转录因子FoxO3a对PC12细胞朊蛋白管家基因表达调控的影响

目的探讨叉头转录因子O亚型(FoxO)3a对PC12细胞朊蛋白管家基因(PRNP)表达调控的影响。方法以PC12细胞为研究对象,采用siRNAs沉默基因实验、实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)及Western印迹检测PRNP转录及蛋白表达水平。通过双荧光素酶(Luc)报告基因检测试验检测Luc活性,进而评估启动子的活性。结果 FoxO3a基因沉默后,S1探针(S1)组PRNP基因表达明显上升(P<0.05);S1组FoxO3a基因被沉默后,朊蛋白(PrP)蛋白表达显著升高,与基因水平一致;双荧光素酶报告基因检测结果显示,与基础对照组(pGL3-Basic+pRL-Tk)相比,阳性对照组(pGL3-Control+pRL-TK)FLuc/Rluc值明显提高(P<0.01),实验组Ⅰ(pGL3-PNRP+pRL-TK)FLuc/Rluc也显著高于基础对照组(P<0.01);当pGL3-PNRP质粒、pcDNA3.1-FoxO3a高表达质粒与海肾荧光素酶pRL系列(pRL-TK)质粒共转入细胞内,48 h后,与实验组Ⅰ相比,实验组Ⅱ(pGL3-PNRP+pcDNA3.1-FoxO3a+pRL-TK)的FLuc/RLuc值明显下降(P<0.01)。结论 FoxO3a可以负调控PRNP基因的表达,这种调控是通过结合PRNP基因启动子区域而抑制其转录来实现的。

FOXO3a的基因表达调控及其在卵巢卵泡发育中的作用研究进展

叉头基因转录因子家族（forkhead transcription factor,FOXO）,也被命名为Forkheadlike protein（FKHR）,该转录因子家族体系包括4种：FOXO1/FKHR/FOXO1a、FOXO3/FKHRL1/FOXO3a、FOXO4/AFX和FOXO6,它们的结构、功能及调节作用较相似,是调节细胞凋亡、细胞周期、DNA损伤修复、氧化应激、能量代谢与长寿、

小菜粉蝶颗粒体病毒lef-3基因的克隆与分析

【目的】研究杆状病毒lef-3基因的起源与进化,从分子水平明确病毒之间的亲缘关系。【方法】通过常规PCR方法获得小菜粉蝶颗粒体病毒晚期基因表达调控因子lef-3的基因片段,克隆后测序,然后利用软件对lef-3及编码序列进行生物信息学分析。【结果】克隆得到的PiraGVlef-3基因ORF序列中存在4个突变位点,但氨基酸性质未发生改变,推导PiraGV LEF-3蛋白含399个氨基酸残基,分子量为3.99kD;通过高级结构预测及其编码序列与其它杆状病毒的LEF-3同源性比对表明,该基因可能编码单链DNA结合蛋白;BLAST比对发现lef-3基因只存在于鳞翅目昆虫为宿主的杆状病毒基因组;进化分析表明LEF-3可分为3组,其中GV属的LEF-3聚类为1个组,NPV属的LEF-3聚类为2个组;GV的lef-3基因编码区的选择压力分析表明,大多数lef-3基因间相比较表现为负向选择,但不同lef-3基因间的Ka/Ks不同,也有正向选择;起源分析表明,杆状病毒lef-3基因可能来源于细菌。【结论】获得了小菜粉蝶颗粒体病毒(PiraGV)lef-3基因,通过生物信息学分析推测出了lef-3基因的起源进化规律。

半乳糖凝集素-3和表皮生长因子受体蛋白表达与老年胃癌转移和预后的关系

目的探讨半乳糖凝集素-3(galectin-3,Gal-3)和表皮生长因子受体(epidemal growth factor receptor,EGFR)蛋白表达与老年胃癌临床病理特征和预后的关系。方法应用免疫组化技术检测60例老年胃癌、30例异型增生和20例癌旁正常胃黏膜组织中Gal-3和EGFR蛋白表达,并结合肿瘤的病理学行为和临床随访资料进行分析。结果在老年胃癌组织中Gal-3和EGFR阳性表达率分别为65.0%和46.7%,均显著高于异型增生和癌旁正常胃黏膜组织(P<0.05)。Gal-3和EGFR表达与老年胃癌浆膜浸润、淋巴结转移和预后密切相关(P<0.05)。Gal-3和EGFR蛋白表达呈显著正相关(r=0.30,P<0.05)。结论 Gal-3和EGFR蛋白表达与老年胃癌发生、转移和患者生存期密切相关,同时检测Gal-3和EGFR蛋白表达可作为判断老年胃癌预后的参考指标。

