出生率为 3 .75 %。PCR分析 5只仔鼠基因组整合有BLLF1基因 ,整合率为 41.7%。结论 :携带EBVMA基因 展开更多
关键词 转基因小鼠 制备 显微注射法 E-B病毒膜抗原
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显微注射法制备携带EB病毒潜伏膜蛋白基因转基因小鼠 被引量:3
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作者 刘薇 卢光 +2 位作者 卢惠霖 肖志强 姚开泰 《湖南医科大学学报》 CSCD 1996年第1期1-4,共4页
用显微注射法将Epstein-Bar病毒(EBV)的潜伏膜蛋白(LMP)基因分组注入1239只昆明种小白鼠受精卵的原核中。结果出生了25只原代鼠(Founder),其中2只基因组中整合有LMP基因,整合率为8%(2/... 用显微注射法将Epstein-Bar病毒(EBV)的潜伏膜蛋白(LMP)基因分组注入1239只昆明种小白鼠受精卵的原核中。结果出生了25只原代鼠(Founder),其中2只基因组中整合有LMP基因,整合率为8%(2/25)。培养基的质量、每次注射的持续时间及注入基因的浓度等均影响注射效果。此外,将溶解DNA的缓冲液注入4l3只受精卵中,结果发现注入的LMP本身对注射后受精卵的存活率及幼仔出生率均有一定负性影响。 展开更多
关键词 E-B病毒 膜蛋白 基因转化 显微注射法 动物实验
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应用显微注射法建立免疫耐受转基因小鼠模型的研究初探
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作者 刘昌峨 《农业教育研究(西南)》 2004年第1期56-61,共6页
本论文用质粒载体PBC1-CD152转化大肠杆菌DH5a,以Amp(50mg/m1)筛选阳性单个菌落,LB培养基大量培养,按照质粒小量提取试剂盒使用方法抽提质粒,AVAⅠ、HindⅢ酶切和PCR扩增检测。可育雌鼠注射PMSG与HCG超排卵,输卵管内收集,移植受... 本论文用质粒载体PBC1-CD152转化大肠杆菌DH5a,以Amp(50mg/m1)筛选阳性单个菌落,LB培养基大量培养,按照质粒小量提取试剂盒使用方法抽提质粒,AVAⅠ、HindⅢ酶切和PCR扩增检测。可育雌鼠注射PMSG与HCG超排卵,输卵管内收集,移植受体母鼠输卵管腹壶部。结果表明:AVAⅠ酶切产物有一条为2.0kb的片段,证明是目的基因的启动子,从而证明质粒上含有我们所需的目的基因片段。HindⅢ酶切后出现一条带,与质粒的大小相符。共处理十批小鼠100只,有70只为可用供体,处理有效率为。70%,共捡胚1425枚,只均捡卵20.36枚。共处理受体小鼠十批40只,每只植入胚胎20枚,共出生小鼠274只,出生率为34.25%。本次实验成功扩增了免疫耐受诱导基因皮肤靶向表达载体PBC1-CD152,并以小鼠为动物模型,建立了完善的显微注射法转基因技术流程。 展开更多
关键词 酶切 显微注射法 PMSG 转基因技术 培养基 母鼠 提质 目的基因 质粒 表达载体
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传统体外受精和卵母细胞单精子显微注射法得到的前核期及分裂期胚胎的保存:一种灵活的冷冻保存方法
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作者 Amarin Z.O. 赵巍 《世界核心医学期刊文摘(妇产科学分册)》 2005年第4期29-29,共1页
Objectives: To evaluate the hospital’s cryopreservation protocol. Study design: A retrospective cohort analysis of 30 conventional IVF and 44 ICSI cycles in an assisted conception unit at a tertiary referral hospital... Objectives: To evaluate the hospital’s cryopreservation protocol. Study design: A retrospective cohort analysis of 30 conventional IVF and 44 ICSI cycles in an assisted conception unit at a tertiary referral hospital. All supernumerary embryos were cryopreserved at the pronuclear or blastomere stage. The