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麦芽四糖淀粉酶的晶体培养及初步衍射研究 被引量:2
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作者 马建华 王耀萍 +3 位作者 韩毅 毕汝昌 朱静 严自正 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期359-361,共3页
麦芽四糖淀粉酶是水解方式独特、其产物又具有较广泛应用价值的一种淀粉酶。应用悬滴汽相扩散法,用从产碱菌发酵培养液分离纯化得到的麦芽四糖淀粉酶成功地培养出了质量较好的单晶体。测得该种晶体属正交晶系,空间群为P212121... 麦芽四糖淀粉酶是水解方式独特、其产物又具有较广泛应用价值的一种淀粉酶。应用悬滴汽相扩散法,用从产碱菌发酵培养液分离纯化得到的麦芽四糖淀粉酶成功地培养出了质量较好的单晶体。测得该种晶体属正交晶系,空间群为P212121,晶胞参数a=46.6A。,b=65.8A。,c=170.9A。,一个不对称单位含一个麦芽四糖淀粉酶分子。用MarResearchIP面探测器收集了一套分辨率高于2.7A。的衍射强度数据。 展开更多
关键词 淀粉酶 麦芽四糖淀粉酶 生物物理 晶体培养 衍射
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重组肺炎链球菌甘油脱氢酶活性及晶体培养的初步分析
2
作者 赵沙沙 牛司强 +2 位作者 金丽 杨伟 汪德强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期952-957,共6页
甘油脱氢酶能够氧化胞内甘油为代谢活动提供能量,并参与调控宿主粘附相关细菌蛋白质的表达,是潜在的抗菌药物靶点.本文利用大肠杆菌BL21原核表达肺炎链球菌甘油脱氢酶,获得大量上清表达的目的蛋白.再用Ni-NAT-Sepharose Fast Flow亲和... 甘油脱氢酶能够氧化胞内甘油为代谢活动提供能量,并参与调控宿主粘附相关细菌蛋白质的表达,是潜在的抗菌药物靶点.本文利用大肠杆菌BL21原核表达肺炎链球菌甘油脱氢酶,获得大量上清表达的目的蛋白.再用Ni-NAT-Sepharose Fast Flow亲和层析、DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析以及Superdex 200分子筛进行纯化.经数据拟合,证实该酶在溶液中以同源二聚体形式存在.光谱实验证实,该重组表达甘油脱氢酶仍具有氧化甘油生成1,3-二羟基丙酮的活性.用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体,在0.1 mol/L Bicine pH 9.6,13%PEG MME 5000,0.2 mol/L KSCN,4%Dioxone条件下,得到了晶型好且有一定衍射能力的单晶,为解析肺炎链球菌甘油脱氢酶的三维结构及研究结构与酶活之间的关系奠定了基础. 展开更多
关键词 肺炎链球菌 甘油脱氢酶 蛋白表达纯化 酶活性鉴定 蛋白质晶体培养
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兔肝金属硫蛋白-Ⅱ的晶体培养及初步衍射研究
3
作者 安钰 李根培 茹炳根 《北京大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期268-270,共3页
Metallothionein\|Ⅱ,6 8kDa,purified from the liver of rabbit induced by cadmium,has been crystallized in the space group P6 322 using hanging drop vapor diffusion method,with unit cell parameters a=b=113 4 ?, c =146 6... Metallothionein\|Ⅱ,6 8kDa,purified from the liver of rabbit induced by cadmium,has been crystallized in the space group P6 322 using hanging drop vapor diffusion method,with unit cell parameters a=b=113 4 ?, c =146 6?.There are 8 molecules per asymmetric unit and a solvent content of 58%. 展开更多
关键词 金属硫蛋白 X射线衍射 晶体结构 晶体培养
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六次甲基四胺和对苯二甲酸与Co(Ⅱ)(im)_4(NO_3)_2配合物的合成及晶体培养 被引量:3
4
