栀子苷调节HMGB1-RAGE信号通路对子痫前期大鼠血管内皮细胞损伤的影响

目的 探究栀子苷调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路对子痫前期大鼠胎盘损伤的保护作用。方法 将妊娠大鼠分为对照组、模型组、栀子苷低剂量[25 mg/(kg·d)]组、栀子苷高剂量[100 mg/(kg·d)]组、丙酮酸乙酯[EP,HMGB1抑制剂,40 mg/(kg·d)]组,皮下注射一氧化氮合酶抑制剂L-NAME建立子痫前期大鼠模型。在第14、17、19天测定各组大鼠收缩压和24 h尿蛋白水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平变化,采用试剂盒测定胎盘组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平,采用HE染色观察胎盘组织形态变化,采用Western blot检测胎盘组织HMGB1、RAGE、核转录因子-κB(NF-κB)、p-NF-κB、淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bax)蛋白水平。结果 与对照组相比,模型组大鼠在第14、17、19天收缩压和24 h尿蛋白水平,血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平、胎盘组织MDA水平、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白水平显著升高,胎盘组织中SOD、GSH、Bcl-2蛋白水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,栀子苷低、高剂量组大鼠在第17、19天收缩压和24 h尿蛋白水平、血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平、胎盘组织中MDA水平、HMGB1、RAGE、p-NF-κB/NF-κB、Bax蛋白水平显著降低,胎盘组织SOD、GSH水平、Bcl-2蛋白水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 栀子苷可缓解子痫前期大鼠胎盘组织损伤,可能是通过抑制HMGB1-RAGE信号通路实现的。

鸡血藤提取物改善缺血性脑卒中大鼠免疫抑制的作用及对HMGB1/RAGE信号通路介导AQP-4和GAP-43表达的影响

目的 探究鸡血藤提取物通过高迁移率族蛋白(HMG)B1/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路介导水通道蛋白(AQP)-4、生长相关蛋白(GAP)-43表达改善缺血性脑卒中大鼠免疫抑制的机制。方法 通过栓线法构建缺血性脑卒中大鼠模型,45只模型大鼠分为模型组、鸡血藤1.5和鸡血藤3.0组(n=15)。另取15只假手术大鼠作为对照组。鸡血藤提取物灌胃剂量为1.5和3.0 g/kg。2 w后比较各组改良大鼠神经功能评分(mNSS)、脑组织损伤、神经元凋亡、HMGB1/RAGE信号通路、AQP-4、GAP-43水平及T细胞亚群水平。结果 模型组mNSS、凋亡率、HMGB1、RAGE、AQP-4、GAP-43 mRNA及蛋白水平明显优于对照组,而CD3^(+)、CD4^(+)、CD8^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)比值均显著低于对照组(P<0.05)。鸡血藤1.5组的mNSS评分、凋亡率、HMGB1、RAGE、AQP-4、GAP-43 mRNA和蛋白水平显著低于模型组,CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)比值均显著高于模型组(P<0.05)。鸡血藤3.0组mNSS评分、凋亡率、HMGB1、RAGE、AQP-4、GAP-43 mRNA和蛋白水平显著低于鸡血藤1.5组,CD3^(+)、CD4^(+)和CD4^(+)/CD8^(+)比值均显著高于鸡血藤1.5组(P<0.05)。结论 鸡血藤提取物具有抑制HMGB1/RAGE通路、保护缺血性脑卒中大鼠神经元、解除免疫抑制的作用。

大豆Em(LEA1)蛋白保守结构域的结构和聚集特性

采用圆二色谱(CD)和核磁共振波谱(NMR)方法研究了大豆Em(LEA1)蛋白保守基序Em-C和Em-2M多肽在不同环境中的结构及聚集行为。研究表明,在水和DMPG溶液中,两种多肽主要以无规结构形式存在。在50%TFE溶液中,Em-C多肽折叠结构增加,含疏水残基的部分区域可能形成α-螺旋结构,且分子以二聚体形式存在;而Em-2M则以单体形式存在,且有序结构较少。以上结果表明,环境变化可能导致两种多肽的空间结构和聚集行为改变,这有助于理解Em蛋白在不同环境中的结构特点,及其重要区域在全长蛋白中所起的作用。