survival, morphology, implantation and pregnancy rates were evaluated. The χ2 test and Fishers exact test were used to determine the statistical significance. Results: A total of 327 pronuclear and cleavage stage embryos were cryopreserved. The post thaw survival rates of 107 conventional IVF and 220 ICSI embryos were 90.6%and 69.0%, respectively. Of the thawed cleavage stage embryos from 43 IVF and 88 ICSI cycles, 90.6%and 69.3%were intact, respectively. Of the thawed pronuclear stage embryos from 64 IVF and 132 ICSI cycles, 90.6%and 68.9%were intact with cleavage rates of 57.8%and 56%, respectively. In the final 27 conventional IVF and 41 ICSI frozenthawed embryo transfer cycles, the pregnancy rates were 18.5%and 19.5%, respectively. Conclusions: The adopted cryopreservation protocol flexibly allows for the selection of cleavagestage embryos for fresh embryo transfer and the cryopreservation of all supernumerary embryos at the pronuclear or the cleavage stage in a single cycle with satisfactory pregnancy rates. Further validation of this protocol is required. 展开更多
关键词 分裂期胚胎 体外受精 显微注射法 卵母细胞 冷冻保存 前核 着床率 受孕率 精确检验法 卵裂率
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显微注射生长激素基因导入中国对虾(Penaeus chinensis)受精卵的研究 被引量:9
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作者 刘萍 孔杰 +4 位作者 王清印 李健 杨丛海 梁利群 孙孝文 《中国水产科学》 CAS CSCD 1996年第4期35-38,共4页
本实验采用显微微量注射方法,将羊生长激素基因导入中国对虾受精卵,受精卵发育到状幼体第三期后采样检测。PCR检测结果表明:7个样品共93尾幼体,有3个样品呈现阳性信号,基因转移比率至少在3%以上。同时斑点杂交结果也证... 本实验采用显微微量注射方法,将羊生长激素基因导入中国对虾受精卵,受精卵发育到状幼体第三期后采样检测。PCR检测结果表明:7个样品共93尾幼体,有3个样品呈现阳性信号,基因转移比率至少在3%以上。同时斑点杂交结果也证明有两个明显阳性斑点。 展开更多
关键词 显微注射法 生长激素 基因 中国对虾 受精卵
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显微注射方法在植物生理学研究中的应用(综述) 被引量:1
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作者 袁明 任海云 +1 位作者 王学臣 娄成后 《北京农业大学学报》 CSCD 北大核心 1991年第3期34-38,共5页
显微注射是指通过一个尖端很细的玻璃微管将物质引入单个细胞,细胞器内或细胞附近的方法。这一方法最早是在某些巨大藻类细胞的研究中得到应用,但是以后一直没有大的进展。四五十年代以后显微注射在动物生理的许多研究中得到应用。
关键词 植物 生理学 显微注射法
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血红素加氧酶-1显性负性突变体转基因小鼠模型的建立与鉴定
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作者 王波 程萱 +5 位作者 刘庆军 魏旭冉 尹玉静 高旭 杨晓 周虹 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第3期181-184,I0003,共5页
