甲型肝炎灭活疫苗接种普通狨猴的安全性和免疫原性

目的观察本实验室研制的甲型肝炎灭活疫苗的安全性和免疫原性。方法甲型肝炎病毒吕－８ 株在人胚肺二倍体细胞（ＫＭＢ１７）中增殖，收获的病毒液用福尔马林灭活制成实验性疫苗，接种普通狨猴。结果有 特异性抗ＨＡＶ产生，无血清酶活性升高和肝组织病理学改变。接种疫苗的狨猴均能抵抗甲肝病毒强毒株的攻击， 而对照组均出现酶活性升高和肝组织病理学改变。结论该疫苗具有良好的免疫原性和可靠的安全性。

以普通狨猴作为人类甲型肝炎动物模型的初步研究

本文报道以不同剂量的不同 HAV 毒株经静脉和胃肠道分别接种普通狨(Callthrix jacchus)和白须狨(Saguinus mystax)后,其血清 ALT、AST 和 LDH 活性均升高。对酶活性比接种前增加 X+3 SD 值的6只狨猴作肝活组织检查,见有与急性病毒肝炎相一致的组织病理变化。用免疫电镜法检出狨猴粪便中 HAV 粒子,狨猴接种 HAV 后36天,血清 IgM 类和总抗 HAV 抗体均阳转。上述结果提示,普通狨猴有可能作为研究甲型肝炎的理想动激模型。

普通狨猴部分传染性疾病检疫指标的探讨

目的 对从南非引进普通狨猴和实验室人工繁殖饲养的狨猴进行传染病的检验,通过比较分析,以获得普通狨猴的传染性疾病的检疫指标.方法 对动物分别进行了血浆甲型肝炎病毒检测、肝脏B超检测、结核杆菌皮肤检测、肠道寄生虫检查、粪常规及肠道致病菌检查、皮肤及口腔疱疹病毒检测等.结果 所有待检狨猴均未出现甲肝、结核杆菌、肠道寄生虫致病菌、疱疹病毒的阳性感染.结论 经该传染病检验方法的检测,所有动物均未感染传染性疾病,且方法安全有效,适合作为普通狨猴的传染病初筛方法.

普通狨猴牙齿生长与年龄的关系

对９只普通狨猴（Ｃａｎｉｔｈｒｉｘｊａｃｃｈｕｓ），从出生开始观察牙齿生长与体重、体尺增长情况，并据以提出：普通狨猴牙齿生长与脱落的关系，可作为年龄判定的参考指标。

普通狨首次产仔存活

普通狨(Callithrix jacchus jacchus)亦称棉耳狨,属狨猴科,狨猴属。原产中、南美洲,有着体型小。性情温顺、实验用途广等特点。上海实验动物研究中心于1988年9月初由西德赠送引进2对种猴,经过近一年的精心管理和饲育,目前都已适应了这里的环境和饲料,2只母猴分别于1989年2月22日和4月23日先后产下2胎,成活4只仔猴。(图) 普通狨孕期为144±2天,多胎发生率较高。这批母猴先后产下的2胎都是1胎3仔,但其中各1只最瘦弱的均被自然淘汰。据观察,这批普通狨的仔猴通常由母猴带领,似与棉顶狨等(犭胥)属狨猴不同。仔猴20天后就能从母猴手中舔咬软食。30天后能从母猴身上爬下来活动,4个月时已基本独立生活,并能摄取本中心自制的颗粒饲料,营养状况良好。目前,4只仔猴都很健康,活泼可爱,性别是3雄1雌。

棉顶狨猴、鞍背狨猴和普通狨猴的繁殖及婴猴哺育的比较研究

结果表明：棉绒的妊娠期平均为１６６ｄ，两胎间隔期为１０～１２个月，婴猴存活率为３３％；鞍背绒和普绒的妊娠期平均为１５０ｄ和１４３ｄ，两胎间隔期分别为９～１２个月和９～１１个月，婴猴存活率分别为４０％和６７％，这三种绒猴主要以双胞胎形式进行繁殖，且仔猴中雄性比例占８０％以上，棉绒和鞍背绒主要依靠双亲哺育婴猴，婴猴的死亡率较高分别为６７％和６０％，而由双亲哺育的普绒婴猴的死亡率最低（３３％），若采用人工喂养婴猴，其成活率可达１００％。我们得到的经验是：棉绒和鞍背绒的繁殖有季节性，棉绒春季产仔，鞍背绒夏季产仔，而普绒的繁殖则无季节性。三种绒猴中以普通绒猴最易饲养和繁殖，并且婴猴的成活率高，十分利于建立实验室繁殖群体。