茯苓酸改善多囊卵巢综合征大鼠胰岛素抵抗的作用及机制研究

目的研究茯苓酸对多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠胰岛素抵抗的改善作用及机制。方法将126只雌性大鼠按随机数字表法分为空白组、PCOS组、茯苓酸低剂量组(8.33 mg/kg)、茯苓酸高剂量组(33.32 mg/kg)、炔雌醇环丙孕酮组(阳性对照组,0.34 mg/kg)、重组大鼠高迁移率族蛋白B1蛋白(rHMGB1)组(8μg/kg)和茯苓酸高剂量+rHMGB1组(33.32 mg/kg茯苓酸+8μg/kg rHMGB1),每组18只。除空白组外,其余各组大鼠均通过灌胃来曲唑混悬液的方式构建PCOS模型。建模成功后,每天给药1次,持续4周。给药结束后,检测大鼠空腹血糖、空腹胰岛素水平及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),检测大鼠血清中促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平及卵巢组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,计算大鼠卵巢系数,观察大鼠卵巢组织病理变化,检测大鼠卵巢组织中HMGB1、晚期糖基化终产物受体(RAGE)、磷酸化核因子κB p65(p-NF-κB p65)蛋白表达情况。结果与空白组比较,PCOS组大鼠卵巢组织病理损伤严重,空腹血糖、空腹胰岛素水平、HOMA-IR、卵巢系数升高,血清中LH和T水平升高、FSH水平降低,卵巢组织中IL-1β、TNF-α水平及HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65蛋白表达量升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。与PCOS组比较,茯苓酸低、高剂量组和炔雌醇环丙孕酮组大鼠卵巢组织病理损伤减轻,空腹血糖、空腹胰岛素水平、HOMA-IR、卵巢系数降低,血清中LH和T水平降低、FSH水平升高,卵巢组织中IL-1β、TNF-α水平及HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65蛋白表达量降低,差异均具有统计学意义(P<0.05);rHMGB1组大鼠对应指标的变化趋势与上述给药组相反(P<0.05)。与茯苓酸高剂量组比较,茯苓酸高剂量+rHMGB1组大鼠的上述指标变化均被显著逆转(P<0.05)。结论茯苓酸可能通过抑制HMGB1/RAGE信号通路改善PCOS大鼠胰岛素抵抗并抑制其炎症反应。

柠檬苦素对溃疡性结肠炎大鼠肠道损伤和肠道菌群紊乱的改善作用及机制

目的探究柠檬苦素对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠道损伤和肠道菌群紊乱的改善作用及机制。方法构建UC大鼠模型,将建模成功的70只大鼠随机分为模型组和柠檬苦素低、中、高剂量组(12.5、25、50 mg/kg)以及柳氮磺胺吡啶组(阳性对照组,500 mg/kg),每组14只;另取14只大鼠作为对照组。各组大鼠灌胃相应药液或等量生理盐水,每天1次,连续2周。末次给药结束24 h后,观察大鼠一般情况并称重,取结肠组织进行结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;检测大鼠结肠组织中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;观察大鼠结肠组织病理学变化;检测大鼠结肠组织中紧密连接蛋白1(Claudin-1)、闭合蛋白(Occludin)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、晚期糖基化终末产物受体(RAGE)蛋白的表达水平;基于16S rRNA检测大鼠肠道菌群的相对丰度。结果与对照组相比,模型组大鼠精神状态不佳、皮毛较暗、情绪烦躁易发怒,结肠组织腺体排列杂乱,出现炎症细胞浸润和细胞坏死、水肿现象;CMDI评分和结肠组织中IL-1β、IL-6、TNF-α水平,HMGB1、RAGE蛋白表达水平以及肠道变形菌门、拟杆菌门菌群的相对丰度均显著升高(P<0.05);体重和结肠组织中Claudin-1、Occludin、ZO-1蛋白表达水平以及肠道厚壁菌门菌群的相对丰度均显著降低(P<0.05)。与模型组相比,柠檬苦素各剂量组大鼠一般情况和结肠组织病理损伤均改善,上述指标水平均显著逆转(P<0.05),且具有剂量依赖性(P<0.05);柳氮磺胺吡啶组与柠檬苦素高剂量组大鼠各项指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论柠檬苦素可改善UC模型大鼠肠道损伤及肠道菌群紊乱,其作用机制可能与下调HMGB1/RAGE信号通路活性有关。