通用转录因子3基因在恶性肿瘤中的研究进展

BTF3是一种通用的转录因子,是RNA聚合酶II转录起始所必需的因子。近年来,更多的研究将焦点聚集在BTF3基因对于恶性肿瘤的影响上面,发现BTF3基因不仅在多种恶性肿瘤中都有过表达的现象出现,还会影响一些肿瘤相关基因的表达量,从而影响肿瘤的形成与发展。本文对BTF3基因的功能、调控通路,以及在恶性肿瘤中的研究现状作一综述。

SH-SY5Y细胞中过表达RIPK3对ZFP36基因转录的影响

目的探讨SH-SY5Y细胞中受体相互作用蛋白激酶-3(RIPK3)下游信号通路及其中的关键信号分子的作用。方法通过质粒转染的方式在实验组SH-SY5Y细胞内表达外源性RIPK3蛋白,将转染空载质粒载体SH-SY5Y细胞作为对照组。通过观察质粒所携带的绿色荧光蛋白(GFP)在细胞中的表达情况以验证转染结果,Westernblot对外源性RIPK3表达进行验证。MTT法检测细胞增殖活性,观察过表达RIPK3对细胞活性的影响,以确认其在细胞内是否具有生物活性。运用转录组测序技术(RNAseq)分别检测2组细胞内基因转录丰度并应用IngenuityPathway Analysis(IPA)数据库进行分析,获得RIPK3下游信号通路及关键分子。通过微滴式数字化PCR(dd PCR)对部分RNAseq结果进行验证。结果外源性RIPK3在细胞内具有生物活性,能够抑制SH-SY5Y细胞的增殖。RNAseq数据经IPA分析后得出锌指蛋白36(ZFP36)为RIPK3下游效应分子,其相关效应分子包括血管内皮生长因子(VEGF)、人脱帽酶2(DCP2)、脑源性神经营养因子(BDNF)、肿瘤坏死因子(TNF)的转录丰度也发生了相应的变化。结论 RIPK3能够参与对ZFP36以及与其相关效应分子的转录调控,进而在神经系统的发育、炎症和肿瘤发生等生理、病理过程中发挥重要作用。

C/EBPε增强U937细胞中PI3Kγ基因的表达

目的研究过量表达转录因子CCAAT-增强子结合蛋白ε(CCAAT/enhancerbindingproteins,C/EBPε)对磷脂酰肌醇-3激酶γ(phosphoinositide3kinase,PI3Kγ)基因的影响。方法将C/EBPε基因的真核表达载体pcDNA3.1C/EBPε电穿孔转染U937细胞,G418筛选出稳定转染的混合细胞克隆后,用RTPCR与Westernblot的方法,分别检测转染细胞与对照细胞中C/EBPε与PI3Kγ基因的表达水平。结果过量表达转录因子C/EBPε后,可以显著提高U937细胞中PI3Kγ基因的表达水平。结论核内转录因子C/EBPε可能参与了PI3Kγ基因的转录调控。

草菇gpd基因的克隆、序列分析和其启动子的推测以及冷诱导对其表达方式的影响

草菇3-磷酸-甘油酯脱氢酶(GPD)基因全长1489bp,含有9个内含子。gpd全长cDNA含有1157核苷酸,包含1个编码337个氨基酸的1011bp开放阅读框和1个95bp3’端非翻译区。在1220bp的5’端侧翼区内检测到启动子元件,该元件含有2个TATA框和3个CAAT框,分别位于开始密码子ATG上游第80、559、333、340和406bp位点。Southern杂交分析表明,草菇基因组含有1个拷贝的gpd基因。Northern杂交分析表明,gpd基因的表达不受冷胁迫诱导。

低氧诱导因子-3α的研究进展

低氧诱导因子(hypoxia inducible factor,HIF)是细胞应对氧气水平降低时的主要调节因子,具有调控与细胞缺氧应激相关基因表达的作用。HIF是由1个不稳定的氧气浓度依赖的α亚基(HIF-α)和1个稳定的不受氧气调节持续表达的β亚基(HIF-β)组成的异源二聚体。人的序列同源性的α亚基有3种,包括HIF-1α、HIF-2α和HIF-3α。相对于HIF-1α和HIF-2α亚基,对HIF-3α亚基的研究还是相对匮乏的。HIF-3α被认为是HIF-1α和HIF-2α的负调控因子,由于其具有多种剪接变异体,因此HIF-3α参与多种生理功能。该综述对HIF-3α的结构,剪接变异体,表达调控及其各种生理功能进行了系统的阐述,并对今后的研究方向进行了展望。

