人参皂苷Rg_(3)对人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的影响

目的探讨人参皂苷Rg_(3)对过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤的改善作用及对核转录因子E2相关因子2(nuclear factor E2 related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶-1(heme oxygenase 1,HO-1)信号通路的调节作用。方法用不同浓度人参皂苷Rg_(3)处理过氧化氢诱导的SRA01/04细胞,用噻唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞存活率。将第3代对数生长期SRA01/04细胞随机分为正常组、氧化损伤组(用200μmol∙mL^(−1)过氧化氢处理)、人参皂苷Rg_(3)低剂量组和人参皂苷Rg_(3)高剂量组(分别用40、80μg∙mL^(−1)人参皂苷Rg_(3)处理6 h,更换培养基后用200μmol∙mL^(−1)过氧化氢处理12 h),用MTT法检测细胞存活率,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用试剂盒检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(glutathioneperoxidase,GSH-Px)的含量,用蛋白印迹法检测Nrf2、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch like epichlorohydrin related protein 1,Keap1)和HO-1蛋白的相对表达量。结果与0μg∙mL^(−1)人参皂苷Rg_(3)组比较,10、20、40、80μg∙mL^(−1)人参皂苷Rg_(3)组的细胞存活率逐渐升高(P<0.05)。与正常组比较,氧化损伤组的细胞存活率、SOD和GSHPx含量以及Nrf2、Keap1和HO-1蛋白相对表达量降低,细胞凋亡率和MDA含量升高(P<0.05);与氧化损伤组比较,人参皂苷Rg_(3)低剂量和人参皂苷Rg_(3)高剂量组的细胞存活率、SOD和GSH-Px含量以及Nrf2、Keap1和HO-1蛋白的相对表达量升高,细胞凋亡率和MDA含量降低(P<0.05);人参皂苷Rg_(3)低剂量和人参皂苷Rg_(3)高剂量组各项指标水平变化规律相同,人参皂苷Rg_(3)高剂量组更显著(P<0.05)。结论人参皂苷Rg_(3)可抑制过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞凋亡,减轻氧化应激损伤,其可能是通过激活Nrf2/HO-1信号通路发挥调节作用的。

年龄相关性白内障晶状体上皮细胞的Smac、caspase-3表达及死亡方式

目的探讨年龄相关性白内障晶状体上皮细胞(LECs)中Smac、caspase-3的表达和LECs超微结构变化及死亡方式。方法收集皮质性(30例)、核性(24例)、后囊下性(28例)年龄相关性白内障患者晶状体前囊片,以12例高度近视摘出的透明晶状体的晶状体前囊片为对照,应用免疫组织化学链酶菌抗生素蛋白-过氧化物酶法检测Smac、caspase-3蛋白在LECs中的表达,并采用透射电镜观察LECs超微结构的改变及死亡方式。结果Smac、caspase-3蛋白在年龄相关性白内障组LECs中的阳性表达率分别为81.71%、78.05%,与透明晶状体组比较染色阳性率及染色强度差异均有统计学意义(P<0.05)。3种类型年龄相关性白内障透射电镜下均可见LECs多表现为肿胀,线粒体嵴缺失、空泡变、髓样化,粗面内质网扩张、颗粒融合和脱颗粒现象,仅1例核性白内障中可见到核膜皱缩向外呈锐角凸起,部分双层核膜融合,模糊不清,细胞核内染色质浓缩,未见凋亡小体。结论Smac、caspase-3蛋白可能参与了年龄相关性白内障的形成。年龄相关性白内障LECs存在凋亡、胀亡等多种细胞死亡方式,细胞凋亡与细胞胀亡的发生可能存在部分分子机制的重叠。LECs超微结构的改变表明线粒体形态改变和功能异常在年龄相关性白内障发生中起重要作用。

前囊下性白内障患者晶状体上皮细胞基质金属蛋白酶-3的表达意义

目的:探讨基质金属蛋白酶-3(mat ri xmet al lopro-teinase-3,MMP-3)在前囊下性白内障患者的晶状体上皮细胞(lensepithelialcells,LECs)中的表达及意义。方法:采用SP免疫组织化学染色法,测定21例前囊下性白内障、18例核性白内障和10例正常晶状体上皮细胞中MMP-3的表达情况,并进行阳性细胞细胞计数。结果:MMP-3在前囊下性白内障晶状体上皮细胞中有表达,而在核性白内障和正常晶状体上皮细胞中均无表达。结论:MMP-3可能是调节细胞外基质(extracellulamatrix,ECM)降解的重要因素而参与前囊膜下性白内障的形成。

