晶状体上皮细胞与老年性白内障相关性的研究进展

白内障是以晶状体混浊为主要特征的一种眼部疾病。其中老年性白内障(age related cataract,ARC)是最普遍的类型,随着人口老龄化,患病率逐年增加,严重影响了患者的健康和生活质量。因此,深入研究并阐明ARC发生、发展过程中的具体分子机制,找到发病原因,具有重要的理论和现实意义。据报道,晶状体上皮细胞(Lens epit-helial cells,LECs)的凋亡可能与白内障的发生密切相关。晶状体接受外界环境影响最早的部位是位于晶状体前囊膜下的LECs,当此类细胞发生改变时,也会诱发晶状体发生改变。所以研究LECs的状态对于ARC的形成具有深远意义。本文就LECs与ARC的相关研究进展进行综述。

年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的超微结构研究

目的:研究年龄相关性白内障晶状体上皮的超微结构变化。方法:用日本产HU-12A型电镜对8例年龄相关性白内障及3例正常透明晶状体上皮细胞的超微结构进行观察。结果:7例年龄相关性白内障晶状体前囊上皮细胞形状不规则,相邻细胞间以许多复杂的指状突超紧密镶嵌,部分上皮细胞内水肿,细胞间隙亦水肿呈较大的空泡状,细胞内线粒体等细胞器肿胀,个别区域上皮细胞坏死脱落,1例年龄相关性白内障晶状体前囊上皮细胞体积固缩,细胞核染色质分裂并出现凝聚的凋亡小体。结论:晶状体上皮细胞超微结构的病理形态学改变是年龄相关性白内障发生发展的重要原因之一。

不同极性石斛生物碱的提取分离及对人晶状体上皮细胞增殖的影响

【目的】观察不同极性石斛生物碱对人晶状体上皮细胞(HLEC)的保护作用。【方法】石斛粉末经乙醇提取、降膜浓缩、酸化、盐析、萃取后,水洗、回收提取分离不同极性生物碱。HLEC用含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液培养,石斛生物碱的保护作用实验分为10组:正常对照组,模型组,水溶性生物碱、脂溶性生物碱、低极性生物碱、弱极性生物碱高、低剂量组,剂量均分别为25.0、12.5μg/L;采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同极性生物碱对HLEC增殖的影响。【结果】通过单因素实验,获得了影响不同极性石斛生物碱提取率的关键因素,均为体积分数80%乙醇提取3次,提取3 h时提取率最高;模型组HLEC增殖被H2O2明显抑制,低剂量脂溶性生物碱组细胞抑制率显著降低,与模型组比较差异有显著性意义(P<0.05)。【结论】较低剂量的脂溶性生物碱能更好地抑制H2O2对晶状体上皮细胞的氧化损伤。