作者 李伟 黄新慰 《广东化工》 CAS 2004年第8期21-22,共2页
钴是人体内一种必需的微量元素,在生物体内均以配合物的形式存在。本文报道一种文献未见报道的含咪唑 (Hlm)、六次甲基四胺(hmt)和对苯二甲酸(TA)与钴(Ⅱ)的混配配合物的合成,及单晶培养。
关键词 六次甲基四胺 咪唑 对苯二甲酸 晶体培养
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水晶项链——明矾晶体培养
5
作者 王新芳 《教学仪器与实验》 2010年第5期18-19,共2页
山东省实施素质教育,要求高中开设选修二校本课程,并开展社团活动。我们利用实验室资源,组织学生进行了明矾晶体的培养活动。通过此次活动了解晶体的形成原理,培养过程;观察明矾晶体,发现自然之美;
关键词 晶体培养 明矾 水晶项链 实验室资源 素质教育 校本课程 形成原理 培养过程
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鼠伤寒沙门菌转录调控因子HilD的蛋白纯化及与hilA启动子DNA复合物晶体培养
6
作者 刘晴 谢荣现 +2 位作者 范丙乾 李冰清 贾海红 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第3期270-274,共5页
目的本研究将获取鼠伤寒沙门菌毒力转录调控因子HilD的蛋白,培养HilD蛋白晶体,为进一步分析HilD功能机制和靶向胞内沙门菌药物研发奠定基础。方法以鼠伤寒沙门菌转录调控因子HilD生物信息学分析为基础,使用鼠伤寒沙门菌14028S菌株作为... 目的本研究将获取鼠伤寒沙门菌毒力转录调控因子HilD的蛋白,培养HilD蛋白晶体,为进一步分析HilD功能机制和靶向胞内沙门菌药物研发奠定基础。方法以鼠伤寒沙门菌转录调控因子HilD生物信息学分析为基础,使用鼠伤寒沙门菌14028S菌株作为模板进行分子克隆,构建hilD-pGl01重组质粒,使用原核体系表达HilD,通过镍柱亲和层析柱和透析获取纯化蛋白。EMSA实验验证HilD活性。使用晶体培养试剂盒进行晶体培养。结果成功构建了HilD原核表达系统,HilD是一种碱性蛋白,在蛋白提取过程中需要将缓冲液的pH值维持在7.0左右以维持HilD蛋白的稳定性,还需添加2%甘油和2%蔗糖进行保护。hilA能够稳定HilD蛋白,有利于晶体的生长。结论成功获取HilD纯化蛋白,实验证明具有生物活性,培养出HilD与hilA启动子DNA的复合物晶体,复合物的培养为HilD结构解析奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 HilD 原核表达 晶体培养
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鼠伤寒沙门菌效应因子SteA蛋白的表达纯化与晶体培养
7
作者 范丙乾 刘晴 +2 位作者 刘瑞瑞 王玉珍 李冰清 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第4期424-429,435,共7页
目的对鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteA进行原核表达与纯化,以期获得高质量蛋白和晶体,为SteA的活性检测及结构解析奠定基础。方法利用生物信息学分析方法,对SteA的氨基酸及核苷酸序列进行分析,了解蛋白性状与序列保守性;使用基因工程方法,将s... 目的对鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteA进行原核表达与纯化,以期获得高质量蛋白和晶体,为SteA的活性检测及结构解析奠定基础。方法利用生物信息学分析方法,对SteA的氨基酸及核苷酸序列进行分析,了解蛋白性状与序列保守性;使用基因工程方法,将steA基因克隆到原核表达载体pGLO1上;使用大肠埃希菌BL21(DE3)进行SteA蛋白的外源表达;使用镍离子亲和层析,离子交换层析,凝胶过滤层析的方法对SteA蛋白进行体外纯化;使用蛋白结晶试剂盒对提纯的SteA蛋白进行晶体普筛,摸索适合的晶体生长条件并进行优化,培养高质量单晶用于结构解析。结果克隆出SteA全长及SteA 35-173 aa片段基因,并构建了SteA35-173 aa C58S突变体。SteA全长和SteA 35-173 aa C58S蛋白在大肠埃希菌感受态细胞BL21中成功表达,获得了无聚集的SteA蛋白,浓度为7.6 mg/mL。发现在1.2 mol/L Sodium phosphate monobasic/0.8 mol/L Potassium phosphate dibasic;0.1 mol/L CAPS/Sodium hydroxide pH 10.5;0.2 mol/L Lithium sulfate条件下能够获得晶体,条件优化获得可用于数据收集的高质量单晶。结论鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteA可在原核表达系统中稳定表达,且可溶性良好,Cys58对SteA二聚体的形成起到重要作用。SteA 35-173 C58S蛋白在磷酸盐和硫酸盐环境中易结晶。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 SteA 蛋白纯化 晶体培养