PI3K抑制剂LY294002对人晶状体上皮细胞中S期激酶相关蛋白2表达的影响

目的探讨PI3K抑制剂LY294002对体外培养的人晶状体上皮细胞(LECs)增生和细胞周期S期激酶相关蛋白2(Skp2)表达的影响。方法 MTT比色法检测25μmol/L的LY294002处理人LECs细胞株SRA01/04后12h和24h细胞的增生情况;流式细胞仪检测LY294002作用24h后细胞周期的分布情况;Westernblot和real-timePCR法分别测定LY294002处理24h后细胞中Skp2及其mRNA的表达情况。结果 25μmol/L的LY294002作用于SRA01/04细胞0～24h,SRA01/04细胞的增生受抑制,且作用24h时对SRA01/04细胞的抑制作用最明显。LY294002组中处于G1期和S期的细胞占总细胞数的百分率分别为(66.15±2.63)%和(27.34±6.58)%,对照组为(56.73±1.35)%和(37.32±5.54)%,LY294002组细胞Skp2及其mRNA的表达量明显减少。结论 PI3K抑制剂LY294002可抑制人LECs的增生,使部分细胞停滞于细胞周期的G1期,LY294002抑制人LECs的增生可能与Skp2的表达下调有关。

硅油眼晶状体前囊膜及上皮细胞的病理学改变及Caspase-3表达

目的 观察硅油充填眼晶状体前囊膜及上皮细胞的病理学改变及 Caspase- 3表达 ,探讨硅油引起白内障的病因及与凋亡的关系。方法 收集 2 7只晶状体前囊膜 ,通过HE染色和免疫组化方法对硅油眼的晶状体前囊膜和上皮细胞及 Caspase- 3在其上的表达进行观察。结果 前囊膜下许多空间被硅油滴占据 ;Caspase- 3在晶状体上皮细胞有很好的表达 ,2 7例中有 2 3例呈阳性表达。结论 硅油滴与白内障的发生、发展有关 ;

氯通道蛋白-3在透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞中的表达

目的研究透明晶状体和老年性白内障患者晶状体上皮细胞氯通道蛋白-3(chloride channel protein 3,CLC-3)的表达。方法随机收集40例老年性白内障手术患者和5例透明晶状体(来自晶状体脱位患者)的晶状体前囊膜,采用免疫组织化学染色和免疫荧光技术检测晶状体上皮细胞CLC-3的表达。结果CLC-3阳性表达于晶状体上皮细胞的细胞膜。老年白内障组40张切片中,CLC-3表达均为阳性。而透明晶状体组5张切片中,4张阴性,1张可疑阳性。计算机图像分析结果,透明晶状体组平均吸光度(A)值明显低于老年白内障组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年性白内障患者晶状体上皮细胞CLC-3表达阳性,CLC-3可能参与老年性白内障的形成。

MMP-3和TIMP-1在白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-3(matrixmetalloproteinase-3,MMP-3)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(tissueinhibitorofmetalloproteinase-1,TIMP-1)与白内障发病机制的关系。方法采用免疫组织化学方法测定MMP-3和TIMP-1在前囊下性白内障31眼、核性白内障28眼和正常晶状体12眼上皮细胞(lensepithelialcell,LEC)中的表达。结果MMP-3在前囊下性白内障的表达分别与核性白内障、正常晶状体比较,差异有显著意义(χ2=31.490,34.479;P=0.000),而核性白内障与正常晶状体相比较,差异无显著意义(χ2=2.449,P=0.118);TIMP-1表达在3组LEC中差异均无显著意义(P>0.05);MMP-3与TIMP-1在前囊下性白内障LEC中的表达没有相关性(r=0.121,P=0.516),而在核性白内障中有相关性(r=-0.513,P=0.005)。结论MMP-3表达增强及MMP-3/TIMP-1的表达失衡可能与前囊下性白内障的形成密切有关。