芒柄花素对脓毒症大鼠急性肺损伤和免疫功能的影响及其机制

目的探讨芒柄花素(Formo)调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路对脓毒症大鼠急性肺损伤和免疫功能的影响。方法通过盲肠结扎和穿刺方法建立脓毒症大鼠,将造模后的大鼠随机分为脓毒症组、低剂量Formo(Formo-L)组(15 mg/kg Formo)、Formo中剂量(Formo-M)组(30 mg/kg Formo)、Formo高剂量(Formo-H)组(60 mg/kg Formo)、Formo-H^(+)重组HMGB1蛋白(rHMGB1)组(60 mg/kg Formo^(+)8μg/kg rHMGB1),并以仅做切口,不进行盲肠结扎或穿刺的大鼠为假手术组。干预结束后,检测大鼠肺组织湿干比(W/D);腹部取血,流式细胞术及ELISA分别检测大鼠免疫功能及白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;苏木精-伊红(HE)染色检测右肺上叶病理学变化;Western blot检测肺组织中HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路相关的蛋白表达。结果与对照组相比,脓毒症组肺组织病理损伤严重,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)显著降低,TNF-α,IL-1β,IL-6水平、病理损伤评分、W/D、CD8^(+)、HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达比较显著增加(P<0.05);与脓毒症组相比,Formo-L组、Formo-M组、Formo-H组病理损伤得到改善,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)显著增加,TNF-α,IL-1β,IL-6水平、病理损伤评分、W/D、CD8^(+)、HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著降低,组间有差异(P<0.05);与Formo-H组相比,Formo-H^(+)rHMGB1组病理损伤加重,CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)显著降低,TNF-α,IL-1β,IL-6水平、病理损伤评分、W/D、CD8^(+)、HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65/NF-κB p65表达显著增加(P<0.05)。结论Formo可能通过抑制HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路减轻脓毒症大鼠急性肺损伤,提高免疫功能。

HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB信号通路与脓毒症关系的研究进展

高迁移率族蛋白B1(HMGB1)作为晚期炎症因子可促进早期炎症因子释放,不断触发并维持下游炎症反应,其受体主要有晚期糖基化终产物受体和Toll样受体,受体活化后可激活各种信号通路,并激活NF-κB信号转导通路枢纽,进而上调各种炎症因子,促进炎症级联反应,进一步促进脓毒血症发展。本文对HMGB1介导的信号通路HMGB1-RAGE/TLRs-NF-κB与脓毒症关系的研究进展作一综述。

原核高效制备人乳头瘤病毒16型L1病毒样颗粒

目的通过原核表达系统高效制备人乳头瘤病毒(HPV)16晚期蛋白L1病毒样颗粒(VLPs)。方法构建HPV16L1基因序列优化前后的PET30aHPV16L1重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta(DE3);用IPTG诱导目的基因表达,两步层析方法纯化HPV16L1蛋白;电镜下观察纯化产物形成VLPs的情况。结果成功构建大肠杆菌工程菌,高效可溶表达(目的蛋白约占总蛋白的38%)并纯化HPV16L1蛋白,纯度达95%以上,电镜下观察,发现纯化后的目的蛋白为直径50 nm左右,形态与天然病毒颗粒高度相似。结论在大肠杆菌原核系统中高效、简易地制备了HPV16L1VLPs,为诊断试剂和疫苗的研制奠定基础。