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鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteC的原核表达、纯化与晶体培养
8
作者 张敏 戴元吉 +6 位作者 王方程 王玮玮 贾海红 宋楠楠 李翠玲 李冰清 岳盈盈 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第3期276-281,286,共7页
目的鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteC是沙门菌Ⅲ型分泌系统中唯一的一种激酶,然而其与以往发现的激酶同源性均较低,其发挥激酶功能的机制尚不清楚。本研究通过基因克隆、原核表达截短鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteC-C端催化结构域,获得纯化蛋白并... 目的鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteC是沙门菌Ⅲ型分泌系统中唯一的一种激酶,然而其与以往发现的激酶同源性均较低,其发挥激酶功能的机制尚不清楚。本研究通过基因克隆、原核表达截短鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteC-C端催化结构域,获得纯化蛋白并进行晶体培养,为揭示SteC作为激酶催化磷酸化的机制奠定基础。方法以鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteC生物信息学分析为基础,在SteC-C端催化结构域进行片段截取,并将此结构域中仅有的第276位半胱氨酸突变为丝氨酸,利用基因克隆技术分别构建SteC C1-pGl01和SteC C1_(C276S)-pGl01两种重组质粒,在大肠埃希菌原核体系中进行表达。依次使用镍离子亲和层析柱、凝胶层析柱进行蛋白纯化。使用12种晶体试剂盒筛选适合SteC活性(Holo)与非活性(Apo)状态晶体生长的条件,从而获得SteC不同类型的蛋白质晶体,并使用additive试剂盒寻找更利于蛋白晶体生长的条件,从而获得单晶性良好的晶体。结果鼠伤寒沙门菌效应蛋白SteC C1催化结构域相对分子质量大小为19.7×10^(3),在原核表达体系中蛋白可溶性好、浓度高,但是蛋白性质不稳定存在二聚化现象,其突变体证明SteC Cys-276是SteC C1导致二聚化的原因。两种蛋白均在2.0 mol/LAmmonium sulfate,0.01 mol/L Magnesium sulfate heptahydrate,0.05 mol/LSodium cacodylate trihydrate(pH 6.5)条件结晶,且SteC C1_(C276S)晶体结晶时间更快,添加0.1mol/L碘化钠试剂后更有助于蛋白晶体的生长。结论成功构建SteC C1及SteC C1_(C276S)原核表达系统并获得蛋白进行结晶培养。硫酸铵盐有助于SteC C1结构域及其突变体晶体的形成且突变体更容易结晶。SteC C1结构域蛋白晶体的培养为SteC蛋白质空间结构的解析及进一步揭示其催化磷酸化的分子机制奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 效应蛋白 晶体培养 蛋白激酶 STEC
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水痘-带状疱疹病毒糖蛋白gE在昆虫细胞中的表达鉴定及其晶体培养 被引量:3
9
作者 姚巧缤 李婷婷 +9 位作者 荣芮 张玉云 李泽凯 薛文辉 李瑾瑾 朱瑞 程通 顾颖 夏宁邵 李少伟 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第5期505-510,共6页
目的利用杆状病毒-昆虫表达系统建立纯化水痘带状疱疹病毒(VZV)包膜糖蛋白gE的方法,筛选gE蛋白的晶体培养条件,以期用于结构解析。方法将VZV糖蛋白gE基因序列克隆至杆状表达载体pAcgp67B载体中,利用High FiveTM昆虫细胞表达gE蛋白并进行... 目的利用杆状病毒-昆虫表达系统建立纯化水痘带状疱疹病毒(VZV)包膜糖蛋白gE的方法,筛选gE蛋白的晶体培养条件,以期用于结构解析。方法将VZV糖蛋白gE基因序列克隆至杆状表达载体pAcgp67B载体中,利用High FiveTM昆虫细胞表达gE蛋白并进行TALON亲和层析纯化;利用WAVE生物波浪反应器建立含硒代甲硫氨酸的gE蛋白方法,以便在晶体结构解析中利用单波长或多波长异常散射进行相位解析;通过分子排阻色谱、分析超离,差示扫描量热法和酶联免疫吸附试验等分析gE蛋白的理化性质;利用结晶试剂盒对gE498和gE354蛋白的结晶条件进行初筛。