目的建立血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)显性负性突变体G143H转基因小鼠模型。方法通过SalI/DraI酶切pCAGGHO-1G143H转基因表达载体,纯化回收HO-1G143H表达盒片段;通过显微注射把表达目的基因的DNA片段导入FVB小鼠受精卵原核,... 目的建立血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)显性负性突变体G143H转基因小鼠模型。方法通过SalI/DraI酶切pCAGGHO-1G143H转基因表达载体,纯化回收HO-1G143H表达盒片段;通过显微注射把表达目的基因的DNA片段导入FVB小鼠受精卵原核,并移植给同期发情的假孕受体母鼠,获得子代小鼠;用PCR对子代鼠尾DNA进行鉴定,并用Southern blot对结果做进一步验证;通过RT-PCR、免疫组化和Western blot方法检测HO-1基因的表达。结果表达盒回收片段正确;假孕鼠出生的17只子代小鼠共有3只阳性,均为雄性;RT-PCR、免疫组化和Western blot结果表明,阳性小鼠体内的HO-1 mRNA与蛋白表达水平增高。结论成功建立HO-1显性负性突变体G143H表达的转基因小鼠,该模型为研究HO-1在体内的作用机制奠定了基础。 展开更多
关键词 HO-1 显微注射法 转基因小鼠
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转基因动物技术与转基因动物制药 被引量:22
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作者 沈子龙 廖建民 徐寒梅 《中国药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期81-86,共6页
转基因动物技术始于上个世纪 80年代 ,2 0多年来 ,转基因动物在制作方法上由最初的显微注射法、逆转录病毒法和胚胎干细胞法 ,发展到体细胞核移植技术、腺病毒载体法、精子头与转移基因共注射法等。随着转基因技术的不断发展 ,利用转基... 转基因动物技术始于上个世纪 80年代 ,2 0多年来 ,转基因动物在制作方法上由最初的显微注射法、逆转录病毒法和胚胎干细胞法 ,发展到体细胞核移植技术、腺病毒载体法、精子头与转移基因共注射法等。随着转基因技术的不断发展 ,利用转基因动物生产药用蛋白质即转基因动物制药的研究也取得了突破性进展 ,目前 ,转基因动物制药正走向产业化的道路 。 展开更多
关键词 转基因动物 显微注射法 逆转录病毒法 胚胎干细胞法 体细胞核移植法 转基因动物制药
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慢病毒载体法制备遗传工程猴和小型猪的现状及应用前景展望 被引量:5
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作者 刘薇 贾俊双 +4 位作者 唐华 林晓琳 袁进 顾为望 肖东 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2012年第5期84-89,共6页
较小鼠等啮齿类动物而言,猴和小型猪等大型实验动物在亲缘关系上与人类更为接近,在解剖、生理生化代谢及疾病发病机制等多方面与人类更接近,使它们在复制人类疾病模型,研究疾病发病机制和新药研发等中有无可替代的应用。而制备遗传工程... 较小鼠等啮齿类动物而言,猴和小型猪等大型实验动物在亲缘关系上与人类更为接近,在解剖、生理生化代谢及疾病发病机制等多方面与人类更接近,使它们在复制人类疾病模型,研究疾病发病机制和新药研发等中有无可替代的应用。而制备遗传工程大动物可以更深入地解析人类疾病,并可为器官移植和新药研发提供更充分的实验材料。基于慢病毒介导的转基因方法近几年已越来越多地被用来制备遗传工程猴和小型猪。与传统的原核显微注射方法和体细胞核移植法相比,慢病毒介导的转基因方法转基因效率高,操作更简单。因此,构筑基于慢病毒介导的转基因方法制备遗传工程猴和小型猪的技术平台将对生物医学研究产生巨大推动作用。 展开更多
关键词 小型猪 遗传工程动物 慢病毒载体法 原核显微注射法 体细胞核移植
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抗菌肽转基因小鼠模型的建立 被引量:2
17
作者 李华 董婉维 +6 位作者 孙强 张梅英 汪瑛 杨葳 秦英 史晓萍 王禄增 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期4-5,9,共3页
