利用混合样本池法对鸡显性白羽基因PMEL17突变位点的检测

显性白羽基因座是影响鸡羽色形成的重要基因座位之一,该基因座上的显性等位基因I会抑制黑色素合成,从而使携带该基因的个体全身羽毛呈现白色。目前已确认鸡显性白羽基因座编码PMEL17蛋白:是一种黑素细胞特异性蛋白,在黑素细胞的分化与成熟中起到重要作用,并证明PMEL17基因的突变与显性白羽的形成有关。文章利用混合样本池建立了一种低成本、高效率,并能在大规模群体中检测PMEL17基因突变的方法,称为PCR产物混合样本池法。该方法的基本步骤如下:首先,提取个体基因组DNA,并设计相关引物对每一个体单独进行PCR扩增;其次,将PCR产物等比例混合,10个样品混在一个池中;然后,将PCR产物混合池样品于非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳;最后,待电泳结束后进行银染,根据凝胶上所显条带判定是否存在突变体。此外,文章还将这种方法与传统基因组DNA混合样本池法进行了比较试验,并利用该方法对试验鸡群显性白羽基因PMEL17突变进行检测,证实该方法具有较高准确度。

鸡显性白羽基因PMEL17多态性及基因型鉴定方法

为建立显性白羽基因型检测的快捷方法,试验采用Sanger测序法扫描了白来航、寿光鸡和农大C系前黑素小体蛋白17(PMEL17)基因的全长并进行序列比对,共得到18个与显性白羽表型完全关联的标记。试验选择白来航PMEL17基因第5内含子上的22 bp插入以及第7外显子上的60 bp插入作为显性白羽基因型辅助鉴定的分子标记,并设计了特异性引物对。通过扩大群体和样本数量检测,证明该鉴定方法具有操作简便、结果清晰的优势,检测效力明显提高。研究提供了鸡显性白羽基因型检测的优化位点,为白羽鸡的分子育种提供了新的标记辅助鉴定技术。

雪域白鸡群体中PMEL17基因多态性分析

为了研究前黑色素小体蛋白17(pre-melanosomal protein 17,PMEL17)基因第10外显子上有关显性白羽突变的基因频率和基因型频率在雪域白鸡群体中的分布情况,试验采用PCR-RFLP方法分析基因型,利用POPGENE 1.32软件计算基因型和基因频率,用SPSS 20.0软件进行哈代-温伯格平衡适合性检验。结果表明:雪域白鸡群体中PMEL17基因有Ⅱ、Ii和ii 3种基因型,基因型频率分别为91.58%、7.37%、1.05%,Ⅰ和i等位基因频率分别为95.27%和4.73%。雪域白鸡群体内PMEL17基因BsrB酶切基因型分布不符合哈代-温伯格平衡状态(P<0.05),这可能与经历人工选择有关。说明雪域白鸡群体中Ⅱ基因型个体已占主导,但仍存在其他羽色个体,可通过分子标记辅助选择育种技术剔除ii及Ii基因型个体来提高群体羽色均一性,还可组建有色羽纯合群体以增加收益。