微小RNA-133b对紫外线诱导的晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用及其调控机制

背景 研究证实紫外线B照射是白内障发生的主要原因之一，其机制与晶状体上皮细胞（LECs）凋亡有关。微小RNA-133b（miR-133b）参与氧化应激诱导的LECs凋亡的调控过程，但其是否参与紫外线诱导白内障的发病过程及其机制尚未阐明。 目的 观察miR-133b对紫外线诱导白内障LECs凋亡的抑制作用及其调控机制。 方法 将20只8周龄SPF级C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为白内障模型组和正常对照组，其中白内障模型组小鼠用波长302 nm的紫外线直接照射眼部5 min，照射强度为300 W/cm2，每天照射1次，共照射1周；正常对照组小鼠不给于任何干预。于末次照射后24 h处死各组小鼠并摘出10只眼球以制备全眼球切片。取人LECs细胞系（SRA01/04）紫外线照射25 min，并继续培养4 h作为紫外线照射组，正常对照组细胞不作任何干预。取紫外线照射模型组细胞接种于96孔板并分为miR-133b模拟物组、模拟物阴性对照组、miR-133b抑制物组和抑制物对照组，分别用lipofectamine2000联合50 nmol/L miR-133b模拟物、miR-133b模拟物对照剂、100 nmol/L miR-133b抑制物或miR-133b抑制物对照剂瞬时转染细胞。采用实时荧光定量PCR法检测小鼠晶状体组织和不同转染组人LECs中miR-133b mRNA及其预测靶基因BCL2L2 mRNA的表达以评估转染效率；采用TUNEL凋亡检测试剂盒检测小鼠晶状体组织中LECs和不同转染组人LECs的凋亡情况。 结果 正常对照组小鼠晶状体前囊膜LECs排列规则，未发现TUNEL染色阳性细胞，白内障模型组小鼠LECs排列稀疏，可见凋亡细胞呈红色荧光。紫外线照射组细胞凋亡率为（43.90±9.30）%，明显高于正常对照组的（1.08±0.49）%，差异有统计学意义（t＝－7.963，P＝0.015）。白内障模型组小鼠晶状体组织和紫外线照射组细胞中miR-133b mRNA的相对表达量分别低于正常对照组小鼠和正常人LECs，差异均有统计学意义（t＝－2.958，P＝0.042；t＝－6.195，P＝0.003）。白内障模型组小鼠晶状体组织和紫外线照射组细胞中BCL2L2 mRNA的相对表达量分别高于正常对照组小鼠和正常人LECs，差异均有统计学意义（t＝3.761，P＝0.020；t＝12.437，P＝0.000）。miR-133b模拟物组人LECs中miR-133b mRNA的相对表达量明显高于miR-133b模拟物对照组，而BCL2L2 mRNA的相对表达量明显低于miR-133b模拟物对照组，差异均有统计学意义（t＝10.883、－5 927.617，均P〈0.01）；miR-133b抑制物组人LECs中miR-133b mRNA的相对表达量明显低于miR-133b抑制物对照组，而BCL2L2 mRNA的相对表达量明显高于miR-133b抑制物对照组，差异均有统计学意义（t＝－1 606.622、17.556，均P〈0.01）。miR-133b模拟物组LECs凋亡率明显低于miR-133b模拟物对照组[（17.55±4.24）%与（43.62±9.19）%]，miR-133b抑制物组LECs凋亡率为（78.23±12.42）%，明显高于miR-133b抑制物对照组的（48.01±9.68）%，差异均有统计学意义（t＝－4.462，P＝0.011；t＝3.324，P＝0.029）。 结论 miR-133b可防止紫外线照射所致的白内障的形成，其机制可能与靶向负性调控BCL2L2基因从而调控LECs的凋亡过程有关。

叉头蛋白M1在食管鳞状上皮异型增生至癌变过程中的表达及其与临床病理的相关性

目的检测食管癌前病变组织、食管鳞癌组织及癌旁正常食管鳞状上皮中叉头蛋白M1(FOXM1)的表达水平,探讨FOXM1蛋白表达水平与患者临床病理特征的相关性。方法收集60例食管癌前病变组织(包括低级别瘤变和高级别瘤变各30例)和115例食管鳞状细胞癌及配对的癌旁组织标本,所有病例均经病理证实,同时收集患者的临床资料。采用免疫组化的方法检测组织中FOXM1的表达情况。结果 FOXM1蛋白主要表达于肿瘤细胞及癌前病变细胞中,在细胞浆与细胞核中均有表达。FOXM1在食管低级别瘤变、高级别瘤变和食管鳞癌组织中的高表达率分别为26.7%(8/30)、57.7%(17/30)和60.0%(69/115),而在配对癌旁组织中呈低表达或无表达。FOXM1异常表达率增高与食管鳞状细胞癌患者的肿瘤大小、肿瘤浸润深度及肿瘤TNM分期存在显著相关性(分别为P<0.001,P<0.001和P=0.032),而与患者的性别、年龄、肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移等无明显相关性(P>0.05)。结论 FOXM1在食管鳞状上皮癌前病变阶段即出现表达升高,且随着食管鳞状上皮癌变的发生发展表达逐渐升高。FOXM1的异常表达与食管鳞癌患者的肿瘤大小、浸润深度及肿瘤TNM分期存在显著相关性。