结果获得的gE498和gE354蛋白纯度约为90%、产量为8~10 mg/L。理化分析显示两种gE蛋白在溶液中主要以均一稳定的单体形式存在,并呈现出良好的反应原性。在gE354晶体初筛中获得3个结晶条件:CrystalH3、PEGH12和IndexB10。结论建立了VZV糖蛋白gE表达和纯化方法,制备的蛋白纯度高,且具有反应原性,并筛选出CrystalH3、PEGH12和IndexB10这3个结晶条件,为gE糖蛋白的结构与功能研究及新型疫苗开发奠定了基础。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 糖蛋白gE 杆状病毒-昆虫表达系统 晶体培养 硒代甲硫氨酸
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鼠伤寒沙门菌修饰酶YdiU的表达、纯化及晶体培养 被引量:2
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作者 马玥 杨银龙 +5 位作者 岳盈盈 宋楠楠 王玮玮 贾海红 李翠玲 李冰清 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2019年第11期1241-1244,1249,共5页
目的采用大肠埃希菌原核表达体系表达并纯化YdiU蛋白,筛选蛋白质晶体,为其结构和酶活测定等研究奠定基础。方法以生物信息学预测为基础,使用PCR方法从沙门菌基因组中调取ydiU基因,构建ydiU-pGl01重组质粒,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,... 目的采用大肠埃希菌原核表达体系表达并纯化YdiU蛋白,筛选蛋白质晶体,为其结构和酶活测定等研究奠定基础。方法以生物信息学预测为基础,使用PCR方法从沙门菌基因组中调取ydiU基因,构建ydiU-pGl01重组质粒,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)中,诱导蛋白表达。并使用镍离子亲和层析柱和阴离子交换柱对YdiU蛋白进行纯化。纯化后YdiU蛋白利用16种晶体筛选试剂盒在悬滴条件下进行晶体培养。结果成功构建重组表达质粒ydiU-pGl01。IPTG诱导后,YdiU蛋白在大肠埃希菌BL21(DE3)菌株中大量表达,并多以可溶形式存在。经镍离子亲和层析和阴离子交换法纯化后得到纯度较高的蛋白溶液,浓度为3.6 mg/ml,相对分子质量约51×10^3。纯化的YdiU蛋白在0.5 mol/L Potassium thiocyanate条件下长出蛋白晶体。结论采用大肠埃希菌表达系统可表达可溶性YdiU蛋白,YdiU蛋白在阴离子交换柱上表现为峰型对称的单峰,纯度较高,可用于蛋白质晶体的筛选,为进一步解析YdiU的结构和功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 YdiU蛋白 AMPylation修饰 表达纯化 晶体培养
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鼠伤寒沙门菌未知功能蛋白STM14-0100晶体培养与酶活测定
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作者 李慧 李冰清 宋楠楠 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2022年第4期400-405,共6页
目的 克隆表达STM14-0100蛋白,纯化后培养蛋白晶体并测试蛋白酶活,为STM14-0100蛋白的结构与功能研究提供基础。方法 采用生物信息学方法预测STM14-0100蛋白基本性质。构建STM14-0100-pGlO1重组质粒并诱导蛋白表达,层析纯化得到目的蛋... 目的 克隆表达STM14-0100蛋白,纯化后培养蛋白晶体并测试蛋白酶活,为STM14-0100蛋白的结构与功能研究提供基础。方法 采用生物信息学方法预测STM14-0100蛋白基本性质。构建STM14-0100-pGlO1重组质粒并诱导蛋白表达,层析纯化得到目的蛋白。通过晶体普筛找到适合蛋白晶体生长的条件并进行优化。收集单晶性良好的晶体进行X-射线衍射,数据采集用HKL2000软件处理。分别检测STM14-0100与突变体蛋白的酶活,然后加入梯度浓度的DTT和H_(2)O_(2)以观察氧化还原状态对蛋白酶活性的影响。结果 预测STM14-0100蛋白第109和第165位氨基酸可能为活性中心内的关键位点。将重组表达质粒化到感受态细胞中,诱导表达蛋白,纯化后浓度为20 mg/mL。在含有0.04 mol/L Sodium cacodylate trihydrate pH7.0,50%v/v(+/-)-2-Methyl-2,4-pencanediol条件下,蛋白结晶晶型良好。经过X-射线衍射检测,得到一套分辨率为3.3?,完整性为94%的数据。STM14-0100蛋白有较强的硫酸酯酶活性,加入H_(2)O_(2)后其硫酸酯酶活性显著降低,而突变体蛋白STM14-0100-C109A则失去这两种酶的活性,突变体蛋白STM14-0100-H165A尚保留一定的酸性磷酸酯酶活性。结论 STM14-0100蛋白可在原核表达体系中稳定表达,并培养出晶体。该蛋白具有硫酸酯酶活性,在氧化状态下酶活降低。突变第109位的半胱氨酸对酶的活性影响较大,推测该位点为位于酶活中心的关键氨基酸。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 STM14-0100蛋白 蛋白纯化 晶体培养 酶活测定