目的:制备抗菌肽转基因小鼠模型。方法:显微注射pcDNA3. 1 -PCMG到FVB小鼠受精卵雄原核中,注射存活胚胎移植到假孕母鼠输卵管内发育产生子代小鼠。结果:在生出的 119只小鼠中经PCR和Southernblot检测到 7只阳性。结论:通过显微注射法使... 目的:制备抗菌肽转基因小鼠模型。方法:显微注射pcDNA3. 1 -PCMG到FVB小鼠受精卵雄原核中,注射存活胚胎移植到假孕母鼠输卵管内发育产生子代小鼠。结果:在生出的 119只小鼠中经PCR和Southernblot检测到 7只阳性。结论:通过显微注射法使外源基因pcDNA3. 1 -PCMG在FVB小鼠基因组中得到整合,为抗菌肽抗菌谱的研究,抗病毒、抗肿瘤机制的研究提供有价值的抗病动物模型。 展开更多
关键词 抗菌肽 显微注射法 转基因小鼠
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转基因动物技术在畜牧生产上的应用 被引量:3
18
作者 秦粉菊 金萍 徐项桂 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2005年第1期64-66,共3页
关键词 转基因动物技术 畜牧业 显微注射法 逆转录病毒载体法 精子载体法 体细胞核移植法 生产性状 抗病力 人药用蛋白
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瞬时受体电位通道家族M8型受体转基因小鼠模型的建立 被引量:2
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作者 马双陶 曹廷兵 +5 位作者 马丽群 罗志丹 郝新忠 王利娟 刘道燕 祝之明 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期251-254,共4页
目的建立瞬时受体电位通道家族M8型受体(TRPM8)转基因小鼠模型。方法通过显微注射法将pcDNA3.1-h Trpm8导入C57BL/6J×CBA F1小鼠的受精卵中,并将其移植到假孕母鼠输卵管中获得子代小鼠。采用PCR方法鉴定子代基因型,通过RT-PCR和免... 目的建立瞬时受体电位通道家族M8型受体(TRPM8)转基因小鼠模型。方法通过显微注射法将pcDNA3.1-h Trpm8导入C57BL/6J×CBA F1小鼠的受精卵中,并将其移植到假孕母鼠输卵管中获得子代小鼠。采用PCR方法鉴定子代基因型,通过RT-PCR和免疫印迹法检测Trpm8基因及蛋白在组织中的表达。结果将405枚注射受精卵移植给15只假孕鼠,其中13只顺利妊娠并产下95只子鼠,经PCR鉴定得到5只转基因阳性首建鼠,其中4只小鼠可稳定传代,经与C57BL/6J小鼠回交7代后互交数代建系。子代转基因小鼠经RT-PCR检测发现Trpm8基因在心脏、肝脏、肾脏、脂肪和骨骼肌中均有表达,且TRPM8蛋白表达在转基因小鼠中显著增加。结论通过显微注射法成功建立了Trpm8转基因小鼠模型。 展开更多
关键词 瞬时受体电位通道家族M8型受体 显微注射法 转基因小鼠
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Dicer1转基因小鼠模型的建立 被引量:2
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作者 郑志红 高峰 +7 位作者 杨葳 汪瑛 于洋 周生来 李兆阳 吕相川 张梅英 王禄增 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2008年第4期258-260,I0003,共4页
目的建立Dicer1转基因小鼠模型。方法构建pcDNA3.1-Dicer1转基因构件,经酶切、纯化后通过显微注射方法导入BDF1小鼠受精卵原核并移植到同期受孕的ICR受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型,通过免疫组... 目的建立Dicer1转基因小鼠模型。方法构建pcDNA3.1-Dicer1转基因构件,经酶切、纯化后通过显微注射方法导入BDF1小鼠受精卵原核并移植到同期受孕的ICR受体母鼠输卵管内。出生后仔鼠用PCR和Southern方法检测鼠尾DNA鉴定基因型,通过免疫组化检测Dicer1基因表达。结果显微注射172枚卵,移植119枚卵于3只受体输卵管中,2只怀孕,共产仔15只,经PCR检测获得6只阳性鼠,Southern检测6只均为阳性。对Southern检测阳性转基因小鼠子代进行RT-PCR检测和免疫组化分析证明Dicer1基因在肝脏、肾脏、肺内均有表达。对腹腔肿胀的转基因阳性1号鼠解剖发现肝脏、脾脏明显增大,胚胎发育异常。结论成功建立Dicer1基因表达的转基因小鼠模型,该模型为进一步研究DICER1基因功能及miRNA的表达及功能等奠定基础。 展开更多
关键词 Dicer1 显微注射法 转基因小鼠
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