普罗托品松弛气管平滑肌的作用机制研究

目的 为评价普罗托品 (Pro)作为平喘药侯选者的可能性提供资料。方法 ①观察不同浓度Pro对组胺、乙酰胆碱收缩的豚鼠离体气管螺旋条的舒张作用及其量效反应。②放射免疫法测定Pro对家兔气管平滑肌中环腺苷酸 (cAMP)、环鸟苷酸(cGMP)水平的影响。③高效液相色谱法检测Pro对豚鼠气管平滑肌磷酸二酯酶 (PDE)活性的影响。结果 ①Pro能明显抑制组胺和乙酰胆碱引起的豚鼠离体气管条收缩 ,使其量效曲线右移 ,最大反应压低 ,pD2 ′分别为 3.11和 3.4 5。②Pro能增加家兔气管平滑肌中cAMP水平 ,而cGMP水平的变化无统计学意义。③Pro能抑制水解cAMP的PDE活性 ,但水解cGMP的PDE活性无明显降低。结论 Pro可抑制豚鼠气管平滑肌的收缩 ,其作用机制之一可能为其抑制气管平滑肌PDE活性 ,主要通过提高细胞中cAMP水平 。

普罗托品对大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞内游离钙浓度和蛋白激酶C活性的影响(英文)

本实验室先前的研究已证实,普罗托品(protopine,Pro)舒张家兔主动脉的作用,可能与其增加血管平滑肌细胞内cAMP和cGMP水平有关。为了深入探讨Pro的扩血管作用机制,实验采用等张收缩记录大鼠离体血管条张力,利用Fura-2/ AM负载的大鼠胸主动脉培养细胞直接测定细胞内游离Ca2+浓度([Ca2+]i),并应用同位素γ-32P-ATP催化活性法测定蛋白激酶C (PKC)活性等方法,分别观察了Pro的相关效应。结果表明,Pro(30和100μmol/L)明显降低去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的动脉条收缩幅度,使二者的量效曲线呈非平行右移,最大反应压低;pD21值分别为3.7±0.25和3.97±0.15;Pro(50和100 μmol/L)对静息状态下的[Ca2+]没有任何影响,但对NA和高钾引起的[Ca2+]i升高均有明显抑制作用;Pro(30和100 μmol/L);对未经NA处理血管条的胞浆和胞膜PKC活性均无明显影响:但在NA预处理的血管条,Pro使NA所升高的胞浆内PKC的活性趋于降低,而明显升高胞膜PKC的活性,对PKC的总活性无明显影响。结果提示,在有NA存在的情况下,Pro似能促使PKC从胞浆向细胞膜转移,其扩血管效应似为其降Ca2+作用、升高cAMP和cGMP的作用及其对PKC影响等几方面的综合结果。

普罗托品对大鼠血管平滑肌收缩反应及细胞内游离钙浓度的影响

目的 探讨普罗托品(protopine ,Pro)对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度的影响。方法 采用无Ca2 + 复Ca2 + 的实验法,间接观察Pro对大鼠血管平滑肌细胞内游离钙浓度([Ca2 + ] i)的可能影响,再利用钙荧光指示剂Fura 2 AM负载的培养大鼠胸主动脉平滑肌细胞,直接观察在Pro存在下,对去甲肾上腺素(NA)和高钾所致的[Ca2 + ] i 的升高的影响。结果 在无钙Krebs液中,Pro 10、3 0、10 0 μmol L对NA所致血管条的短暂收缩均有明显的浓度依赖性抑制作用,对复Ca2 + 后NA所诱发的持续收缩也呈剂量依赖性抑制作用。在Fura 2 AM负载血管平滑肌细胞的实验表明,Pro (5 0 μmol L ,10 0 μmol L)对静息时的[Ca2 + ] i 无明显影响;在有外钙存在条件下,Pro 5 0 μmol L能明显降低NA所致[Ca2 + ] i 的升高,对KCl引起的[Ca2 + ] i升高有降低趋势;当Pro的浓度增加到10 0 μmol L时,对NA和KCl引起的[Ca2 + ] i 升高均有明显的抑制作用。结论 Pro可能通过抑制Ca2 + 释放和(或)Ca2 + 内流来降低NA和高钾所致血管平滑肌[Ca2 + ] i 的升高,从而抑制血管平滑肌的收缩反应。

