胰凝乳蛋白酶显色底物的合成及动力学

胰凝乳蛋白酶是一类重要的蛋白水解酶,在其纯化及应用时常常需要进行酶活性的测定;现在一般应用的底物存在溶解度不好、不稳定、灵敏度低或需要特殊的仪器等问题。本文设计合成了一类以对硝基苯胺为显色基团的底物,通过动力学测定研究了氨基酸结构对专一性的影响,该类显色底物可以较好地用于胰凝乳蛋白酶活性测定。

显色底物磷脂酰肌醇的化学法制备及应用

采用化学方法制备单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)显色培养基底物磷脂酰肌醇(l-α-phosphatidylinositol,PI)。PI提纯过程中纯度和回收率是一对难以同时提高的矛盾因素,实验采用单一及复合溶剂萃取相结合的方法,考察了溶剂比、溶剂体积、碱性物质种类等条件对该矛盾因素的影响。经过优化研究,以氨水为碱性物质配制pH=8.0的甲醇溶液预处理后,采用V(正己烷)∶V(乙醇溶液)=1∶1.5时分离效果最佳。比较了纯化前后产物与标准品的微生物显色效果,结果证实了产品具有较好的应用价值。

4-甲基伞形酮类显色底物的合成及在微生物检测中的应用研究

以简单原料葡醛内酯,经过3步反应,对伞形酮类显色底物4-甲基-7-氧香豆素-β-D-葡萄糖苷酸进行了合成,目标产物中涉及的各步中间体,均通过核磁(^(1)H-NMR、^(13)C-NMR)等方法进行了分析表征,确定了合成工艺的可靠性。同时,通过病原微生物的荧光显色实验显示,4-甲基-7-氧香豆素-β-D-葡萄糖苷酸与大肠杆菌代谢酶结合反应后,显色效果较好,能够快速精准的检测出大肠杆菌。

吲哚酚类糖苷酶显色底物6-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷的合成工艺研究

以试剂邻氨基苯甲酸作初始原料,经七步反应,合成了吲哚酚类糖苷酶显色底物6-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷,在目标产物合成中涉及的各步合成中间体,均经过核磁氢谱进行结构表征,最终确定了目标产物的结构。在合成过程中,有针对性地分析了在化合物1、2合成中的相关影响因素(反应时间、投料比及碱的用量等),最终确定了目标化合物的最佳合成工艺路线,为微生物培养基显色底物6-氯-3-吲哚-β-D-葡萄糖苷的合成提供一定参考。

吲哚酚显色底物的合成及其在微生物检测中的应用研究进展

吲哚酚显色底物是由作为产色原的吲哚酚或其取代物与酶底物间接缩合而成,其合成主要包括中间体乙酸1-乙酰基-吲哚-3-基酯的合成及其与酶底物的衍生物缩合两部分。中间体可以通过以取代苯胺、邻氨基苯甲酸、邻氯苯甲酸等为起始物合成,而其再与酶底物的衍生物如乙酰溴代糖、酰卤、三氯氧磷、氯磺酸等反应可得到相应的各种显色底物。吲哚酚显色底物应用于微生物检测,依据特异性酶与相应底物的特异性反应,一般通过显色培养基技术来实现,不同的显色底物针对的酶及其应用于检测的微生物会有所不同。

ELISA新底物TMB终止剂的研究

3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)具有高度的敏感性,又无致癌性,但常规应用H_2SO_4终止反应,颜色会由蓝变黄,本底不断加深,阳性和阴性的对比度差,影响推广应用。本文采用了10种药物进行比较研究,发现一种理想的新终止剂——1％十二烷基硫酸钠。它能使底物显色后保持鲜蓝色不变,本底清晰如水,而且久置不会变深,阳性和阴性反应视差十分明显,既有利于目测,又可用酶联免疫检测仪于波长630nm精确判定。通过抗-HBc 108份和抗-HDV 565价标本的考核,均获得了十分满意的结果。

猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原菌选择性显色培养基的研发和应用

为研制便于检测猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗抗原含量的选择性显色计数琼脂(以下简称猪三联显色培养基)以代替传统的马丁琼脂,对比研究了干粉马丁琼脂、新鲜马丁琼脂和猪三联显色培养基的理化特性和生长特性,并通过活菌计数方法平行对比了猪丹毒单价苗、猪肺疫单价苗和猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗的抗原含量。结果显示,猪三联显色培养基在活菌计数的准确性和重复性上均与干粉马丁琼脂保持一致,而且两种菌的菌落回收率均能达到0.9以上。研究表明,猪三联显色培养基可以代替马丁琼脂作为检测猪丹毒和猪肺疫抗原菌含量的计数琼脂,在猪瘟猪丹毒猪肺疫三联活疫苗生产过程中监测疫苗质量。

补体介导免疫复合物溶解能力的检测及临床研究

本文用辣根过氧化物酶（ＰＯ）作抗原与抗－ＰＯ制备免疫复合物（ＰＡＰ），以底物以法测定补体介导免疫复合物溶解能力（ＣＭＳＣ）。用该法对２２２例不同疾病患者的ＣＭＳＣ进行了检测。结果，正常对照组ＣＭＳＣ为０．５２±０．１１；与对照组相比，慢性肝（０．２８±０．１９）、肝硬化（０．２４±０．２４）、重症肝炎（０．１５±０．１５）、急性肾炎（０．１８±０．２０）和全身红斑狼疮（０．１１±０．