兔视网膜色素上皮细胞培养和鉴定

目的:进行兔视网膜色素上皮细胞(RPE)细胞的体外培养,探讨RPE培养与鉴定方法,为研究其生理功能、生化特征和病理过程提供细胞模型。方法:用改良的眼杯固定法,将其固定在眼球托上,用胰酶直接消化视网膜色素上皮面,收取RPE细胞。作细胞形态学、免疫组织化学、免疫荧光鉴定。结果:RPE细胞培养早期生长活跃、胞核透明、胞浆含丰富黑色素颗粒,多巴氧化酶呈阳性反应.免疫组织化学染色和免疫荧光染色提示角蛋白表达强阳性。结论:培养的大量细胞可用于RPE的体外实验研究,多巴染色是鉴定RPE细胞一种较好的方法。

二甲基砜在百草枯诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤中的保护作用研究

二甲基砜(MSM)的抗炎抗氧化作用近年来逐渐被医学界所关注.百草枯是活性氧(ROS)的有效诱导物,百草枯中毒对肺组织的损伤作用,主要通过促进细胞内产生ROS,导致支气管或肺泡出血、肺间质水肿、低氧血症和白细胞浸润等严重的肺损伤.NF-E2相关因子2(nuclear factor E2-relat-ed factor2,NRF2)则是ROS介导的病理生理过程中的关键抗氧化转录因子.已经证实,NRF2具有调节氧化应激的能力,并能保护细胞对抗氧化剂刺激.本实验拟将MSM作用于急性百草枯中毒大鼠,观察MSM是否对百草枯诱导的氧化应激具有细胞保护作用.

三种不同材料人工晶状体的囊膜生物相容性比较

背景研究表明，后囊膜混浊（PCO）的发生与人工晶状体（IOLs）的材料有关，然而不同材料的IOLs对PCO发生率的影响存在争议。目的研究不同材料IOLs表面人晶状体上皮细胞（LECs）的黏附、增生、上皮-间充质转化（EMT）和相关细胞因子分泌情况，探讨不同材料IOLs的囊膜生物相容性。方法将人LECs系HLE—B3细胞分别接种于疏水性丙烯酸酯（AcrysofSA60AT）IOLs、硅凝胶（Crystalens）IOLs、聚甲基丙烯酸甲酯（PMMA）IOLs的表面培养6h和24h，观察不同IOLs表面黏附的细胞数目及其形态；采用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）检测IOLs表面细胞的增生反应；采用免疫荧光技术检测不同IOLs表面人LECs间质细胞标志物a-平滑肌肌动蛋白（0【-SMA）的表达，计算IOLs表面人LECs的EMT转化率；采用ELISA法检测不同材料IOLs表面细胞培养液中转化生长因子-β2（TGF—β2）、白细胞介素-6（IL-6）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及MMP-9的质量浓度。结果细胞接种于不同材料IOLs并培养6h，AcrysofIOLs和CrystalensIOLs表面黏附的细胞以多边形和椭圆形为主，而PMMAIOLs表面黏附的细胞形态以纺锤形为主；培养后24h，IOLs表面细胞全部伸展，AcrysofIOLs和CrystalensIOLs表面黏附的细胞为多边形，长梭形细胞增多，PMMAIOLs表面细胞呈典型的纤维纺锤样细胞，部分细胞聚集成团。培养后24hAcrysofIOLs、CrystalensIOLs和PMMAIOLs表面的增生相对细胞数A值分别为0．2384±0．0071、0．1781±0．0066和0．1589±0．0069，总体比较差异均有统计学意义（F=475．947，P=0．000），其中AcrysofIOLs表面的细胞数明显多于CrystalensIOLs和PMMAIOLs，差异均有统计学意义（均P〈0．001）。AcrysofIOLs、CrystalensIOLs和PMMAIOLs表面人LECs的EMT转化率分别为（9．99±3．80）％、（17．33±5．71）％和（84．16±10．48）％，组间总体比较差异有统计学意义（F=127．411，P=0．000），其中PMMAIOLs表面人LECs的转化率明显高于CrystalensIOLs和AcrysofIOLs，差异均有统计学意义（均P〈O．001）。ELISA检测结果显示，AcrysofIOLs、CrystalensIOLs和PMMAIOLs细胞培养液中TGF—β2、IL-6、MMP-2和MMP-9质量浓度的比较差异均无统计学意义（F=0．846、0．947、0．255、0．922，均P〉O．05）。结论在临床上常用的3种材料的IOLs中，疏水性丙烯酸酯的囊膜生物相容性最佳。