高效液相色谱法测定紫金龙中普罗托品和异紫堇定的含量

目的 :建立紫金龙主要有效成分普罗托品与异紫堇定的高效液相色谱分析方法。方法 :色谱柱PHE NOMENEX C18(4 .6mm× 15 0mm ,5 μm) ,流动相为甲醇 0 .2 %磷酸水溶液 (用三乙胺调pH至 7.0 ) (5 0∶5 0 ) ,检测波长 2 5 4nm ,流速 0 .8mL·min-1。结果 :普罗托品和异紫堇定的平均回收率分别为 97.9% ,98.6 % ;RSD分别为 1.3% ,1.4 %。结论 :本法精确、简便、重现性好 ;

普罗托品的研究进展

普罗托品为一种异喹啉类生物碱,药用价值大,可从多种天然植物中提取得到,具有多方面的生理活性,主要有对血小板、平滑肌的作用,抗心律失常,抗疟疾作用,镇痛作用以及对肝损伤的保护作用。近年来,普罗托品在心血管方面得到进一步应用,引起了国内外学者的广泛关注。现结合国内外相关文献,对近几年来普罗托品的主要来源及其药理作用进行概述,为更好地利用和研究普罗托品提供依据。

普罗托品对家兔血小板超微结构的影响

以ＡＤＰ，胶原，ＡＡ和ＴＭＶＡ诱导血小板聚集，利用电子显微镜观察普罗托品对兔血小板超微结构的影响。结果表明：普罗托品明显抑制ＡＤＰ，胶原，ＡＡ和ＴＭＶＡ诱导的兔血小板聚集、形态的改变和颗粒内含物的释放，说明：普罗托品对血小板结构具有保护作用。

普罗托品及右旋异紫堇丁的识别方法

目的：建立一种新的紫金龙鉴别法以及简便识别植物药中普罗托品和右旋异紫堇丁成份的方法。方法：将紫金龙生药根粉的乙醇提取液，用薄层层析法特殊试剂展开、显色。结果：分别得到重现性好的Ｒｆ值。结论：用本法可快速识别草药紫金龙及其制剂中普罗托品和右旋异紫堇丁的存在。

普罗托品衍生物的合成及其抗菌活性研究

以小果博落回中分离的普罗托品为原料,对其十元氮杂环和苯环进行结构修饰,合成了12种衍生物,采用ESI-MS、~1H NMR和^(13)C NMR谱对其结构进行表征。以醚菌酯为阳性对照,采用菌丝生长速率法筛查了目标物在50μg·mL^(-1)时对12种常见植物病原真菌的体外抑制活性,发现大多数化合物对供试菌具有不同程度的抑制活性。其中,P4和P11的抗菌活性最好,两者对玉米弯孢病原菌的抑制活性高于醚菌酯,抑制率分别为47.78%和44.86%。由此可见,当普罗托品的14-位羰基被还原为羟基后,部分化合物的抑菌活性提高;将十元环转化为两个稠和的六元环后,关环产物的抑菌活性普遍增强。

普罗托品对家兔血小板功能的影响

普罗托品(protopine,Pro)体外(1—1000μmol·L^(-1))和体内(10和20mg·kg^(-1))均抑制ADP,胶原,花生四烯酸(AA)和烙铁头蛇毒血小板聚集素(TMVA)诱导的兔血小板聚集及血小板5-HT释放。Pro不抑制AA诱导的免血小板TXA_2生成。也不升高血小板内cAMP水平,但升高cGMP水平。提示其抗血小板作用的机制与升高血小板内cGMP水平,抑制血小板释放活性物质有关。

3种罂粟属药用植物普罗托品-6-羟化酶基因多样性分析

血根碱是罂粟的主要活性成分,普罗托品-6-羟化酶(P6H)是血根碱生物合成途径上的基因之一,可把普罗托品氧化成6-羟基普罗托品。研究罂粟属药用植物P6H的基因多样性有助于获得酶活力高的P6H,提高血根碱生物合成的效率。该文利用罂粟属药用植物重测序数据,发现罂粟、鬼罂粟和虞美人P6H存在5种基因成员,并对其进行生物信息学分析;筛选伸长因子1α作为在根、茎中表达相对稳定的内参基因;通过实时荧光定量PCR检测了罂粟P6H基因在根、茎中的转录水平。从重测序结果中得到罂粟和鬼罂粟P6H各2种基因型,以及虞美人P6H的1种基因型。生物信息学分析显示3种罂粟属药用植物P6H蛋白均含P450超基因家族的保守结构域cl12078,均存在跨膜转运区,但是否存在信号肽有待验证;实时荧光定量PCR结果显示,罂粟P6H在根中的转录水平约为茎中的1.44倍,但两部位的P6H转录水平之间并无显著性差异。上述结果显示3种罂粟属药用植物普罗托品-6-羟化酶基因具有一定多样性,为罂粟中血根碱生物合成途径和机制研究提供依据。

