普纳替尼(ponatinib)抑制SNU-449人肝癌细胞增殖并阻断MAPK和PDK1/AKT/mTOR信号通路

目的研究多靶点蛋白酪氨酸激酶抑制剂普纳替尼(ponatinib)对SNU-449人肝癌细胞增殖的影响及机制。方法先使用16种酪氨酸激酶抑制剂处理SNU-449肝癌细胞72 h,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,筛选出对SNU-449肝癌细胞最敏感的ponatinib并获得半数抑制浓度(IC50)值。SNU-449细胞分为对照组、(0.06、0.3、0.6)μmol/L ponatinib处理组。采用平板克隆形成实验和倒置显微镜观察ponatinib对肝癌细胞集落形成能力和细胞形态,流式细胞术检测肝癌细胞凋亡和周期,Western blot法检测Src、磷酸化的Src(p-Src)、丝裂原激活的蛋白激酶激酶(MEK)、磷酸化的MEK(p-MEK)、胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化的ERK(p-ERK)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(PDK1)、磷酸化的PDK1(p-PDK1)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的AKT(p-AKT)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和磷酸化的mTOR(p-mTOR)的表达。结果在16种酪氨酸激酶抑制剂中,ponatinib能够有效抑制SNU-449肝癌细胞增殖。Ponatinib促进SNU-449细胞凋亡,呈现浓度依赖性,同时能够将细胞周期阻滞在G1期。Ponatinib抑制SNU-449细胞中Src磷酸化,抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路和磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PDK1/AKT/mTOR)信号通路。结论Ponatinib能够抑制肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞并阻断MAPK和PDK1/AKT/mTOR信号通路,可能是一种治疗肝癌的潜在药物。

从普纳替尼撤市再上市谈欧美药品风险管理

目的以普纳替尼在美国和欧盟的风险管理评估为范例,为中国创新药物的监测与风险管理提供借鉴与参考。方法通过使用Medline和其他搜索引擎,系统介绍美国食品药品监督管理局(FDA)的风险评估与减轻策略(REMS),以及欧盟药品管理局(EMA)在普纳替尼引起的严重致死性心血管类不良事件上的风险管理和处理方式。结果普纳替尼作为一种激酶抑制剂,被批准用于阳性慢性髓细胞白血病和阳性费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病。由于普纳替尼引起的严重不良反应,2013年10月在美国撤市后,经风险评估、限制适应证、添加警示等,2013年12月在安全监控下重返美国市场。欧盟对普纳替尼的风险管理存在类似的风险管理计划。结论药品风险管理贯穿于药品生命周期的各个阶段,尤其是新药审批、临床试验、上市后再评价与安全监控、甚至是药物撤市、及重新上市等各环节。在创新药物监督管理方面可以借鉴美国食品药品监督管理局和欧盟药品管理局的风险管理计划及策略,为规范我国创新药物的安全管理,完善中国药品监管工作提供良好的借鉴与参考。

第三代BCR-ABL酪氨酸激酶抑制剂普纳替尼

普纳替尼作为新一代酪氨酸激酶抑制剂(TKIs),对BCR-ABL阳性白血病,如慢性髓细胞白血病(CML)、费城染色体阳性急性淋巴细胞性白血病(Ph+ALL)有显著的治疗效果,甚至在对当前市场上供应的第一、二代TKIs出现耐药(如T315I突变)的情况下仍有效。目前普纳替尼已获美国FDA批准用于对其他TKIs耐药的CML与Ph+ALL患者的治疗,并在尼洛替尼与达沙替尼耐药或不耐受的T315I突变患者中进行了Ⅱ期临床研究。

普纳替尼撤市原因分析及对我国新药研发的启示

普纳替尼(ponatinib)是一种多靶点的激酶抑制剂,已经被美国和欧盟批准用于治疗慢性粒细胞白血病及费城染色体阳性的急性淋巴细胞白血病。2013年10月31日,鉴于"危及生命的血栓和血管重度狭窄"风险,FDA要求生产商暂停其销售和推广,这也是首个被撤市的小分子激酶抑制剂类抗肿瘤药。因普纳替尼未来我国申请进口,其撤市不会给我国造成直接影响,但会影响到其他在我国上市或正在研发的同类品种的市场销售或上市进度。因此,建议我国药品监管部门要加强激酶类小分子抗肿瘤药的不良反应事件的监管,并及时将相关信息反馈给国内相应仿制药企业。制药企业在新药上市前要进行充分的安全性评价,尽早发现潜在的风险,以便采取有效措施避免损失。