信号转导及转录激活因子3在肿瘤发生发展中的作用

组成型激活的信号转导及转录激活因子3(STAT3)在肿瘤组织中高表达,可能参与肿瘤的发生、转移及耐药。研究发现P53、制瘤素(OSM)、Piwi、Ras同源物Ⅰ(ARHⅠ)、BRCA1、血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、生存素(survivin)等基因在肿瘤组织中异常表达时,伴随着STAT3的磷酸化升高,进一步研究证明P53、Piwi、制瘤素、ARHⅠ、BRCA1、VEGF、HIF-1α、生存素等基因可能直接或间接影响STAT3而影响肿瘤的发生、发展。此外,STAT3对肿瘤细胞及宿主免疫起着重要的调节作用。STAT3活化从肿瘤细胞传播到肿瘤相关的免疫细胞导致免疫抑制,为肿瘤的发生提供有利的环境。本文就STAT3在肿瘤形成中的作用进行综述,以便为肿瘤的治疗提供新的靶点。

SOCS3过表达细胞模型的建立

目的建立体外高表达细胞因子信号转导负调控蛋白3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的细胞模型,为进一步研究SOCS3在炎症因子信号通路中的作用机制提供研究手段。方法通过RT-PCR克隆SOCS3的编码片段,连接至pIRES2-EGFP真核表达质粒,经测序鉴定后,转染至293T细胞。通过荧光显微镜观测转染效率,RT-PCR和Western印迹法检测SOCS3表达情况,同时检测SOCS3高表达对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的信号转导和转录激活因子3(signal transducers and activators of transcription 3,STAT3)磷酸化的影响。结果经测序证实,pIRES2-EGFP-SOCS3重建质粒中的SOCS3序列完全正确,转染后细胞中可见明显绿色荧光,且SOCS3在mRNA和蛋白水平表达均显著增加,过表达SOCS3可显著抑制由LPS诱导的STAT3的磷酸化。结论成功构建SOCS3基因重组质粒,转染293T细胞,获得高表达具有功能性SOCS3分子。该细胞模型建立为进一步研究SOCS3的调节机制提供了有利工具。

口腔鳞状细胞癌组织中CyclinD_3的表达及意义

口腔鳞状细胞癌（OSCC）在口腔颌面部恶性肿瘤中常见,其发生与基因表达改变有密切的关系[1]。CyclinD3是细胞周期中G3期进入S期的重要调控因子,G3→S期间调控点是细胞内外信号传递,整合汇集到细胞核。

Naps4调控海马CA3区背景记忆的形成

背景记忆的快速编码依赖于海马CA3区,但其具体的路径仍不清除。Ramamoorthi等证实转录因子Npas4可控制海马CA3区内背景记忆相关的转录系统,是基因系统的主要调节器和记忆形成的关键。该研究成果发表在新一期的《Science》上。研究者在仅有背景学习（C）、仅有电击（S）以及二者结合（C＋S）的恐惧背景条件下训练小鼠并检测其训练后的基因表达,发现Naps4仅由C＋S和C诱导,提示Naps4可能由神经元活动和背景学习选择性诱导表达。

MDPC-23细胞内核心结合因子A1增强Smad3调控牙本质涎磷蛋白基因的表达

目的 :研究转录因子核心结合因子A1(CBFA1)在Smad分子调控牙本质涎磷蛋白 (DSPP)基因表达中的作用。方法 :细胞培养 ,基因转染和报告基因检测。结果 :转化生长因子 β1(TGF β1)抑制DSPP基因启动子活性的表达。Smad3过表达显著增强了TGF β1对DSPP基因表达的转录抑制。单独过表达CBFA1对DSPP基因启动子活性无明显影响。但是 ,CBFA1与Smad3共转染显著增强Smad3对DSPP基因启动子的抑制作用 ,在TGF β1存在时 ,其作用进一步增强。结论 :在成牙本质细胞系MDPC 2 3内 ,CBFA1可能作为一种转录因子协同调控Smad3对DSPP基因转录的调控。