基于HMGB1-RAGE信号通路研究奥拉米特预防抗结核药物性肝损伤的作用机制

目的:初步探讨奥拉米特预防抗结核药物性肝损伤(ATB-DILI)的可能机制。方法:将60只昆明小鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组[甘草酸二铵60 mg/(kg·d)]和奥拉米特低、中、高剂量组[80、160、320 mg/(kg·d)],每组10只。除空白组外,其余各组小鼠均灌胃异烟肼[75 mg/(kg·d)]+利福平[75 mg/(kg·d)]14 d以复制ATB-DILI模型。与此同时,各给药组小鼠灌胃相应药液,空白组和模型组小鼠灌胃生理盐水,给药体积均为20 mL/(kg·d),每天给药1次,连续给药14 d。每天观察并记录小鼠生长发育、精神状态、饮食等一般情况。末次给药后,计算其肝指数,以苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠肝组织病理学改变,采用链霉抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物(SABC)免疫组化法检测其肝组织中高速泳动族蛋白B1(HMGB1)、核因子κB(NF-κB)的阳性表达情况,采用酶联免疫吸附法检测其血清中肝功能指标水平和肝组织中晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达情况。结果:与空白组比较,模型组小鼠生长发育迟缓,食欲、精神等差,肝指数和血清中总胆红素、直接胆红素、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶(ALP)、总胆汁酸(TBA)、γ-谷氨酰转肽酶水平均显著升高(P<0.05);肝小叶结构紊乱,肝细胞变性、坏死,并伴炎症细胞浸润;肝组织中HMGB1、NF-κB、RAGE、TNF-α的表达均显著增强(P<0.05)。与模型组比较,奥拉米特低、中、高剂量组和阳性对照组小鼠的一般情况均有不同程度好转,肝指数和上述血清指标均显著降低(P<0.05),肝组织病理学变化均有不同程度改善,肝组织中HMGB1、NF-κB、RAGE、TNF-α的表达均显著降低(P<0.05),且奥拉米特高剂量组上述指标改善效果均显著优于奥拉米特低、中剂量组(P<0.05),ALP、TBA水平显著低于阳性对照组(P<0.05)。结论:奥拉米特能够预防异烟肼联合利福平所致的小鼠ATB-DILI,其机制可能与下调肝组织HMGB1和RAGE蛋白表达、抑制炎症因子分泌有关。

人乳头瘤病毒16型晚期蛋白L1的表达及病毒样颗粒的装配

目的 在昆虫细胞中表达人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )哈尔滨地区分离株的晚期蛋白L1,并分离纯化由L1蛋白在细胞中自主组装成的病毒样颗粒 ,为HPV16预防性疫苗的研制奠定基础。方法 获得含有HPV16L1基因的重组杆状病毒并使目的蛋白L1在昆虫细胞中表达 ;对重组杆状病毒的扩增条件及L1蛋白的表达水平进行优化 ;电镜下观察昆虫细胞中晚期蛋白装配成病毒样颗粒的情况 ,经氯化铯密度梯度纯化病毒样颗粒 ,并经Westernblot进行验证。结果 获得了稳定表达L1蛋白的重组杆状病毒 ;以MOI值为 0 .2感染昆虫细胞可获得较高滴度的重组病毒 ,以MOI值为 10感染昆虫细胞可获得较高水平的L1蛋白表达 ;电镜下可观察到昆虫细胞核内直径为 5 5nm的病毒样颗粒 ;病毒样颗粒可通过氯化铯密度梯度离心获得。结论 获得人乳头瘤病毒哈尔滨地区分离株L1蛋白可在昆虫细胞中自主装配的病毒样颗粒并成功分离纯化。

欧前胡素调节HMGB1-RAGE-NF-κB信号通路对高糖诱导的视网膜内皮细胞损伤的影响

该研究探讨欧前胡素(IMP)调节高迁移率族蛋白B1(HMGB1)-晚期糖基化终产物受体(RAGE)-核转录因子κB(NF-κB)信号通路对高糖诱导的视网膜血管内皮细胞损伤的影响。使用10~320μmol/L的IMP处理高糖诱导的视网膜血管内皮细胞hRECs,筛选最佳药物浓度;将视网膜血管内皮细胞hRECs细胞分为正常糖组(NG组,5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG组,25 mmol/L葡萄糖)、低浓度欧前胡素组(IMP-L组,25 mmol/L葡萄糖+20μmol/L IMP)、中浓度欧前胡素组(IMP-M组,25 mmol/L葡萄糖+40μmol/L IMP)、高浓度欧前胡素组(IMP-H组,25 mmol/L葡萄糖+80μmol/L IMP)、高浓度欧前胡素+重组HMGB1蛋白组(IMP-H+rHMGB1组,25 mmol/L葡萄糖+80μmol/L IMP+200μg/L rHMGB1)。CCK-8试剂盒检测hRECs细胞活性;流式细胞仪检测hRECs细胞凋亡的情况;管腔形成实验检测细胞血管生成;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、MDA水平和SOD水平;Western blot检测HMGB1-RAGE-NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。结果显示,IMP可以促进高糖诱导的hRECs增殖,且呈浓度依赖性,选择浓度为20、40、80μmol/L的IMP进行后续实验;与NG组比较,HG组细胞存活率、SOD活性降低,细胞凋亡率,管腔形成数,IL-6、TNF-α、IL-1β、MDA水平及HMGB1、RAGE、NF-κB p65蛋白表达水平升高(P<0.05);与HG组比较,IMP-L组、IMP-M组、IMP-H组细胞存活率、SOD活性升高,细胞凋亡率,管腔形成数,IL-6、TNF-α、IL-1β、MDA水平及HMGB1、RAGE、NF-κB p65蛋白表达水平降低,且呈浓度依赖性(P<0.05);与IMP-H组比较,IMP-H+rHMGB1组细胞存活率、SOD活性显著降低,细胞凋亡率,管腔形成数,IL-6、TNF-α、IL-1β、MDA水平及HMGB1、RAGE、NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结果表明,IMP可能通过抑制HMGB1-RAGENF-κB信号通路,降低炎症反应和细胞凋亡水平,进而减轻高糖诱导的视网膜血管内皮细胞损伤。