紫外线对人晶状体上皮细胞端粒酶活性和氧化损伤蛋白表达水平的影响

目的探讨在紫外线诱导的人晶状体上皮细胞DNA损伤修复过程中端粒酶活性和氧化损伤蛋白的变化和作用.方法采用照射剂量为0.0(对照组)及0.5、1.5、2.5、3.5、5.0、7.5、10.0 mJ/cm2(实验1～7组)的紫外线照射人晶状体上皮细胞,采用端粒酶重复序列扩增-酶联免疫吸附测定法检测端粒酶活性,采用免疫印迹法检测p53、DNA损伤诱导生长停顿基因(GADD45)、增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期依赖激酶抑制剂p16的蛋白表达水平.结果对照组和实验1～7组的端粒酶活性呈上调趋势,8组比较差异有统计学意义(F=45.65,P<0.01);对照组和实验1～7组的p53、GADD45、PCNA、p16的蛋白表达水平均呈上升趋势,8组比较差异均有统计学意义(F=13 015.52,41 241.40,25 084.19,44 331.72;P<0.01).结论在紫外线诱导的人晶状体上皮细胞DNA损伤修复过程中,端粒酶活性上调,氧化损伤蛋白的表达水平上升.端粒酶活性的上调既加强了保护细胞的作用,又增强了增殖作用;氧化损伤蛋白表达水平的提高在紫外线诱导的人晶状体上皮细胞DNA损伤修复过程中挥关键作用;端粒酶活性上调与氧化损伤蛋白表达水平提高有关.

胆管细胞免疫生物学研究进展

哺乳动物的胆道系统由大小不一的胆管交织形成，胆管细胞即胆道上皮细胞（bile duct epithelia，BDE）参与胆管构成。胆管起始于肝小叶，随后各分支汇集于较大的胆管，最终汇入肝外胆道。既往认为胆管细胞仅为柱状上皮细胞，被动参与肝脏功能的调节。近20年来的研究表明，胆管细胞不仅主动参与肝脏的病理生理过程，且具有重要的调节功能。胆管细胞仅占肝脏细胞的4％～5％，却能分泌每日输出胆汁量的近40％。

胃癌和癌前病变的Ag-NOR计数及其在病理诊断中的意义

胃粘膜上皮的非典型增长(即胄的界限性病变),仅靠HE染色光镜观察与其相邻的良、恶性病变进行形态学鉴别常是困难的,进一步判断其发展衍变过程则更是不易。核仁形成区相关蛋白的银染颗粒计数目前被视为一种反映细胞增殖程度的指标,已用于多种器官良恶病变的区分。

上皮间质转化在肿瘤侵袭和转移中的研究进展

上皮细胞间质转化（epithelial-mesenchyma transition,EMT）是以上皮细胞极性丧失及间质细胞特性获得为主要特征,存在于人体多个的生理病理过程中。EMT是上皮细胞来源肿瘤局部浸润和远处转移的一个重要途径,并且在其间扮演重要角色。