Caspase-3基因表达调控研究进展

Caspase-3是细胞凋亡过程中发挥重要功能的凋亡执行蛋白之一。Caspase-3介导的非凋亡功能也倍受关注。Caspase-3发挥功能建立在酶原活化基础之上,因此,大量研究关注于caspase-3的活化过程。然而,越来越多证据显示caspase-3基因表达水平变化与诸多疾病过程密切相关。因此,就caspase-3基因表达调控相关研究进行综述,介绍caspase-3基因及5'-侧翼序列结构,并从表观遗传水平、转录水平、转录后microRNA作用、翻译水平等层面介绍caspase-3基因表达调控。

柯萨奇病毒B3感染对心肌趋化因子表达谱的调控作用

目的 研究柯萨奇病毒 (CV)B3感染对心肌组织 /细胞趋化因子 (ChKs)表达谱的调控作用。方法 以CVB3感染BALB/c小鼠和体外培养的BALB/c乳鼠心脏细胞 ,建立体内、外CVB3感染模型 ;RT PCR定性和实时定量分析不同CVB3感染时间点和不同CVB3载量下 1 1种ChKs的表达。结果 在体内 ,CVB3感染后心肌组织中MIP 2和IP 1 0诱导性表达 ,组成性表达的SDF 1、MCP 1、MCP 2、MCP 3、MCP 5、MDC、FKN和Ltn中MCP 1、MCP 2、MCP 3、MCP 5、MDC和Ltn上调表达 ,分别是未感染对照的 1 8、1 9、3 7、1 7、1 3和 1 2倍 ,均差异有显著性 (P均小于 0 0 1 ) ,SDF 1和FKN与未感染对照相比 ,差异均无显著意义 (P >0 0 5)。Eot在感染和未感染心肌组织均未检出表达。在不同的感染时间点ChKs的表达不同 ,MIP 2在感染第 4天的表达量分别是第 7天和第 1 4天的 1 1和 1 5倍 ,均差异有显著性 (P <0 0 1 ) ;IP 1 0的表达在第 4天和第 7天未表现显著性区别 (P >0 0 5) ,但分别是第 9天的 2 47和 2 54倍 (P <0 0 1 ) ;MCP 1第 1 4天的表达量分别是第4、7和 9天的 1 3、1 2和 1 0倍 ,相差均有显著性意义。MCP 2第 4天的表达量是第 7、9和 1 4天的1 4、1 5和 2 2倍 ,差异有显著意义 (P <0 0 1 ) ,且 1 4d表达量低于基础表?

小菜蛾颗粒体病毒晚期表达因子基因的功能分析

小菜蛾颗粒体病毒(Plutella xylostella granulovirus,PlxyGV)基因组含有15个杆状病毒晚期表达因子(Lateexpression factor,lef)基因同源物。PlxyGV的14个lef基因(不包括ie-0)预期编码产物与苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica multicapsid nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)LEF蛋白的序列相似度为13%～53%。其中,LEF-8、LEF-9和P47在两种病毒之间的相似度较高,分别为49%、53%和46%。为了研究不同杆状病毒种间lef基因的功能相关性,验证PlxyGVlef基因的功能,本文利用AcMNPV的一个瞬时表达实验系统测试PlxyGVlef基因在Sf9细胞中激活AcMNPV晚期启动子控制的报告基因表达的能力。实验结果显示,在其它AcMNPVlef基因都存在的情况下,PlxyGVlef-2能够部分替代AcMNPVlef-2的活性。序列对比结果显示Plx-yGV LEF-2的C端末比其它GV和鳞翅目NPV的LEF-2分别多出约100aa和70aa。