表达HPV18晚期蛋白L1重组毕赤酵母在30L Sartorious生物反应器(C_(30)-3)中的培养与诱导工艺摸索及优化

采用改良后的低盐培养基在30 L Sartorious生物反应器(C30-3)对表达18型人乳头瘤病毒(Human papillom avirus,HPV)晚期蛋白L1重组毕赤酵母进行培养,探讨了在重组毕赤酵母细胞积累阶段和HPV18晚期蛋白L1诱导表达阶段不同的培养基配方、p H值、温度、搅拌转速、溶氧(DO)、重组毕赤酵母细胞积累阶段甘油的补加方式、去除阻碍物甘油的去阻碍时间、重组毕赤酵母表达HPV18晚期蛋白L1阶段诱导剂甲醇的补加方式等工艺参数对表达HPV18晚期蛋白L1重组毕赤酵母的影响。优化后的低盐培养基更适合重组毕赤酵母细胞的生长;重组毕赤酵母细胞积累阶段的培养过程中维持培养液p H值5.0,温度31℃,DO 20%~25%,搅拌转速500 r/min,培养到第20 h开始以恒速补加3 000 m L 40%甘油溶液,培养至重组毕赤酵母细胞湿重≥190 g/L,停止甘油补加,继续培养重组毕赤酵母4 h,消耗阻碍HPV18晚期蛋白L1表达的甘油;之后进入重组毕赤酵母表达HPV18晚期蛋白L1诱导阶段,维持培养液p H值5.2,温度29℃,DO含量45%,搅拌转速600 r/min,控制培养液中甲醇浓度为4%在线补加甲醇,诱导60 h,HPV18晚期蛋白L1的表达量达到了311.43 mg/L。利用30 L Sartorious生物反应器(C30-3)对表达HPV18L1重组毕赤酵母进行培养,经过多次试验建立起了稳定的重组毕赤酵母表达HPV18晚期蛋白L1工艺。

基于HMGB1/RAGE信号通路探讨炎调方保护脓毒症急性胃肠损伤大鼠的机制

目的基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终末产物受体(RAGE)信号通路研究炎调方保护脓毒症急性胃肠损伤(AGI)大鼠的作用机制。方法共选取90只SD大鼠,随机分成假手术组、模型组、炎调方高剂量(29.6g/kg)组、中剂量(14.8g/kg)组和低剂量(7.4g/kg)组,每组18只。除假手术组外,均建立脓毒症AGI模型。用药后观察大鼠生存率;对大鼠的肠道肌电活动情况以及肠道内大肠埃希菌、双歧杆菌、乳酸杆菌的含量进行了测定;用苏木素-伊红染色(HE)法测定各组大鼠肠黏膜组织的病理改变;采用ELISA法测定TNF-α、IL-6的含量;免疫组化测定Claudin-1、ZO-1蛋白含量;采用QRT-PCR法对HMGB1、RAGE的mRNA表达情况进行检测。结果与模型组对比,随着炎调方剂量增加,各组大鼠生存率、肠道平滑肌的慢波频率与振幅、肠黏膜的厚度与绒毛高度、肠道内双歧杆菌与乳酸杆菌的含量、回肠组织Claudin-1、ZO-1蛋白的表达均有显著提升(P<0.05)。同时,大鼠血清中的TNF-α、IL-6水平、肠道大肠杆菌含量、以及HMGB1与RAGE的mRNA表达量均有显著下降(P<0.05),差异存在统计学意义(P<0.05)。结论炎调方具有改善脓毒症AGI大鼠肠黏膜损伤、抑制炎症反应和恢复肠道内环境稳态的能力,这可能与炎调方通过HMGB1/RAGE信号轴来调节肠道屏障功能有关。