肺心病患者血浆组织型纤溶酶原激活物含量与活性变化的意义

用酶联免疫吸附法和发色底物分解显色法测定15例健康人和20例肺心病患者血浆组织型纤溶酶原激活物(t—PA)含量和活性,结果表明:肺心病急性期与缓解期患者血浆 t—PA 含量均显著高于健康人(P<0.001);肺心病急性期患者血浆 t—PA 活性明显低于健康人(P<0.001),缓解期则与健康人无明显差异(P>0.05);血浆 t—PA 含量和活性与血浆纤维蛋白原含量之间无相关。对肺心病患者血浆 t—PA 含量与活性变化的意义进行了探讨。

生物素—亲合素系统检测食品中黄曲霉毒素B_1的研究

我们通过制备活化生物素,并用其标记抗 AFB1抗体,建立了 ABC-ELISA 检测食品中 FAB1的方法。其测定步骤为:（1）包被AFB1蛋白结合物于聚苯乙烯板上;（2）加AFB1标准液或样品和生物素标记的抗AFB1抗体;（3）加亲和素-生物素-辣根过氧化物酶复合物（ABC）:（4）加底物显色;

生物技术在食品检测方面的运用

当前随着人们生活水平的不断提高,逐渐用越来越高的标准要求食品安全质量,但是传统的食品检测方法已经无法满足现代社会发展的需求。对于这种状况,相应的食品检测部门应该对现代科技方法合理的使用,将食品检测结果的准确性不断提高。因此具体研究在食品检测方面生物技术的实际运用具有非常重要的现实意义。

免疫过氧化物酶技术

免疫过氧化物酶技术是近十多年来发展起来的一种新的免疫组织化学技术,由于它比免疫荧光和免疫铁蛋白技术有较多的优点,近几年来发展很快,已广泛应用于细胞生物学、病理学和医学理论方面的研究。一、几种免疫过氧化物酶的方法目前免疫过氧化物酶的技术已有多种(图1)。

尿激酶原活性测定方法研究

以双链尿激酶国际标准品 (IS)为对照 ,用显色底物法和凝块溶解法测定糖基化和非糖基化的尿激酶原的酶活性 ,结果表明与凝块法相比 ,显色底物法测定两种形式的尿激酶原的酶活力相近 ,测量误差小 ,重复性好 。

PKA国家参考品的制备

本文应用 PKA 微量滴定板方法,用 WHO1984年建立的 PKA 国际标准品进行标定,制备了我国第一批 PKA 国家参考品。

甲型流感病毒两种快速检测方法的诊断效能评价

目的评价甲型流感病毒两种快速检测方法的临床诊断效能。方法分别采用化学显色法和荧光法检测流感样病例咽拭子标本377例,同时采用实时荧光定量PCR进行验证,以评价两种方法的临床诊断效能。结果化学显色法与荧光法检测的灵敏度分别为79.08%和90.2%,特异性分别为91.96%和95.09%,两种方法对甲型流感病毒的检出率相仿,其差异没有统计学意义(χ2=1.25,P>0.05),总符合率为78.78%。结论与PCR方法比较,两种方法均具有较好的临床应用价值,其中荧光法灵敏度更高,更适于临床快速诊断;化学显色法操作简便,不需特殊仪器,适用于较大样本量的筛查和现场检测。

卡托普利对兔血浆t-PA和PAI-1活性水平的影响

目的:观察卡托普利对兔血浆t-PA和PAl-l活性水平的影响.方法:选用新西兰白兔11只,给予卡托普利0.5mg/kg,ig.用药前及用药后2h各采集静脉血1ml,采用发色底物显色法测定血浆t-PA和PAl-l活性.结果:应用卡托普利2h后血浆t-PA活性显著增高,PAl-l活性明显降低.t-PA与PAl-l比值显著升高.结论:卡托普利可以促进纤溶系统的功能.

多糖水解酶活力的测定方法研究进展

综述了目前常用的几种多糖水解酶活力的测定方法,并介绍了一些最新涌现的方法。还原糖测定法由于具有简便、快速、低成本、可高通量、实时测定的特点,仍是当前酶活力测定中的首推方法,其中灵敏度较高、可较准确地测定酶解初速度的3-甲基-2-苯并噻唑酮腙(MBTH)法将更加受到业界的推崇。灵敏度普遍较高的荧光法如果能克服底物成本较高,制备过程中分子量降低等问题,也将得以广泛应用。

高血压病患者血栓前状态的研究

目的 :探讨高血压病易并发血栓性疾病的机制。方法 :分别采用放射免疫法、发色底物显色法、ELISA法等检测 16例健康人 (对照组 )、5 3例高血压病 1、2、3级患者血浆中的分子标志物—血栓素B2 (TXB2 )、6 -酮前列腺素F1α(6 -K -PGF1α)、组织型纤溶酶原激活物 (t-PA)、组织型纤溶酶原激活物抑制物 (PAI- 1)及血液流变学指标。结果 :1～ 2级高血压组及 3级高血压组病人 ,血浆TXB2 、t-PA含量、PAI- 1含量及活性、血粘度、纤维蛋白原水平均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ;而t-PA活性、6 -K -PGF1α含量均显著下降 (P <0 .0 5 )。结论 :高血压病患者存在血栓前状态 ,血压升高可能是直接原因。这为解释及防治高血压病血栓性并发症提供了依据。

气相色谱法测定不对称催化合成反应液中手性1,1-二苯基-2-丙醇含量

(S)-(+)-1,1-二苯基-2-丙醇是一种很有用的医药中间体,用它可以合成生物素,此物质广泛应用于医学各领域。近年来大量研究证实,生物素-亲和素(BAS)系统几乎可与目前研究成功的各种标记物结合。在生物素-亲和素(BAS)系统中,借助所形成的生物素-亲和素-酶复合物,追踪生物素标记的抗原或抗体,通过酶催化底物显色,可检出相应的抗体或抗原。由于抗原或抗体分子可偶联多个生物素,