紫外线B照射对人晶状体上皮细胞质膜钙ATP酶3表达的影响

背景 细胞质膜钙ATP酶3（PMCA3）参与维持晶状体上皮细胞（LECs） Ca2＋的平衡,可能与白内障的病理过程有关,紫外线B（UVB）是引起白内障的重要因素之一,但UVB对LECs中PMCA3表达的影响少有报道. 目的 研究UVB对人LECs系B-3（HLE B-3） PMCA3表达的影响. 方法 对HLE B-3细胞进行培养和传代,当细胞达80％以上融合时分别暴露于用不同剂量（0、5、10、20 mJ·s/cm2）的UVB分别照射0、20、40和80 s,然后继续培养24、48和72 h,用MTT法检测不同剂量UVB照射后细胞的生存率;用JC-1染色法检测UVB照射后细胞线粒体膜电位（△ψm）的变化;以DCFH-DA染色法检测UVB照射后细胞内活性氧簇（ROS）的变化;采用annexin V-FITC/PI染色法检测UVB照射后细胞的凋亡情况;用Fluo-3/AM染色法检测细胞内Ca2＋浓度的变化;分别采用实时荧光定量PCR（real-time PCR）法和Western blot法检测UVB照射后细胞中PMCA3 mRNA及PMCA蛋白的表达变化. 结果 随着UVB照射剂量的增加和照射时间的延长,细胞生存率均明显下降,差异均有统计学意义（F分组=72.411,P=0.000; F时间=36.588,P=0.000）,其中10 mJ·s/cm2、20 mJ·s/cm2 UVB照射后24 h HLE B-3细胞的生存率分别为（75.3±2.2）％和（48.7±4.5）％,明显低于对照组的（100.0±0.0）％,差异均有统计学意义（P=0.001、0.000）;5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射后48 h细胞的生存率分别为（84.9±1.2）％、（69.3±17.4）％和（32.8±4.5）％,均明显低于对照组的（100.0±0.0）％,差异均有统计学意义（P=0.047、0.000、0.000）;5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射后72 h细胞的生存率分别为（55.1±3.0）％、（42.1±1.9）％和（26.1±4.7）％,与对照组的（100.0±0.0）％相比生存率明显降低,差异均有统计学意义（均P=0.000）.JC-1染色法检测表明,对照组细胞内可见红色荧光,5mJ·s/cm2 UVB照射后细胞内出现绿色荧光,10 mJ·s/cm2及20 mJ·s/cm2 UVB照射组出现绿色荧光增强,红色荧光减弱.5、10、20 mJ· s/cm2 UVB照射后细胞内的ROS由0.4％分别增加至35.8％、51.9％和76.7％.0 mJ·s/cm2 UVB照射组凋亡和坏死细胞比例为2.0％,5、10、20 mJ·s/cm2 UVB照射组凋亡和坏死细胞率分别为4.2％、7.6％和15.1％.10 mJ·s/cm2和20 mJ·s/cm2 UVB照射组细胞内Ca2＋水平分别为0 mJ·s/cm2照射组的（1.2±0.1）倍和（1.3±0.1）倍,差异均有统计学意义（P=0.039、0.004）.5、10和20 mJ·s/cm2 UVB照射组HLE B-3细胞PMCA3 mRNA表达量均明显低于对照组,差异均有统计学意义（P=0.001、0.004、0.000）,各组细胞中的PMCA蛋白相对表达量也均明显低于对照组,差异均有统计学意义（P=0.000、0.000、0.001）. 结论 UVB照射可导致白内障发生的机制可能与人LECs中PMCA3表达量下降和诱导LECs凋亡有关,UVB的作用呈剂量和时间依赖性.

