大白菜抗TuMV显性位点F_2的QTL-seq分析

为了挖掘大白菜抗TuMV基因的多样性,制定抗TuMV的遗传改良策略和综合防治措施,对抗TuMV的显性位点进行QTL分析。以大白菜对TuMV高抗的‘89B’和高感的‘强势’为亲本,构建F_2群体。采用人工磨擦接种TuMV法对F_2群体进行单株接种鉴定,经卡平方测验F_2群体抗、感植株分离比例不符合3︰1(χ~2=4.8>χ_(0.05)~2=3.84),非单基因遗传,为数量位点控制。选取表型高抗和高感的F_2单株各40株进行混池,对2个极端池以及2个亲本进行重测序分析。通过计算抗、感池与亲本间的△(SNP-index),获得两个抗TuMV位点区域,物理位置为A07染色体的13.9～14.4 Mb和A08染色体的16.4～17.4 Mb。上述两个区域共筛选出具有多态性位点的基因68个,其中6个基因与植物抗性有关,其编号分别为Bra028499、Bra028500、Bra016311、Bra016312、Bra016313和Bra016314,其中Bra028499和Bra028500编码抗病蛋白,Bra016311、Bra016312、Bra016313和Bra016314编码抗TMV蛋白。Bra028499、Bra028500、Bra016311和Bra016314含有TIR-NBS-LRR特殊结构域。在已定位克隆的植物抗病基因中,大约80%属于NBS基因家族,因此推测这些基因可能与大白菜抗TuMV有关。

应用MGB荧光探针技术确定猪KIT基因拷贝重复数

旨在建立一种简便、快速检测猪KIT基因拷贝重复数(CNVs)的方法并应用于未知样品的检测。在KIT外显子2中设计TaqMan-MGB探针和引物,建立荧光实时定量PCR检测KIT基因CNVs的方法。结果表明,TaqMan-MGB探针扩增KIT基因目的片段,不同DNA梯度浓度Ct值差异极显著(P<0.001),变异系数低(0.12%～0.26%);KIT与内标基因ESR的扩增效率相差只有2.4%;采用聚类分析推测了待测的50枚样品KIT的CNVs分别归属于2、3、4、5、6个拷贝。本研究建立的TaqMan-MGB探针实时荧光定量PCR检测KIT基因CNVs的方法,具有简便、快速、特异性和稳定性好的特点,适合于普通实验室应用。