Ponatinib抑制野生型和T315I突变型BCR-ABL1激酶的分子模拟

药物普纳替尼(Ponatinib)对野生型和T315I突变型BCR-ABL1激酶均有较强抑制作用,然而其抑制机理仍然未知。为了更好地了解Ponatinib与BCR-ABL1激酶的作用机理,本文首先运用分子动力学模拟方法研究Ponatinib对BCR-ABL1激酶构象变化的影响,然后采用MM-PBSA方法计算复合物的结合自由能。结果表明:Ponatinib诱导野生型BCR-ABL1激酶P-loop和铰链区相互靠近,导致野生型激酶结合口袋关闭,有利于激酶与药物结合;而Ponatinib诱导T315I突变型BCR-ABL1激酶P-loop和铰链区相互远离,导致T315I突变型激酶结合口袋打开,对激酶与药物结合不利;Ponatinib与野生型以及T315I突变型BCR-ABL1激酶的结合自由能分别为–58.57 kcal/mol和–43.54kcal/mol,Ponatinib对野生型BCR-ABL1激酶的抑制能力明显强于T315I突变体,与文献报道的实验抑制活性结果一致。研究结果对认识靶点蛋白和抑制剂分子机制以及设计新药有重要意义。

抗白血病新药普纳替尼的合成

目的合成抗白血病新药普纳替尼。方法首先,咪唑并[1,2-b]哒嗪与N-溴代丁二酰亚胺反应得到3-溴代咪唑并[1,2-b]哒嗪;然后,3-碘-4-甲基苯甲酸酯与三甲基乙炔反应,经脱保护得到3-乙炔基-4-甲基苯甲酸甲酯;最后,3-溴代咪唑并[1,2-b]哒嗪与3-乙炔基-4-甲基苯甲酸甲酯进行偶合得到3-(咪唑[1,2-b]哒嗪-3-乙炔基)-4-甲基苯甲酸甲酯,该甲酯再与4-((4-甲基哌嗪-1-基)亚甲基)-3-三氟甲基苯胺反应得到普纳替尼。结果与结论目标化合物普纳替尼的结构经1H-NMR谱确证,总收率为41.5%(以咪唑并[1,2-b]哒嗪计),该合成路线工艺简单、反应条件温和、操作简便,适合工业化生产。

抗白血病药普纳替尼合成路线改进

对抗白血病新药普纳替尼(1)的合成工艺进行改进。以3-溴咪唑并[1,2-b]哒嗪(3)为起始原料,采用"一锅法"经与三甲基硅基乙炔的Sonogashira偶联、脱保护基、与3-碘-4-甲基-N-[4-[(4-甲基-1-哌嗪基)甲基]-3-(三氟甲基)苯基]苯甲酰胺(9)的第二次Sonogashira偶联得终产物1。关键中间体9的合成,以3-三氟甲基-4-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]-苯胺(6)与3-碘-4-甲基苯甲酸(7)在EDCI/HOBt/Et3N催化下直接缩合,代替文献使用二氯亚砜酰化后再缩合的两步反应。改进后的路线反应条件温和,操作简便,减少了昂贵的钯催化剂的用量,反应总收率由44.5%提高至80%(以3计)。

用第二代基因测序技术揭示普纳替尼耐药突变的动态演化

靶向BCR-ABL1癌蛋白的酪氨酸激酶抑制剂(TKIs)彻底改变了携带这种融合基因的白血病的治疗。然而TKIs应用后,很快发现了BCR-ABL1突变耐药的现象,主要为激酶结构域突变。BCR-ABL1突变耐药多发生于TKIs应用治疗后,也可表现为原发耐药,可以在治疗过程(包括更换使用不同的TKIs)发生多个耐药克隆的动态演变。普纳替尼是目前唯一批准上市的对几乎所有单一BCR-ABL1激酶结构域突变都有效的第三代TKIs,包括对所有一、二代TKIs广泛耐药的T3151突变。

普纳替尼相关心血管毒性的研究进展

普纳替尼(ponatinib)是一种多靶点酪氨酸激酶抑制剂(TKI),用于慢性髓性白血病和费城染色体阳性急性淋巴细胞白血病的二线治疗。该药是针对ABL‐T315I突变的BCR‐ABL蛋白激酶抑制剂,对于接受多次治疗或对第一和第二代TKI耐药的患者,通常有效。然而普纳替尼心血管毒性常见且严重,可导致动脉闭塞事件、高血压、心肌梗死等心血管不良事件,发生机制可能与诱导血小板功能障碍、血管内皮功能障碍和心肌细胞损伤等有关。普纳替尼治疗中一旦发生心血管不良事件,临床通常采取减量或停药措施,但可能影响患者肿瘤治疗的效果。可考虑依据“ABCDE”法制定干预措施以降低普纳替尼心血管毒性的风险。