白内障晶状体上皮细胞中miR-126和caspase-3的表达关系及意义

目的检测白内障晶状体上皮细胞(LECs)中miR-126、caspase-3的表达情况,探讨二者在白内障晶状体上皮细胞凋亡中作用及表达关系。方法选取2017年5月至2018年6月收治的78例白内障患者为观察组,同期选取52例正常人(角膜移植术供体)为对照组,采用实时荧光PCR(qRT-PCR)法检测晶状体上皮细胞中miR-126、Caspase-3 mRNA表达水平;Western blot检测晶状体上皮细胞中Caspase-3蛋白表达水平;流式细胞仪测定细胞凋亡率;分析miR-126、caspase-3与晶状体上皮细胞凋亡率的相关性;分析miR-126与Caspase-3在白内障晶状体上皮细胞中表达的相关性。结果观察组白内障患者晶状体上皮细胞中miR-126、Caspase-3 mRNA及蛋白水平、晶状体上皮细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05);白内障患者晶状体上皮细胞中miR-126、caspase-3表达与晶状体上皮细胞凋亡率呈显著正相关(r=0.669,P<0.05;r=0.633,P<0.05);白内障患者晶状体上皮细胞中miR-126水平与caspase-3表达水平呈显著正相关(r=0.599,P<0.05)。结论miR-126、caspase-3在白内障晶状体上皮细胞中高表达,二者与晶状体上皮细胞凋亡有关,提示二者可能通过影响晶状体上皮细胞凋亡参与白内障疾病发生及发展。

bFGF对人晶状体上皮细胞系内钙离子及IP3R、RyR的作用

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人晶状体上皮细胞系LEC-B3内静息Ca2+浓度及三磷酸肌醇受体(IP3R)、ryanodine受体(RyR)表达的影响。方法:LEC-B3细胞系传代培养,分别以1,10,100μg/L bFGF诱导第3代细胞的增殖,MTT法检测其增殖度,激光扫描共聚焦显微镜测细胞内静息钙浓度;RT-PCR(reverse-transcriptase,PCR)方法检测10μg/L bFGF作用后细胞内IP3R和RyRmRNA的表达。结果:与对照组相比,3个浓度的bFGF对LEC-B3都有促增殖作用(P<0.01),其中10μg/L作用最强;bFGF作用后细胞内Ca2+浓度呈bFGF浓度依赖性增高,10μg/L,100μg/LP<0.01,1μg/L<0.05;10μg/L bFGF作用后的细胞IP3RI mRNA表达无明显变化,III型表达明显减弱(P<0.01),ryan-odineRI,IIImRNA表达升高(P<0.05,0.01)。结论:bFGF诱导LEC-B3细胞增殖引起细胞内钙离子浓度增加。Ca2+升高呈bFGF浓度依赖性,并不与细胞增殖度平行。bFGF对IP3R和RyR亚型的mRNA表达有一定影响,并且细胞内Ca2+浓度升高与bFGF刺激RyRmRNA表达升高有关。

Cyt C和Caspase 3在STZ诱导糖尿病大鼠晶状体上皮细胞中的表达

目的研究Cyt C和Caspase 3在STZ诱导糖尿病大鼠晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)中的表达,为糖尿病性白内障的发生机制提供新的线索。方法 60只健康雄性SD大鼠分为实验组和对照组,每组各30只,实验组大鼠腹腔注射STZ溶液,对照组腹腔注射柠檬酸缓冲液。每4周监测大鼠血糖并用裂隙灯观察大鼠晶状体混浊情况,12周末取大鼠晶状体前囊膜,应用免疫组织化学和Western blot检测LEC中Cyt C和Caspase 3的表达。结果 12周末实验组大鼠空腹血糖为(24.04±2.40)mmol·L-1,对照组为(5.13±0.37)mmol·L-1。裂隙灯观察显示实验过程中实验组大鼠晶状体出现混浊,而对照组大鼠晶状体均透明。免疫组织化学结果显示:实验组大鼠LEC中Cyt C和Caspase 3表达呈阳性,而对照组则为阴性。Western blot结果显示实验组胞浆内Cyt C含量(0.928 0±0.029 7)大幅度上升,远高于对照组(0.525 0±0.025 8),差异有统计学意义(P<0.05),而实验组大鼠线粒体内Cyt C含量(0.510 5±0.026 4)则大幅度下降,远低于对照组(0.846 0±0.033 5),差异有统计学意义(P<0.05);实验组大鼠LEC中Caspase 3的表达量(0.906 0±0.027 6)明显高于对照组(0.430 5±0.025 2),差异有统计学意义(P<0.05)。结论 STZ诱导糖尿病大鼠LEC中Cyt C由线粒体释放入胞浆且Caspase 3表达量增加,高血糖可能通过刺激LEC释放Cyt C和激活Caspase 3,诱导LEC凋亡从而形成白内障。