纯化甲型肝炎灭活疫苗接种普通狨猴的安全性及免疫原性

目的观察纯化甲型肝炎灭活疫苗(Vero细胞)接种普通狨猴的安全性和免疫原性。方法将800EU/0.5ml和1600EU/ml两个剂量的纯化甲肝灭活疫苗(JS-4株)与进口疫苗(50U/ml)分别接种普通狨猴各2只,进行安全性和免疫原性检测,并进行强毒(JS-12株)攻击保护试验及毒力试验。结果接种疫苗后72h,各组狨猴均未发生局部及全身反应;有特异性抗-HAV产生;肝脏血清酶活性均有一过性升高,未见肝脏病理改变;并均能抵抗甲肝病毒强毒株(JS-12)的攻击;JS-4毒株采用106.67CCID50/ml剂量接种狨猴后未见毒力反应,但产生了73000mIU/ml的高水平抗体;而JS-12毒株接种狨猴后,狨猴出现肝脏血清酶活性升高和肝组织病理学改变。结论纯化甲型肝炎灭活疫苗具有良好的安全性和免疫原性。

普通棉耳狨猴MHC Ⅰ类基因A和B基因座多态性分析

目的主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(major histocompatibility complex class I molecule,MHCⅠ)与细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)作用相关,它的复杂性和多态性使得个体间的免疫应答有所不同。普通棉耳狨猴(common marmosets)是1种小型非人灵长类动物,曾用于甲肝病毒及疫苗等研究。目前,科学家正试图将狨猴用于丙型肝炎病毒感染模型。然而,狨猴MHCⅠ的多态性,及其与特异性细胞免疫反应的相关性仍不清楚,限制了对保护性免疫反应机制的认识。本研究通过对狨猴MHCⅠ类基因A和B基因座序列多态性及特征进行分析,为HCV狨猴感染动物模型提供遗传背景资料。

普通棉耳狨生物学特性研究

本文对在我国实验室条件下饲育成功的２０只（雌雄各半）１．５～２岁的普通棉耳狨进行了外周血缘（红细胞、白细胞及血小板计数，血红蛋白，白细胞分类、网织红细胞）及部分血液生化学（血糖、尿酸，尿素氮、肌酐、总胆红素，总蛋白、白蛋白、球蛋白、ＡＬＰ、ＧＯＴ、ＧＰＴ、ＬＤＨ、ｒ－ＧＴ、ＣｈＥ、Ｃａ、Ｐ、Ｎａ、Ｋ、Ｃｌ）检测，并将其结果与国内外报道对照分析，证实其大多数结果与文献报道相一致，具有参考价值。

普通棉耳狨猴副粘病毒自然感染的研究

对一个狨猴实验室中暴发急性呼吸道疾病进行了病因调查。通过动物剖检、病毒分离、电子显微镜检查和血凝及血凝抑制试验和动物感染实验 ,确定其病原是副流感病毒 型(仙台病毒 )。从而确定动物死亡原因是病毒引起肺炎感染造成。

普通棉耳狨猴腹泻、消瘦的病例分析及处理

目的 分析引起此次普通棉耳狨猴腹泻、消瘦的原因,制定切实可行的预防控制措施,为规模化狨猴养殖提供值得借鉴的经验.方法 对腹泻、消瘦的狨猴进行病因分析,包括病症、饮食状况、饲喂状况、病理剖检、组织切片、肛门拭子采集检测等.结果 通过实验室诊断、饲养管理改善等进行病因分析,确定了引起狨猴腹泻、消瘦并最终导致2例死亡的原因,是由于饲养环境内部分应激因素（如温度）改变、饲养动物处于空调送风口位置、人员进出频繁等,导致机体内条件致病菌（肺炎克雷伯氏菌）引起动物发病.采取改变饲养管理方式、调整饮食等措施后,逐步控制了病情.结论 科学的饲养管理方式以及良好的兽医护理对防止普通棉耳狨猴腹泻、消瘦疾病的发生具有重要作用.

