早期矽肺损伤的蛋白质组学研究及α晶状体球蛋白B的表达与验证

目的:建立二氧化硅诱导早期肺损伤大鼠肺组织的二维凝胶电泳图谱,筛选在此过程中起关键作用的靶蛋白分子并进行验证。方法:制作二氧化硅诱导大鼠早期肺损伤模型(实验组),通过HE染色观察肺部形态变化,用双向凝胶电泳法建立二维凝胶图谱,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定差异表达蛋白分子,用Western印迹验证差异表达蛋白分子在肺组织中的表达。结果:成功制作二氧化硅早期肺损伤模型,建立实验组及对照组肺组织二维凝胶电泳图谱,二者蛋白表达及分布存在差异,发现差异点40个,选取重复性好,在凝胶上位置和表达适中的共20个进行MALDI-TOF-MS鉴定及数据库搜索并筛选,鉴定出差异蛋白13种,包括α晶状体球蛋白B、间隙蛋白I、肥大细胞蛋白酶等,进一步用Western印迹证实实验组α晶状体球蛋白B表达明显增加,与蛋白质组学结果一致。结论:α晶状体球蛋白B在早期矽肺组织中表达明显升高,提示其可能在矽肺的发生发展中起关键作用。

基于PI3K/AKT通路研究升降通癃方对前列腺增生细胞的影响

目的:研究升降通癃方通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路对前列腺增生细胞增殖和凋亡的影响。方法:培养人前列腺增生细胞(BPH-1),随机分为对照组、升降通癃方低、中、高浓度组、阳性组五组,分别给予各组需要的药物处理24 h后,通过四唑盐比色法(CCK8法)检测药物对BPH-1细胞增殖的影响;用细胞划痕实验测定BPH-1的水平迁移能力;通过流式细胞术(FCM)检测升降通癃方对BPH-1细胞细胞凋亡的影响;通过蛋白质印迹法(Western blot)检测药物对细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、重组人α晶状体球蛋白B(Cryab)蛋白表达的影响。结果:加入升降通癃方后,BPH-1的迁移能力明显受到抑制,升降通癃方高、中、低浓度组比较差异有统计学意义(均P<0.05);FCM检测结果显示,升降通癃方组低、中、高浓度组的细胞凋亡率明显高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。Western blot检测结果显示,升降通癃方处理24 h后,Caspase-3和Bax在BPH-1细胞中表达较高,Bcl-2、PI3K、AKT、Cryab在BPH-1细胞中表达较低,细胞凋亡率升高。结论:升降通癃方能在一定程度上抑制前列腺增生细胞的增殖、迁移并促进其凋亡,其作用机制可能是升降通癃方通过降低Cryab蛋白表达,负性调控PI3K/AKT信号通路而完成的。

遗传性全白甲一家系的CRYGA、CRYGB、CRYGC和CRYGD基因突变分析

目的：分析常染色体显性遗传全白甲病家系的候选基因γ晶状体球蛋白基因（CRYGA、CRYGB、CRYGC和CRYGD）的突变与本病的相关性。方法：对以上4个基因的全部外显子区域及邻近内含子区域进行PCR扩增，其产物进行直接测序，根据测序结果分析此四个基因突变。结果：在CRYGA、CRYGB、CRYGC和CRYGD基因外显子区域及邻近内含子区域内检测到5个多态性位点，未检测到致病的基因突变。结论：CRYGA、CRYGB、CRYGC和CRYGD基因编码区域的变异不是引起此全白甲家系的致病基因突变。

Ca^(2+)与Calpain在白内障形成过程中作用及其机制的研究进展

白内障是一种眼科常见病、多发病,是全球主要的致盲性眼病之一。虽然随着技术的进步,手术治疗白内障已经被广泛应用于临床,然而巨大的经济负担和手术相关的并发症依然是患者选择白内障手术治疗的主要顾虑。因此,白内障防治性药物的探索成为世界眼科专家研究的主要方向。而白内障发病机制及其形成过程是研究白内障药物治疗方法的基础。许多研究发现:在成熟期白内障患者的晶状体中Ca^(2+)浓度成倍增加,过度激活体内多种蛋白水解酶,引起晶状体蛋白质的水解、沉淀。在这些依赖Ca^(2+)激活的蛋白酶中,Calpain是目前研究者最为关注的、被认为与白内障形成密切相关。本文结合近年来国内外对白内障发病机制的研究进展,着重阐述Ca^(2+)依赖的蛋白水解酶—Calpain在白内障形成过程中的作用,以及其相关抑制剂在延缓白内障的发展甚至抑制白内障形成方面的作用机制。