Wnt3a重组真核载体的构建及其在晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞的表达

目的构建Wnt3a真核表达载体并检测其在SRA01/04细胞中的瞬时表达情况。方法采用cDNA文库设计的含有Wnt3acDNA全长序列模板的菌种,PCR法获得Wnt3a片段,与pcDNA3连接,进行酶切鉴定及测序。重组质粒瞬时转染人晶状体上皮细胞系SRA01/04细胞,检测Wnt3a蛋白表达情况。结果 Wnt3a-pcDNA3表达载体基因测序与Genebank报告基因序列一致,Wnt3a-pcDNA3瞬时转染至SRA01/04细胞,Wnt3a蛋白表达明显增强;正常人晶状体上皮细胞系SRA01/04中,仅有少量Wnt3a表达。结论成功构建Wnt3a-pcDNA3真核表达,获得Wnt3a/SRA01/04细胞系,为研究后囊膜混浊的病理机制和防治提供实验基础。

3-氨基苯甲酰胺影响糖尿病大鼠晶状体上皮细胞NF-κB表达的免疫组化研究

目的观察聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)抑制剂3-氨基苯甲酰胺(3-AB)对早期糖尿病(DM)大鼠模型晶状体上皮细胞中核因子κB(NF-κB)表达的影响。方法采用一次性腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)50 mg/kg建立DM大鼠模型。成模后将大鼠随机分为正常对照组(N组)、糖尿病组(DM组)和干预组(DM+P组)。自建立模型后第3天起,DM+P组每日给予3-AB 30 mg/kg灌胃,N组和DM组每天给予等体积0.9%生理盐水灌胃。分别于给药后2、4、8周处死各组大鼠,取出晶状体,免疫组化SP法检测晶状体上皮细胞中NF-κB P65的表达情况。结果 DM 2、4、8周组大鼠晶状体上皮细胞NF-κB P65表达较相应时间点的N组高;DM+P 2、4、8周组大鼠晶状体上皮细胞NF-κB P65表达较相应时间点的N组高;DM+P 2、4、8周组与相应时间点DM组比较,晶状体上皮细胞NF-κB P65表达降低。结论 PARP抑制剂3-AB可以抑制早期糖尿病大鼠晶状体上皮细胞中NF-κB的表达。

circZNF292靶向miR-23b-3p/SIRT1轴调节人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的机制分析

目的探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞(LECs)氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法收集单纯年龄相关性白内障(ARC)患眼的晶状体前囊膜组织(ARC组)和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织(对照组)各3例,进行RNA提取及转录组学测序。应用qRT-PCR检测两组样本中circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1 mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性来验证circZNF292、miR-23b-3p、SIRT1之间的靶向关系。体外培养人永生化LECs细胞系HLE-B3,分为空白对照组、NC siRNA组、circZNF292 siRNA组、NC inhibitor组、miR-23b inhibitor组、NC mimics组、miR-23b mimics组、circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组。使用Lipo2000试剂转染,48 h后收获细胞。分别用MTT法、流式细胞术和荧光探针示踪法检测细胞活力、凋亡率及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)含量。结果ARC组和对照组晶状体前囊膜组织样本之间鉴定得到469个下调circRNA和1231个上调circRNA,对前10位变化最明显的circRNA进行qRT-PCR验证,最终确定circZNF292在ARC组样本中下调最明显;且circZNF292与miR-23b-3p表达、miR-23b-3p与SIRT1 mRNA表达均呈负相关(r=-0.935,-0.951,均为P<0.05)。NC siRNA组和空白对照组细胞活力、细胞凋亡率及ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。应用H_(2)O_(2)刺激后,与NC siRNA组相比,NC siRNA组+H_(2)O_(2) HLE-B3细胞凋亡率及ROS、MDA含量均明显升高(均为P<0.05),细胞活力及SOD、GSH-Px含量均明显降低(均为P<0.05);而circZNF292 siRNA组+H_(2)O_(2)细胞凋亡率及ROS、MDA含量则较NC siRNA组+H_(2)O_(2)均进一步升高(均为P<0.05),细胞活力及SOD、GSH-Px含量均进一步降低(均为P<0.05)。此外,circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组上述指标较circZNF292 siRNA组则被逆转(均为P<0.05)。结论circZNF292可通过miR-23b-3p/SIRT1轴调节人LECs氧化应激损伤,从而有望为ARC提供新的治疗靶标。