生物遥测技术监测清醒状态下普通棉耳狨猴的心电生理特性

目的采用生物遥测法监测清醒状态下狨猴心率、体温、血压及心电图各项指标。方法在普通棉耳狨猴体内埋置生物传感器，恢复两周后，采用DataquestA．R．T．4．3系统连续监测24h的心率、体温、血压和心电图指标，并于第二周、第三周各重复一次。结果在整个实验过程中，该方法所监测指标基本维持正常水平，心率为（148．12±15．94）～（256．85±25．67）次／min，体温为（35．60±0．23）～（38．67±0．75）℃，平均动脉压为（67．45±8．96）～（94．95±11．62）mmHg，白天的各项心电指标高于夜间，且三次实验及平均值间比较无显著差异（P〉0．05）。结论成功建立了生物遥测方法，可以准确监测清醒状态下普通棉耳狨猴的心电生理指标。

基于高通量测序技术测定普通棉耳狨猴粪便微生物多样性

目的应用高通量测序技术分析普通棉耳狨猴粪便菌群的结构与组成,为进一步开发利用新型实验动物奠定基础。方法采集4只成年雄性普通棉耳狨猴粪便,用细菌16SrRNA通用引物扩增V3~V4区,采用IlluminaMiSeq测序平台对普通棉耳狨猴粪便微生物进行研究。结果共测序获得315511条有效序列与596个OTU。普通棉耳狨猴粪便中的细菌共鉴定出9个门、14个纲、26个目、50个科、82个属和64个种和226个OTU。其中,1)优势门是拟杆菌门(Bacteroidetes)和厚壁菌门(Firmicutes),平均含量分别为54.52%和25.39%2)丰度最高的纲为拟杆菌纲(Bacteroidia)和厌氧菌纲(Negativicutes),平均含量为54.5%和17%。3)乳杆菌目(Lactobacillales)和拟杆菌目(Bacteroidales)的丰度最高,为50.01%和20.52%。4)普雷沃菌科(Prevotellaceae)和双歧杆菌科(Bifidobacteriaceae)所占丰度最高,平均含量分别为43.14%和11.33%。5)双歧杆菌属(Bifidobacterium)和拟杆菌属(Bacteroides)的丰度较高,平均含量分别为11.33%11.12%。6)有益菌群双歧杆菌属丰度较高,但在所检测样本中都含有。7)丰度最高的前10个种,归类为7个科、5个纲。这10个种占到33.16%,其他53种总和仅占到0.74%,其他未鉴定出菌种,且相对丰度还较高,需要进一步研究。8)PICRUSt功能预测分析:氨基酸转运等代谢功能和蛋白质翻译、折叠遗传信息处理功能丰度较高。结论应用高通量测序技术,较全面的检测了普通棉耳狨猴粪便菌群,普通棉耳狨猴粪便细菌组成具有丰富的多样性,其中还有许多未被分类鉴定且相对丰度较高的细菌,需要进一步研究。

30只普通绵耳狨猴血液学和血清生化指标的测定及分析

目的检测30只普通绵耳狨猴的血液学、血清生化指标,对雌雄性别组间进行检验,与狨猴和猕猴测定值比对。方法保持动物清醒状态,后肢静脉采血,应用全自动血细胞分析仪及血液生化分析仪分别测定血液学及血清生化指标,测定结果与狨猴和猕猴相关数据进行比较。结果血液学指标中,雌雄组间各指标差异无显著性。血清生化检测中雌猴组与雄猴组差异有显著性的指标有高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)(P<0.05),其他指标差异无显著性,对比国外狨猴群体,本单位饲养的狨猴群体的血红蛋白(HGB)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、中性粒细胞(NEUT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、球蛋白(GLOB)指标数据明显升高,但与猕猴数据测定值范围相符。结论对本单位饲养的普通绵耳狨猴的血液学和血清生化指标进行测定,并与狨猴和猕猴相关数据进行比较,为药理、毒理研究以及狨猴疾病诊疗提供基础数据。

普通棉耳狨猴饲养管理与繁育技术

介绍了普通棉耳狨猴饲养管理和繁育技术,具体包括笼舍的环境设施建设、日粮结构与饲喂方法、繁育管理、疾病防治和标准化管理等方面内容,以期为普通棉耳狨猴的饲养和繁育提供科学参考。