普罗托品类生物碱的合成及其杀虫活性

[目的]对小果博落回中分离的普罗托品、隐品碱和别隐品碱中的十元氮杂环和苯环进行结构修饰,合成了17种普罗托品类生物碱,在确认其结构的基础上考查其体外杀虫活性。[方法]首先,采用ESI-MS、1H NMR和13C NMR等波谱技术对目标化合物的结构进行表征;接着,以伊维菌素为阳性对照,采用浸虫法分别测定了目标化合物在0.5、1 g/L时对兔痒螨和小麦红蜘蛛的体外杀灭活性。[结果]大多数化合物对兔痒螨和小麦红蜘蛛均显示了一定程度的杀灭活性。其中,待测物1的活性最佳,其对兔痒螨的致死率达71.7%;对小麦红蜘蛛的致死率为60.0%,校正致死率达57.1%。[结论]对目标化合物的结构及其杀虫活性进行分析,发现向十元氮杂环引入C=C键可显著提高该类化合物的杀螨活性;向13位引入羰基可提高它们杀灭小麦红蜘蛛的活性。为普罗托品类杀虫剂的研发提供了一定的理论依据。

白族草药紫金龙成分的研究

从白族草药紫金龙根中分离得到 3种生物碱 ,通过 UV,IR,MS等方法解析 ,鉴定其结构 ,确定为普罗托品、右旋异紫堇丁和右旋紫堇丁 ,其中普罗托品盐酸盐为生药的 1 .1 %。

RP-HPLC法同时测定紫金龙中2种生物碱的含量

目的：建立同时测定紫金龙中异可利定和普罗托品的含量测定方法。方法：采用LunaC18 100A色谱柱，流动相以三乙胺-0．2％磷酸（0．1：35）为（A），甲醇-乙腈（14：1）为（B）梯度洗脱，流速为1．0mL·min^-1，检测波长为285nm，进样量20μL，柱温为25℃。结果：异可利定在0．065mg·mL^-1～0．195mg·mL^-1范围内线性良好，回归方程为Y=19974X＋2．3524（r=0．9999），平均回收率为97．0％，RSD为1．6％；普罗托品在0．025mg·mL^-1 - 0．075mg·mL^-1范嗣内线性良好，回归方程为Y=20923X-4．3441（r=0．9998），平均回收率为98．9％，RSD为1．8％．结论：该方法简便、准确重现性好，适用于紫金龙中异可利定和普罗托品的定量分析。

Protopine对肠鼠心乳头肌动作电位和收缩力的影响

采用常规微电极技术,用离体肠鼠心乳头肌观察了Protopine对正常心肌细胞动作电位和收缩力的影响。结果表明:Protopine产生浓度依赖性负性肌力作用。Vmax也呈现浓度依赖性降低,APD20、APD50、APD90不呈现浓度依赖性变化,但ERP随Protopine的浓度增加不断延长。提示Protopine的抗心律失常作用可能与ERP的延长有关。

烙铁头蛇毒血小板聚集素作为筛选抗血小板药物的模式初探

本文利用烙铁头蛇毒血小板聚集素(TMVA)作为筛选抗血小板药的工具,对三种中草药有效成分普罗托品,三七叶总皂甙和珠子参总皂甙进行了筛选,并与ADP模式相比较。结果发现普罗托品及珠子参总皂甙对ADP及TMVA诱导的家兔血小板聚集均有抑制作用;而三七叶总皂甙则只能抑制ADP诱导的家兔血小板聚集,不能抑制TMVA诱导的家兔血小板聚集。普罗托品抑制ADP及TMVA诱导家兔血小板聚集的IC;分别为26.85±10.07μM和38.04±12.11μM。珠子参总皂甙(2mg/ml)抑制ADP及TMVA诱导的家兔血小板聚集的最大抑制率分别为51.7±4.7和50.3±4.7%。三七叶总皂甙(3mg/ml)抑制ADP诱导家兔血小板聚集的最大抑制率为44.8±4.7%。

紫金龙的生物碱成分

紫金龙(Dactylicapnos scandens Hutch.)是中草药群众运动中发掘出来的一种草药,广用于镇痛,又是'云南蛇药'的主要组分之一。作者对紫金龙的生物碱成分作了初步的分离鉴定、得到普罗托品(protopine)(Ⅰ)和右旋异紫堇丁[(+)Isocorydine](Ⅱ)。此外还得到一个生物碱,量较少,正在鉴定中。普罗托品的盐酸盐得率占生药的1.4%,右旋紫堇丁的盐酸盐得率占生药的5.2%,生物碱在植物中含量这样高是少见的。以上生物碱的镇痛等药理实验在进行中。