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天花粉凝集素的晶体学研究 被引量:2
12
作者 王耀萍 韩毅 +2 位作者 李平卫 毕汝昌 王克夷 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第3期413-417,共5页
天花粉凝集素是从中药天花粉瓜蒌块根中分离出的一种能专一结合糖类的新蛋白质。用悬滴汽相扩散法培养出了该蛋白质的晶体,最大线度尺寸达1.1mm。该晶体属正交晶系,空间群为P212121,晶胞参数a=44.7,b=69.5... 天花粉凝集素是从中药天花粉瓜蒌块根中分离出的一种能专一结合糖类的新蛋白质。用悬滴汽相扩散法培养出了该蛋白质的晶体,最大线度尺寸达1.1mm。该晶体属正交晶系,空间群为P212121,晶胞参数a=44.7,b=69.5,c=180.9,晶胞内每个不对称单位含1个天花粉凝集素分子。收集了3.0分辨率的衍射数据,并以具有某些相似性能的已知蛋白质结构为模型,做了分子置换研究。本文报导天花粉凝集素的晶体培养及X射线晶体学研究的初步结果。 展开更多
关键词 天花粉凝集素 晶体培养 分子置换
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晶体培育过程的智能控制 被引量:1
13
作者 刘秉瀚 杨小玲 王伟智 《兵工自动化》 1997年第4期21-24,共4页
介绍了晶体培育的主要特点,论述了智能控制器的控制方法,并给出了智能控制器的应用结果,其控制精度已达到0.01℃。
关键词 智能控制 自适应控制 晶体培养
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金黄色葡萄球菌表面蛋白SdrE的表达、纯化及晶体生长
14
作者 张绍城 郭珍 +3 位作者 张宏鹏 苟冶然 龙小滨 汪德强 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期529-533,共5页
目的:对金黄色葡萄球菌表面蛋白质(serine-aspartate repeat,SdrE)进行克隆表达纯化及晶体培养,以期解析其三维结构,进而深入分析金黄色葡萄球菌感染的分子机制,为研发新的抗菌药物提供基础。方法:利用PCR技术扩增SdrE基因,构建重组质粒... 目的:对金黄色葡萄球菌表面蛋白质(serine-aspartate repeat,SdrE)进行克隆表达纯化及晶体培养,以期解析其三维结构,进而深入分析金黄色葡萄球菌感染的分子机制,为研发新的抗菌药物提供基础。方法:利用PCR技术扩增SdrE基因,构建重组质粒pW28-SdrE,并在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)B834中表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱和DEAE阴离子交换层析柱纯化SdrE蛋白质,再用Hiload Superdex 200凝胶层析柱分析其在溶液中的聚集状态,用Hampton试剂盒初筛晶体及棋盘法优化晶体。结果:(1)构建了重组质粒pW28-SdrE,并在E.coli B834中可溶性表达。(2)获得了纯度较高(85%)的SdrE蛋白质,该蛋白质在溶液中以单体形式存在。(3)培养出晶形较好、衍射能力较强的SdrE蛋白质单晶。结论:利用经典的蛋白质纯化技术和晶体培养技术,可以获得衍射能力较强的SdrE单晶,为其三维结构的解析和基于结构的新型特异性抗菌药物的研发提供了重要的基础。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 表面蛋白质SdrE 蛋白质表达纯化 蛋白质晶体培养 抗菌药物
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六次甲基四胺、邻苯二甲酸、咪唑和Cu(Ⅱ)配合物的合成及单晶培养 被引量:4
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作者 李伟 阮桂春 《广东化工》 CAS 2004年第7期15-16,共2页