诱导型狨猴肝纤维化模型的建立

目的:建立诱导型狨猴肝纤维化模型。方法:手术切除普通狨猴部分肝脏,通过腹腔注射二乙基亚硝胺(DENA-2.5 mg/kg),并利用体质量和肝功能检测、病理分析、免疫组化,胶原染色和B超小动物活体成像等手段进行监测。结果:手术切除肝脏促使狨猴肝脏再生,并伴随肥大和炎症反应;DENA药物诱导会引发与人类类似的肝脏炎症,肝脏胶原聚集和血管增生,最终导致狨猴肝脏纤维化。结论:手术切肝联合DENA化学诱导可以成功获得狨猴肝纤维化模型。

狨猴笼养情况的初步观察

狨猴是一种珍贵实验动物,具有体型小、性情温顺、实验用途广等特点,特别是在甲型肝炎的研究中作为敏感的动物模型,得到了国际承认。我国已开始引进和应用。我们对本单位陆引进的4种狨猴:髭狨(Saguinusmystax mystax)、粗足狨(Saguinus oedipus oedipus)、普通狨(Callithrix jacchus jacchus)和棕肩狨(Saguinusfuscicollis illigeri)进行了初步观察与记录。一、环境狨猴属于新大陆猴类,栖息于南美热带雨林。进入实验室后,其对温、湿度的要求仍无明显改变。我们力求模拟自然环境,将温度控制在22～28℃,相对湿度为40～70％,室内用改良型日光谱灯补充自然光照。笼具的设置则根据引进前狨猴的生活习惯。

狨猴血清中重组人5型腺病毒中和抗体滴度的测定

目的构建表达荧光素酶与绿色荧光蛋白报告基因的重组人5型腺病毒r Ad5/Luc/GFP,检测血清中和抗体最佳实验方法,分析小型灵长类动物普通棉耳狨猴体内腺病毒5型中和抗体水平,为评价腺病毒载体疫苗提供实验动物基础数据。方法利用ADMax包装系统,首先构建穿梭质粒p DC315-Luc-GFP,将所得的穿梭质粒和骨架质粒p BHGloxΔE1,3Cre共转染293A细胞,进行重组人5型腺病毒(r Ad5/Luc/GFP)的包装。通过3次空斑形成实验筛选出单克隆重组腺病毒,并在大量扩增单克隆腺病毒后用Cs Cl密度梯度离心法进行浓缩纯化。采用TCID50法测定纯化后病毒滴度,并挑选进行中和实验的最优病毒滴度。将合适病毒滴度的r Ad5/Luc/GFP与狨猴血清混合预孵育后感染293A细胞,分别采用化学发光法及流式细胞术,对14只普通棉耳狨猴血清中腺病毒5型中和抗体进行检测。结果 PCR、酶切和测序结果均表明穿梭质粒p DC315-Luc-GFP构建成功;GFP检测结果证明重组人5型腺病毒r Ad5/Luc/GFP包装扩增成功,病毒滴度可达6.9×1011.5PFU/m L。两种不同方法检测检测14只狨猴的中和抗体结果一致性较好(P<0.05,Kappa=0.811),化学发光法或流式细胞术检测阳性狨猴比率分别为28.6%(4/14)或21.4%(3/14),化学发光法检测得其中2只狨猴中和抗体滴度为1/16,另2只为1/32,而流式细胞术检测得滴度均为1/16。结论化学发光法是一种快速,准确,适用于多物种的方法,其灵敏度略高于以GFP为报告基因的流式细胞术(7.2%)。普通棉耳狨猴体内Ad5血清阳性率较低,有望应用基于此型或其他型别腺病毒作为载体进行基因治疗和基因疫苗研究。

甲型肝炎灭活疫苗免疫原性的猴体实验

甲型肝炎病毒TZ84毒株经 2BS二倍体细胞培养制备成甲型肝炎灭活疫苗。采用普通狨猴和恒河猴进行疫苗的保护性研究。结果均有较好的抗体反应 ,而且对甲型肝炎病毒鲁兴株 (强毒株 )的攻击亦均有保护作用。表明该疫苗有较好的免疫效果。