MMP-3和TIMP-1在白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义分析

目的探究基质金属蛋白酶-3(MMP-3)和金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)在白内障晶状体上皮细胞中的表达作用效果及意义,并对其进行分析。方法对96例白内障患者和96例正常人进行免疫组织化学方法测定,以测定MMP-3和TIMP-1在白内障晶状体上皮细胞中的表达水平。结果 96例白内障患者中有58例核性白内障、38例前囊性白内障,MMP-3的检测得知58例核性白内障中14例为阳性、44例阴性,38例前囊性白内障中33例为阳性、5例阴性,96例正常晶状体上皮细胞无阴阳性表达;TIMP-1检测三组分别为阳性40例、18例阴性,阳性25例、13例阴性,阳性85例、11例阴性。MMP-3在三组症状表达中差异具有统计学意义(P<0.05),TIMP-1在三组症状表达中差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MMP-3和TIMP-1的表达均衡性与白内障疾病具有一定的关系。

Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO对氧化损伤诱导晶状体上皮细胞凋亡的防护作用

目的 探讨半胱氨酸天冬氨酸酶(caspase-3)及其抑制剂Ac-DEVD-CHO对过氧化氢(H_2O_2)诱导大鼠晶状体上皮细胞凋亡的影响,为进一步研究晶状体氧化损伤机制及其防护提供实验依据。方法 采用大鼠离体晶状体器官培养的方法,用Western blot法分析氧化损伤后晶状体上皮细胞内caspase-3蛋白酶活性,流式细胞AnnexinV-PI双染色法定量检测caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO对晶状体上皮细胞凋亡率的影响。结果 氧化损伤诱导晶状体上皮细胞凋亡过程中,细胞内caspase-3酶活性明显增强,caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO可有效降低晶状体上皮细胞凋亡率。结论 caspase-3蛋白酶在氧化损伤诱导晶状体上皮细胞凋亡过程中占有重要地位,caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO可有效防护体外晶状体上皮细胞氧化损伤。

1,25-二羟维生素D_3对体外人晶状体上皮细胞增殖的影响

目的:研究1,25二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3,简称D3]对体外培养的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,hLEC)增殖的影响。方法:人晶状体上皮细胞系SRA01/04常规培养,取对数期细胞接种于96孔培养板,将含有细胞和培养液不含D3的空白对照组,只含有培养液不含有细胞及D3的调零组,含有无水乙醇(10-4mol/L)、细胞和培养液的阴性对照组,含有不同浓度(10-10,10-9,10-8,10-7mol/L)的D3组,分别处理24,48,72h后,采用MTT法检测各组细胞在490nm波峰处吸光度A值,计算细胞生长抑制率;FCM检测10-7mol/LD3处理细胞48h后细胞周期的改变。结果:24和48h10-8和10-7mol/LD3组A值均较对照组下降(P<0.01),72h各处理组和对照组差异无统计学意义。10-7mol/LD348h后,G1和S期细胞数占总细胞数百分比分别为(65.3±2.4)%和(30.0±1.4)%,与对照组[(57.4±1.5)%和(39.0+1.4)%]相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论:1,25-(OH)2D3在10-7和10-8mol/L对细胞增殖具有抑制作用,使hLEC部分阻滞于细胞周期的G1期。