六次甲基四胺(hmt)、邻苯二甲酸与咪唑(im)和金属离子配位可形成一系列的配合物,本文重点介绍了六次甲基 四胺、邻苯二甲酸与Cu(Ⅱ)(im)4(NO3)2以乙醇--水为溶剂,采用常温溶剂蒸发法合成标题配合物及培养出其单晶。
关键词 六次甲基四胺 邻苯二甲酸 咪唑 晶体培养
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展望21世纪人工智能晶体
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作者 蒋民华 《科学与管理》 2003年第3期25-26,共2页
人工晶体作为一门科学,它包括材料制备科学、晶体生长机理、新晶体材料的探索和晶体的表征等方面,充分体现了材料科学、凝聚态物理和固体化学等多学科交叉的特点.
关键词 21世纪 人工智能晶体 晶体培养 晶体生长过程 功能晶体 智能材料 纳米技术
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鼠伤寒沙门菌YaaA蛋白的原核表达与纯化及蛋白晶体的培养
17
作者 戴元吉 张敏 +4 位作者 程龙云 许祥冬 华浩然 王玮玮 李冰清 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2023年第5期513-518,共6页
目的通过建立大肠埃希菌BL21(DE3)原核表达系统,得到高纯度及构象均一的YaaA蛋白,筛选蛋白晶体,为其结构解析及相关功能研究奠定基础。方法利用生物信息学方法对YaaA蛋白的性质及结构进行预测和分析。使用PCR的方法从沙门菌基因组中扩增... 目的通过建立大肠埃希菌BL21(DE3)原核表达系统,得到高纯度及构象均一的YaaA蛋白,筛选蛋白晶体,为其结构解析及相关功能研究奠定基础。方法利用生物信息学方法对YaaA蛋白的性质及结构进行预测和分析。使用PCR的方法从沙门菌基因组中扩增yaaA基因,将其克隆到原核表达载体pGl01上,获得重组质粒pGl01-YaaA。利用DE3培养后,IPTG合并氯霉素进行YaaA蛋白的可溶性诱导表达,通过镍离子亲和层析柱、阴离子交换柱以及分子筛凝胶层析柱得到高纯度的目标蛋白。纯化的YaaA蛋白采用悬滴气象扩散法获得其蛋白晶体。通过胰蛋白酶酶切试验测定YaaA蛋白核心区及稳定性。结果YaaA蛋白基因成功克隆到pGl01载体上,并在DE3中可溶性表达。通过层析纯化得到高纯度、形态均一的YaaA蛋白,相对分子质量约为30×10^(3),浓度为6mg/mL,纯度约为98%。YaaA蛋白的稳定性较好,晶体培养条件为:0.2 mol/L Ammonium sulfate,0.1 mol/L BIS-TRIS,pH 6.5,25%(w/v)Polyethyleneglycol3350。结论通过原核表达、亲和层析及凝胶过滤层析获得高纯度且构象单一的YaaA蛋白,该蛋白稳定性较好,可用于蛋白晶体的筛选,为YaaA的结构解析和功能验证奠定了基础。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 YaaA蛋白 原核表达 晶体培养 蛋白稳定性
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有机导体及超导体的回顾与展望 被引量:5
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作者 张其春 吴培基 朱道本 《功能材料》 EI CAS CSCD 北大核心 2000年第3期225-229,共5页
有机固体是一门多学科交叉的新型研究领域。主要研究具有磁性、光导、电导等特殊性质的分子体系的设计、合成与应用。本文在前人工作的基础上 ,对有机导体及有机超导体的发展历程、结构规律、导电性质作了总结 ;并对有机导体及超导体的... 有机固体是一门多学科交叉的新型研究领域。主要研究具有磁性、光导、电导等特殊性质的分子体系的设计、合成与应用。本文在前人工作的基础上 ,对有机导体及有机超导体的发展历程、结构规律、导电性质作了总结 ;并对有机导体及超导体的单晶培养、晶体电导率的测量方法作了描述。目前 ,有机超导体的超导温度最高己达 12 .8K ,科学家除了改变不同的阴离子与现有的给体培养单晶外 ,还对现有的给体进行修饰和设计并合成了新的给体 ,本文对这一方面也进行了综述。同时对有机导体及超导体发展前景进行了展望。 展开更多
关键词 有机导体 有机超导体 电性能 晶体培养 有机固体
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A Study of Rabbit Lens Epithelial Cells Survival and Growth on the Rabbit Capsular Bag in Vitro 被引量:1
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作者 黄瑾 谢莉娜 +1 位作者 卞春及 王林农 《Journal of Nanjing Medical University》 2004年第1期21-24,共4页