普鲁卡因调节HMGB1-RAGE信号通路对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用研究

目的探讨普鲁卡因(PCA)调节高迁移率族蛋白1-晚期糖基化终末产物受体(HMGB1-RAGE)信号通路对脑缺血/再灌注(CI/R)大鼠的神经保护作用。方法采用线栓法制备CI/R大鼠模型,缺血处理2 h,再灌注24 h。将大鼠随机分为假手术组,模型组(CI/R组),普鲁卡因低、中、高剂量组(PCA-L组、PCA-M组、PCA-H组),普鲁卡因高剂量+HMGB1重组蛋白组(PCA-H+HMGB1组),各组n=10。对大鼠进行神经功能评分,苏木精-伊红染色法观察大鼠脑组织海马CA1区组织病理变化,Tunel染色法检测大鼠脑组织海马CA1区神经元凋亡,酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠脑组织中TNF-α、IL-1β水平;免疫组化法检测大鼠脑组织NGF表达;Western blot法检测大鼠脑组织中HMGB1、RAGE表达。结果与假手术组比较,CI/R组脑组织损伤严重,神经功能评分、神经元凋亡率、IL-1β及TNF-α水平、NGF表达、HMGB1及RAGE表达均显著升高(均P<0.05);与CI/R组比较,PCA-L组、PCA-M组、PCA-H组大鼠脑组织损伤相对减轻,神经功能评分、神经元凋亡率、IL-1β及TNF-α水平、HMGB1及RAGE表达均呈显著降低,NGF表达显著升高,呈剂量依赖效应(P<0.05);与PCA-H组比较,PCA-H+HMGB1组大鼠脑组织损伤加重,神经功能评分、神经元凋亡率、IL-1β及TNF-α水平、HMGB1及RAGE表达均显著升高,NGF表达显著降低(均P<0.05)。结论普鲁卡因对CI/R大鼠的神经具有一定的保护作用,其机制可能与抑制HMGB1-RAGE信号通路激活相关。

人乳头瘤病毒58 L1蛋白羧基端核定位信号在毕赤酵母细胞中的入核功能

目的研究人乳头瘤病毒(Human papilloma virus,HPV)58晚期蛋白1(L1)羧基端核定位信号在毕赤酵母细胞中的入核功能。方法分别构建全长HPV58L1基因和缺失羧基端核定位信号的HPV58L1基因与绿色荧光蛋白(Green fluores-cent protein,GFP)基因融合的重组表达质粒,在毕赤酵母中表达相应蛋白,用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白在毕赤酵母细胞中的分布情况。结果融合基因表达质粒经双酶切及测序证实构建正确;表达的融合蛋白没有聚集在毕赤酵母细胞核中,而是随机地分布在毕赤酵母细胞细胞核和细胞质中。结论 HPV58 L1蛋白的羧基端核定位信号在毕赤酵母细胞中不发挥主动入核的功能。

CaSki细胞内HPV L1蛋白的表达

目的了解含人乳头瘤病毒(HPV)基因组的宫颈癌Ca Ski细胞中HPV晚期衣壳蛋白1(L1)的表达。方法以多价HPV L1小鼠单克隆抗体做探针,采用ELISA、免疫组化、Western blotting等方法,检测Ca Ski细胞内L1蛋白的表达;采用RT-PCR法检测细胞内L1 mRNA的表达。结果 Ca Ski细胞呈HPV L1阳性反应,显示细胞内有HPV L1蛋白存在;Ca Ski细胞内有L1 mRNA存在。结论包含HPV16混合基因组的Ca Ski细胞可以表达L1蛋白。

基于HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路探讨大黄牡丹汤对急性胰腺炎肠损伤大鼠的干预作用及机制