老年性白内障患者晶状体上皮细胞CNN3、YAP表达与晶状体上皮细胞凋亡的相关性研究

目的 探讨老年性白内障患者晶状体上皮细胞中钙调节蛋白3(CNN3)、Yes相关蛋白(YAP)信使核糖核酸(mRNA)和蛋白表达水平与晶状体上皮细胞凋亡的关系。方法 选择2019年2月至2021年9月该院收治的67例白内障患者作为老年性白内障组,另选取同期于该院进行角膜移植术并排除白内障的42例患者作为对照组。手术获得患者晶状体前囊膜(晶状体前囊膜主要由上皮细胞构成),检测晶状体上皮细胞中CNN3、YAP mRNA和蛋白表达水平及晶状体上皮细胞凋亡率,分析老年性白内障患者晶状体上皮细胞中CNN3 mRNA与YAP mRNA表达水平的相关性及CNN3 mRNA、YAP mRNA与细胞凋亡率的相关性。结果 与对照组比较,老年性白内障组晶状体上皮细胞中CNN3 mRNA和蛋白表达水平升高,YAP mRNA和蛋白表达水平降低(P<0.05);老年性白内障患者晶状体上皮细胞中CNN3 mRNA与YAP mRNA表达水平呈负相关(P<0.05);老年性白内障组晶状体上皮细胞凋亡率高于对照组(P<0.05);老年性白内障患者晶状体上皮细胞中CNN3 mRNA表达水平与晶状体上皮细胞凋亡率呈正相关(P<0.05),YAP mRNA表达水平与晶状体上皮细胞凋亡率呈负相关(P<0.05)。结论 老年性白内障患者晶状体上皮细胞中CNN3呈高表达、YAP呈低表达,二者与晶状体上皮细胞凋亡率有关,可能参与老年性白内障疾病的发生。

芸香苷通过PI3K/AKT信号通路抑制H_2O_2诱导人晶状体上皮细胞凋亡

目的探讨PI3K/AKT信号通路是否参与芸香苷对过氧化氢(H2O2)诱导人晶状体上皮细胞(HLEC)凋亡的抑制作用。方法将培养的HLEC分为4组:空白对照组、H2O2组、芸香苷组、LY294002组;采用MTT法测细胞存活率,Western blot法检测p-AKT及AKT的表达,Annexin VFITC/PI双染流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果H2O2可诱导HLEC发生凋亡,与H2O2组相比,芸香苷组不仅使AKT的磷酸化水平显著升高,还降低了细胞凋亡率(P<0.01);在LY294002干预组,PI3K/AKT信号通路的特异性阻断剂LY294002明显抑制了芸香苷组中各项指标的变化,差异有统计学意义(P<0.01),但与H2O2组比较,差异无统计学意义。结论芸香苷抑制H2O2诱导的HLEC凋亡可能与PI3K/AKT信号通路有关。

基质金属蛋白酶3在晶状体上皮细胞中的表达及其意义

背景后发性白内障是现代白内障囊外摘出术后导致视力下降的常见并发症。基质金属蛋白酶（MMPs）是参与降解除多糖以外全部细胞外基质（ECM）的重要蛋白酶，探讨MMP-3对后发性白内障的基因治疗一直是研究热点，而纤连蛋白（FN）是MMP-3的主要降解底物，能间接反映MMP-3的表达情况。目的构建pEGFP—N1-MMP-3真核重组质粒并转染晶状体上皮细胞（LECs），观察MMP-3在LECs中的表达，探讨后发性白内障基因治疗的可能性。方法取6只新鲜猪晶状体，将囊膜用组织块法进行原代培养，获得LECs。用E．coli DH5α MMP-3和E．coli DH5α pEGFP—N1质粒构建MMP-3的真核表达重组质粒pEGFP—N1-MMP-3，通过双酶切，DNA测序分析鉴定人MMP-3片段的准确性。将构建的pEGFP—N1-MMP-3转染至猪LECs中，通过绿色荧光蛋白（GFP）间接观察MMP-3在猪LECs中的表达，用Westernb lot法检测pEGFP—N1-MMP-3真核重组质粒转染后LECs表达产物FN的相对表达量，间接评估MMP-3的表达量。结果双酶切鉴定结果符合质粒pEGFP—N1及目的片段MMP-3大小。软件分析测序结果表明，重组质粒pEGFP—N1-MMP-3中的MMP-3基因与GenBank中的人MMP基因序列相似性达99．6％，表示目的片段已正确插入pEGFP—N1载体。原代培养猪LECs，将重组质粒pEGFP—N1-MMP-3转染人猪LECs，荧光显微镜下可见明显的GFP绿色荧光。Western blot检测表明，FN在pEGFP—N1-MMP-3真核重组质粒转染组的表达量为0．666±0．008，空质粒转染组FN的表达量为0．326±0．071，差异有统计学意义（P=0．000）。结论成功构建了pEGFP—N1-MMP-3质粒，并能够在猪LECs中表达，为进一步研究该蛋白在LECs中的表达与功能奠定了基础。