Objective: To study the proliferation, migration and metaplasm of residual rabbit lens epithelial cells (LECs) after extracapsular cataract extraction(ECCE)based on the rabbit capsular bag model in vitro. Methods:... Objective: To study the proliferation, migration and metaplasm of residual rabbit lens epithelial cells (LECs) after extracapsular cataract extraction(ECCE)based on the rabbit capsular bag model in vitro. Methods: Sham cataract surgery, including anterior capsulorhexis, nucleus hydroexpression and aspiration of lens fibers, was performed on 20 rabbit lens. The capsular bags were isolated and pinned to sterile non-toxic silicone rings on petri dishes. The capsular bags were incubated with Eagle's minimum essential medium (DMEM) supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) and monitored for 3 weeks by phase-contrast microscopy, after which light microscopy was performed on them.Results: After a latent period of 2-3 d, outgrowth was observed across the posterior capsule. Growth proceeded rapidly so that the posterior capsule was totally covered by a confluent monolayer of cell at 6-8 day. Capsular wrinkles became increasingly apparent as time progressed, causing a marked rise in light scatter. An increase in capsular tension also came.Conclusion: This model exhibits many of the in vito characteristics of the lens capsule after extracapsular surgery and may prove useful in further elucidating the cellular mechanisms of posterior capsule opacification and developing strategies for inhibiting cell growth with this system. 展开更多
关键词 lens epithelial cell CULTURE capsular bag model posterior capsule opacification
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溶液结晶方法与技术的现状与发展 被引量:2
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作者 谭君蕊 李晖 《大学化学》 CAS 2021年第4期106-117,共12页
溶液结晶是晶体培养与工业生产中的重要流程。本文介绍溶液结晶的基本原理与过程,突出过饱和度的概念,探讨影响溶液结晶的重要因素,并基于影响过饱和度的单一或复合变量综述常规与新兴的溶液结晶方法与技术,包括其基本原理与操作、典型... 溶液结晶是晶体培养与工业生产中的重要流程。本文介绍溶液结晶的基本原理与过程,突出过饱和度的概念,探讨影响溶液结晶的重要因素,并基于影响过饱和度的单一或复合变量综述常规与新兴的溶液结晶方法与技术,包括其基本原理与操作、典型案例等内容。最后,基于5W1H法对溶液结晶下晶体培养过程的优化设计进行讨论。 展开更多
关键词 溶液结晶 晶体培养 过饱和度 PH 剪切流
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