目的:基于高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物(RAGE)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路探讨大黄牡丹汤对急性胰腺炎肠损伤大鼠的干预作用及机制研究。方法:120只SPF级Wistar大鼠采用5%牛?胆酸钠逆行胰胆管注射制备急性胰腺炎(AP)肠损伤模型。随机分为正常组、模型组、大黄牡丹汤低、中、高剂量组(3.5、7、14 g·kg^(-1)),灌胃给药,奥曲肽组(1×10^(-5)g·kg^(-1)),皮下注射,每组20只,正常组和模型组大鼠给予等体积蒸馏水灌胃,于造模前1 h及造模后每隔12 h给药1次,造模后24 h收集样本。观察大鼠一般情况;生化法检测血清中淀粉酶(AMS)、C反应蛋白(CRP);酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结肠组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-6(IL-6)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察胰腺和结肠组织病理形态变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中HMGB1、RAGE、NF-κB抑制因子激酶(IKK)、核转录因子-κB抑制蛋白α(IκBα)、NF-κB mRNA及蛋白表达水平。结果:观察大鼠一般情况显示,与正常组比较,模型组大鼠出现一般生存状态不佳、扭体反应、大便次数减少及便质干等情况的改变;与模型组比较,各治疗组大鼠上述症状改善;与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤高剂量组症状改善最为明显。生化法检测血清AMS、CRP含量显示,与正常组比较,模型组大鼠AMS、CRP含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄牡丹汤组大鼠AMS、CRP含量降低(P<0.05);与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤高剂量组大鼠AMS、CRP含量明显降低(P<0.05)。ELISA检测结肠组织中TNF-α、IL-1β和IL-6含量显示,与正常组比较,模型组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄牡丹汤组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低(P<0.05);与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤高剂量组和奥曲肽组大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6含量明显降低(P<0.05)。HE染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠出现胰腺、结肠组织坏死、充血、结构不完整;与模型组比较,各治疗组大鼠的胰腺、结肠组织水肿、坏死程度明显改善;与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤高剂量组改善最为明显。Real-time PCR结果显示,与正常组比较,模型组大鼠HMGB1、RAGE、IKK、IκBα、NF-κBmRNA表达明显升高(P<0.05);与模型组比较,大黄牡丹汤各剂量组大鼠HMGB1、RAGE、IKK、IκBαmRNA表达水平明显降低(P<0.05);与大黄牡丹汤低剂量组比较,大黄牡丹汤中、高剂量组合奥曲肽组大鼠HMGB1、RAGE、IKK、IκBα、NF-κB mRNA表达水平降低,其中以大黄牡丹汤高剂量组表现最为明显(P<0.05)。Western blot结果与Real-time PCR分析结果趋势一致。结论:大黄牡丹汤对急性胰腺炎模型大鼠的一般情况、炎症指标及胰腺和结肠组织病理状态有较好的改善作用,其作用机制可能与抑制HMGB1/RAGE/NF-κB信号通路,减轻急性胰腺炎大鼠结肠组织细胞炎症反应有关。

迷迭香酸调节HMGB1/RAGE信号轴对溃疡性结肠炎大鼠肠屏障损伤及肠道菌群失调的影响

目的分析迷迭香酸(RA)对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠屏障损伤及肠道菌群失调的影响,并探究其作用机制。方法将大鼠随机分为对照组、UC组、RA低剂量组、RA中剂量组、RA高剂量组、RA高+重组高迁移率族蛋白1(rHMGB1)组,每组10只。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)联合乙醇处理建立UC大鼠模型,对各组大鼠进行疾病活动指数(DAI)评分和结肠黏膜损伤指数(CDMI)评分,苏木素伊红染色观察结肠组织病理变化并进行病理评分(HS),酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-1β水平,实时定量荧光PCR(qRT-PCR)检测肠道菌群中主要菌种数量,Western blot检测HMGB1、晚期糖基化终产物(RAGE)、核因子κB(NF-κB p65)、p-NF-κB p65、闭合蛋白-1(claudin-1)、带状闭合蛋白-1(ZO-1)及咬合蛋白(occludin)表达情况。结果与对照组相比,UC组大鼠结肠组织受损严重,大量炎性细胞浸润;DAI、CDMI和HS评分,IL-6、IL-1β水平,拟杆菌、大肠埃希菌、肠球菌数量,以及HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平均显著升高,IL-10水平、双歧杆菌和乳酸杆菌数量及Claudin-1、ZO-1、Occludin蛋白表达水平显著下降(均P<0.05)。与UC组相比,RA低、中、高剂量组结肠组织、肠黏膜、腺体结构损伤程度得到改善,DAI、CDMI和HS评分,IL-6、IL-1β水平,拟杆菌、大肠埃希菌、肠球菌数量及HMGB1、RAGE、p-NF-κB p65/NF-κB p65蛋白表达水平均显著下降,IL-10水平、双歧杆菌、乳酸杆菌数量及Claudin-1、ZO-1、Occludin蛋白表达显著升高(均P<0.05)。rHMGB1的使用可逆转RA对UC大鼠肠屏障损伤及肠道菌群失调的改善作用。结论RA可能通过抑制HMGB1/RAGE信号通路改善UC大鼠肠屏障损伤和肠道菌群失调,抑制炎症反应。