AcMNPV LEF-10第21位突变对其活性的影响

【目的】对苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)晚期表达因子LEF-10的第21位保守氨基酸残基进行饱和点突变,研究该位点突变对AcMNPV活性的影响,为进一步研究LEF-10朊病毒特性及其在病毒复制中的作用奠定基础。【方法】同源序列比对发现,LEF-10第21位亮氨酸残基高度保守。对pTriEx质粒载体上LEF-10第21位的亮氨酸残基通过异位回补进行饱和突变,将构建好的重组质粒与线性化的BacmidΔlef-10共转染草地贪夜蛾Sf9细胞构建重组病毒,研究LEF-10第21位上不同氨基酸残基对病毒活性的影响。同时联用Red/ET基因敲除系统和rpsl反向筛选系统对AcMNPV Bacmid的LEF-10基因进行原位突变,突变后的线性化Bacmid与pTriEx-p(p10)-dsRed质粒共转染草地贪夜蛾Sf9细胞构建原位突变型病毒,研究点突变对重组病毒活性的影响,并通过流式细胞术检测突变型病毒对晚期基因表达的影响。【结果】异位回补点突变重组病毒和原位点突变重组病毒转染和感染Sf9细胞的结果均表明,当LEF-10第21位亮氨酸残基突变为异亮氨酸残基、丙氨酸残基、缬氨酸残基、脯氨酸残基、半胱氨酸残基和甲硫氨酸残基时,可以拯救LEF-10缺陷型病毒,并产生具有感染性的重组病毒,但其他突变型重组病毒均为致死突变。将7种原位突变重组病毒分别以高MOI(MOI=10)和低MOI(MOI=1)感染Sf9细胞,结果表明低MOI感染Sf9细胞时,7种重组病毒外源蛋白的表达水平相当;高MOI感染Sf9细胞时,7种重组病毒外源蛋白的表达水平差异明显,其中突变为丙氨酸残基的重组病毒将外源蛋白的表达维持在较高水平。【结论】LEF-10第21位氨基酸残基对其功能起着至关重要的作用,该位点氨基酸残基的性质影响AcMNPV的活性。

藤黄酸调节肺腺癌A549细胞甾体类受体共激活因子3表达的意义

目的观察藤黄酸对人肺腺癌细胞株A549增殖和凋亡的影响，及其对甾体类受体共激活因子3（SRC-3）表达的调控作用。方法以不同浓度的藤黄酸处理人肺腺癌A549细胞，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖活性，Hoechst 33258染色法分析细胞凋亡的改变，共聚焦显微镜观察A549细胞中SRC-3蛋白的分布情况，Western blot和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测藤黄酸对A549细胞中SRC-3 mRNA和蛋白表达的影响。结果藤黄酸能明显抑制A549细胞的增殖，其抑制作用呈时间和浓度依赖性，24和48h的半数抑制浓度（IC90）分别为（3．17±0．13）μmol／L和（1．85±0．08）μmol／L。藤黄酸能使A549细胞出现典型的细胞凋亡形态改变。空白对照组的A549细胞中，SRC-3 mRNA和蛋白均呈高表达，且主要分布于细胞核；经藤黄酸处理后，A549细胞中SRC-3 mRNA和蛋白的表达水平均明显下降。结论藤黄酸能明显抑制人肺腺癌细胞A549的增殖，并可能通过下调SRC-3 mRNA和蛋白的表达量而诱导A549细胞产生凋亡。藤黄酸有望成为治疗肺癌的新型靶点药物。

微RNA-198在结直肠癌中调控Elf3的表达并抑制细胞增殖

目的 :分析并验证调控E74样因子3(E74-like factor 3,Elf3)表达的微RNA(microRNA,miRNA),并探索该miRNA对结直肠癌细胞功能的影响。方法 :运用数据库miRGen Targets、miRNA Viewer及MicroCosm Targets分析调控Elf3表达的miRNA。根据miRNA序列设计miRNA模拟物及抑制因子,应用miRNA转染技术改变结直肠癌SW1116细胞中该miRNA表达水平后,采用实时荧光定量-PCR法和蛋白质印迹法检测Elf3表达水平的变化。同时,提取30例结直肠癌组织及对应癌旁正常黏膜组织的RNA,反转录并实时荧光定量-PCR检测该miRNA和Elf3的表达水平。FCM和MTT法分别检测该miRNA模拟物转染对结直肠癌SW1116细胞周期、凋亡和增殖能力的影响。结果 :数据库分析显示,微RNA-198(microRNA-198,miR-198)可调控Elf3表达。应用其模拟物转染可显著提高结直肠癌SW1116细胞中miR-198水平(P<0.01),并下调Elf3表达(P<0.01);相反,miR-198抑制因子转染可显著降低miR-198的水平(P<0.01),并上调Elf3的表达(P<0.01)。同时,与癌旁正常黏膜组织相比,结直肠癌组织中miR-198表达水平降低(P<0.01),且与Elf3表达呈负相关(P<0.001,r2=0.697 3)。miR-198模拟物转染可抑制结直肠癌细胞增殖(P<0.01),但对细胞周期和凋亡没有明显影响(P>0.05)。结论 :miR-198在结直肠癌中可调控Elf3的表达,并抑制结直肠癌细胞增殖。