普列克底物蛋白2/miR-196a信号轴介导肿瘤微环境中肺癌细胞的通讯机制研究

背景与目的:阐明介导肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts,CAFs)与肿瘤细胞之间通讯的信号分子仍然是一个巨大的挑战,这些信号分子对癌症转移至关重要。本研究旨在探讨普列克底物蛋白2(pleckstrin-2,PLEK2)/miR-196a信号轴介导肿瘤微环境中肺癌细胞的通讯机制。方法:选择人肺腺癌细胞系H1299和人胚胎肺细胞MRC-5作为研究对象。用表达PLEK2的慢病毒(PLEK2)和载体对照(Vector)转染H1299细胞,并在转染24 h后分离外泌体(Vector_exo、PLEK2_exo)。采用miR-196a模拟物或抑制剂转染MRC-5细胞。通过蛋白质印迹法(Western blot)分析PLEK2和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白水平,采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)分析miR-196a表达,采用transwell实验测定细胞转移和侵袭能力。将6只雌性BALB/c-nu小鼠随机分为Vector组和PLEK2组,每组3只。通过尾静脉向各组小鼠注射转染Vector或PLEK2的H1299细胞。4周后,取出肺组织进行H-E染色和免疫组织化学染色分析α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达。所有动物实验均经长沙市第一医院(中南大学湘雅医学院附属长沙医院)伦理委员会批准(伦理编号为EI-2021-103)。结果:与Vector组相比,PLEK2组小鼠肺结节数和转移灶中α-SMA表达显著增加(P<0.001)。与Vector组相比,PLEK2组H1229细胞中miR-196a表达水平显著增加(P<0.05),并且PLEK2_exo中miR-196a表达水平显著高于Vector_exo(P<0.05)。与Vector_exo组相比,PLEK2_exo组MRC-5细胞中miR-196a、α-SMA和成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)表达水平显著增加(P<0.05)。与阴性对照(negative control,NC)相比,miR-196a转染的MRC-5细胞中α-SMA和FAP表达水平显著增加(P<0.05)。相反,通过miR-196a抑制剂(si-miR-196a#1、si-miR-196a#)转染,α-SMA和FAP表达水平被显著抑制(P<0.05)。与NC-CM组相比,miR-196a-CM组H1299细胞的转移、侵袭细胞数和波形蛋白(vimentin)表达均显著增加(P<0.001),E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达显著降低(P<0.001)。此外,与Vector_exo-CM组相比,PLEK2_exo-CM组H1299细胞的转移、侵袭细胞数和vimentin表达均显著增加(P<0.01),E-cadherin表达显著降低(P<0.001)。结论:PLEK2上调能够增强肺癌细胞来源的外泌体miR-196a水平,从而促进CAFs激活。激活的CAFs能够进一步增强肺癌细胞的侵袭能力。

结直肠癌组织中circMYH9、PHLDA2基因表达与患者临床病理特征和预后的关系

目的探讨结直肠癌(CRC)组织中环状RNA(circ)MYH9、人普列克底物蛋白同源域家族A成员2(PHL-DA2)基因表达与患者临床病理特征和预后的关系。方法选取CRC患者98例,术中采集CRC组织及癌旁组织,荧光定量PCR法检测circMYH9、PHLDA2 mRNA表达,Pearson相关法分析CRC组织中circMYH9与PHLDA2 mRNA表达的相关性,分析circMYH9、PHLDA2 mRNA表达与CRC患者临床病理特征的关系;随访3年,分析circMYH9、PHL-DA2 mRNA表达与CRC患者预后的关系。结果CRC组织中circMYH9、PHLDA2 mRNA相对表达量均高于癌旁组织(P均<0.05)。CRC组织中circMYH9与PHLDA2 mRNA表达呈正相关(r=0.756,P<0.05)。CRC组织中circ-MYH9、PHLDA2 mRNA表达与肿瘤TNM分期、分化程度及淋巴结转移有关(P均<0.05),与患者性别、年龄、肿瘤最大径、肿瘤位置无关(P均>0.05)。98例CRC患者随访过程中死亡31例。circMYH9高表达组、低表达组生存时间、3年累积生存率比较差异均有统计学意义(P均<0.05);PHLDA2 mRNA高表达组、低表达组生存时间、3年累积生存率比较差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论CRC组织中circMYH9、PHLDA2高表达,二者表达变化与TNM分期、分化程度、淋巴结转移及预后有关。