HMGB1/RAGE信号通路参与尼古丁调控支气管上皮细胞TGF-β1和FGF-2的分泌

目的本研究旨在探讨尼古丁是否通过高迁移率族蛋白1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路调控支气管上皮细胞转化生长因子β1(TGF-β1)和成纤维细胞生长因子2(FGF-2)的分泌。方法尼古丁(6×10^-6 mol/L)刺激支气管上皮细胞株16HBE,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测刺激24 h后细胞中HMGB1、TGF-β1和FGF-2分泌,Western blotting方法检测RAGE表达。预先加入HMGB1 siRNA孵育48 h或RAGE中和抗体孵育1 h,再加入尼古丁刺激16HBE 24 h,ELISA法检测HMGB1、TGF-β1和FGF-2的分泌,Western blotting方法检测RAGE的表达。结果尼古丁刺激24 h后HMGB1的分泌和RAGE的表达量较未予尼古丁刺激的正常对照组明显增加,TGF-β1和FGF-2的分泌量也显著增加。加入HMGB1 siRNA后尼古丁刺激24 h组,HMGB1的分泌量较单纯尼古丁刺激组明显减少,RAGE的表达量显著减少,同时TGF-β1和FGF-2的分泌量较单纯尼古丁刺激组显著减少。加入RAGE中和抗体后尼古丁刺激24 h组,TGF-β1和FGF-2的分泌量较单纯尼古丁刺激组显著减少。结论HMGB1/RAGE信号通路参与了尼古丁调控支气管上皮细胞TGF-β1和FGF-2的分泌。

葛根知母药对调控HMGB1/RAGE/NF-κB通路改善糖尿病大鼠认知障碍

目的:观察葛根知母水提物对糖尿病认知障碍大鼠认知功能的影响,评价其神经保护作用并探讨其机制。方法:取雄性SD大鼠,除空白对照组外均给予高脂高糖饲料喂养,50 d后腹腔注射链脲佐菌素(STZ) 35 mg/kg建立II型糖尿病认知障碍大鼠模型。造模成功后,随机分为模型对照组、多奈哌齐0. 03g/kg组、二甲双胍0. 15g/kg组、玉液汤7. 84g/kg组、葛根知母药对4. 62 g/kg、9. 24 g/kg组。给药30 d后,Morris水迷宫法进行行为学测试,结束后大鼠取血,检测血糖;部分动物处死取血检测糖化血红蛋白,取脑用Western Blot法检测脑组织高迁移率族蛋白B1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)/核转录因子(NF-κB)信号通路的蛋白表达,其余动物灌注取脑,进行RAGE和NF-κB免疫组化染色。结果:与空白对照组相比,模型组大鼠的逃避潜伏期、探索距离显著延长,且目标象限游泳时间显著缩短、站台穿越次数显著减少、NF-κB、RAGE平均灰度值显著降低、HMGB1、RAGE、pNF-кBp65、p-IкBα的表达显著上调(P <0. 05或P <0. 01);与模型对照组相比,葛根知母药对9. 24 g/kg组和玉液汤7. 84 g/kg组都可显著缩短模型大鼠的逃避潜伏期、探索距离,明显延长目标象限游泳时间、增多站台穿越次数,显著降低空腹血糖,明显增加大鼠体重、降低糖化血红蛋白水平,NF-κB、RAGE平均灰度值也明显升高,且HMGB1、RAGE、p-NF-кBp65、p-IкBα蛋白表达显著下调(P<0. 05或P <0. 01);葛根知母药对4. 62 g/kg组大鼠血糖明显降低,能够显著降低HMGB1、RAGE、p-NF-кBp65、p-IкBα的表达(P <0. 05或P <0. 01)。结论:葛根知母药对可明显改善糖尿病大鼠模型的认知功能障碍,其机制可能是通过降低血糖及糖化血红蛋白水平、调控脑内HMGB1/RAGE/NF-κB通路实现的。