体内贲门组织癌变过程的研究

目的研究早期贲门癌的发生规律。方法在食管癌高发区涉县建立205人的研究队列,利用内镜普查和定位活检的方法,前瞻性观察贲门组织癌变过程中组织病理学变化情况。结果 (1)H.pylori 感染、慢性活动性胃炎和贲门癌在发生位点上具有重叠关系。(2)贲门组织在慢性活动性胃炎背景中组织损伤程度重细胞增殖活跃(ki-67表达增强),肠上皮化生、腺上皮萎缩、腺上皮不典型增生发生率高。(3)贲门组织慢性活动性胃炎的自然转归表现为痊愈、肠化、萎缩、不典型增生。(4)贲门组织不典型增生和粘膜内癌的自然转归具有稳定、减轻、进展等表现形式。结论早期贲门癌的发生起源于组织再生过程,是组织再生不良的表现。

自噬与肾脏固有细胞损伤

近年来,自噬（autophagy）已成为生物学领域一个新的研究热点,它在人类疾病发生发展中的作用也逐渐受到重视.肾脏固有细胞如足细胞、系膜细胞、内皮细胞以及肾小管上皮细胞等经常会受到免疫因子、肾毒物、缺血缺氧等各种理化因素的刺激,这些刺激往往会诱导细胞损伤,导致肾脏疾病的发生.自噬作为维持细胞内环境稳定的一个重要机制,研究发现它与肾脏固有细胞处理各种应急的病理生理过程也存在着密切关系.本文主要对自噬与各种原因所致肾脏固有细胞损伤的研究进展进行概述,以期较为全面地了解这方面的研究动态,为自噬在肾脏疾病领域的研究提供参考.

病理学

网膜和肠系膜胃肠道外间质瘤的临床病理研究；肺上皮样血管内皮瘤临床病理观察；肝素酶和碱性成纤维细胞生长因子与非小细胞肺癌转移和预后的关系；存活素在胰腺癌组织中的表达；肺淋巴管平滑肌瘤病临床病理学观察；淋巴结外Rosai-Dorfman病；RASSF1基因转录本A和C的表达与卵巢癌关系的研究；股动脉粥样硬化的病理学特点探讨；子宫内膜间质肉瘤与转移复发瘤的形态特点；桥本氏病合并甲状腺乳头状腺癌；前哨淋巴结阳性早期乳腺癌非前哨淋巴结的组织学检测及临床意义；肺癌患者FLk-1、LRP和MDR1的表达与格床研究；绝经前后T1期乳腺癌患者临床特征的分析；胃癌原发灶与转移灶E-钙黏附素mRNA表达水平的比较研究；卵巢上皮癌细胞中VEGF和VEGFRs的表达与STATs的活化；乳腺癌组织中CD105 mRNA的表达及其临床病理意义；胰腺癌中p33^ING1b基因变化及其表达研究；应用组织芯片技术检测肺癌组织中MRP-1／CD9的表达；E-钙黏素和α-连接素的表达与宫颈癌生物学行为的关系；VEGF-C在非小细胞肺癌中的表达及意义；喉癌组织中环氧化酶-2表达及与VEGF、MVD的关系；外阴Paget’病临床分析；三氧化二砷对食管癌细胞侵袭、转移和血管形成的影响；1544例乳腺浸润性导管癌临床特点和生存率的多因素分析；HIF-1α、VEGF在胰腺癌组织中的表达及其与血管新生的关系；Cyclin E、CDK2和p21WAF1在食管上皮癌变过程中的表达及意义；大肠癌组织中P-gp、GST-π、Topo-Ⅱ的表达及临床意义；肝细胞生长因子及其受体mRNA在星形细胞瘤中的表达；Cyclin A、p27在卵巢肿瘤中的表达及临床意义；环氧合酶-2 mRNA在非小细胞肺癌组织中表达的临床意义；乳腺腺样囊性癌临床病理特点及文献复习；乳腺良恶性病变中CD10表达及意义；乳腺导管内增生性病变及浸润性癌中树突状细胞的检测；乳腺伴梭形细胞化生腺癌2例及文献复习；胃肠MALT淋巴瘤中bcl-10 mRNA和蛋白的表达；ALK阳性的弥漫性大B细胞淋巴瘤；眼眶原发性MALT淋巴瘤临床病理观察；低度恶性子宫内膜间质肉瘤临床病理分析。