广西人群晶状体蛋白B基因rs762550遗传多态性的检测

目的分析晶状体蛋白B(CRYAB)基因单核苷酸多态性(SNP)位点rs762550的各基因型和等位基因型在广西人群中的分布频率,对比其在不同种族间的分布差异。方法利用聚合酶链反应结合单碱基延伸技术和毛细管电泳方法检测199例广西人CRYAB基因rs762550位点的基因型,采用SPSS 17.0统计软件进行2检验计算,对比CRYAB基因型及等位基因频率男女组间差异。结果 199例广西健康人CRYAB基因rs762550位点的TT、TC、CC 3种基因型的频率分别为5.0%、38.7%和56.3%,等位基因T和C的频率分别为24.4%和75.6%,男女组的基因型和等位基因型差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CRYAB基因SNP位点rs762550基因型和等位基因型在广西人群中的分布频率与其他种族的比较结果可能有助于遗传和疾病等方面的研究。

早期矽肺损伤的蛋白质组学研究及α晶状体球蛋白B的表达与验证

目的:建立二氧化硅诱导早期肺损伤大鼠肺组织的二维凝胶电泳图谱,筛选在此过程中起关键作用的靶蛋白分子并进行验证。方法:制作二氧化硅诱导大鼠早期肺损伤模型(实验组),通过HE染色观察肺部形态变化,用双向凝胶电泳法建立二维凝胶图谱,用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析鉴定差异表达蛋白分子,用Western印迹验证差异表达蛋白分子在肺组织中的表达。结果:成功制作二氧化硅早期肺损伤模型,建立实验组及对照组肺组织二维凝胶电泳图谱,二者蛋白表达及分布存在差异,发现差异点40个,选取重复性好,在凝胶上位置和表达适中的共20个进行MALDI-TOF-MS鉴定及数据库搜索并筛选,鉴定出差异蛋白13种,包括α晶状体球蛋白B、间隙蛋白I、肥大细胞蛋白酶等,进一步用Western印迹证实实验组α晶状体球蛋白B表达明显增加,与蛋白质组学结果一致。结论:α晶状体球蛋白B在早期矽肺组织中表达明显升高,提示其可能在矽肺的发生发展中起关键作用。

晶状体蛋白αB对卵巢癌细胞恶性行为的影响

目的研究晶状体蛋白αB(αB-crystallin)在卵巢癌组织中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖及迁移侵袭能力的影响。方法免疫组织化学法检测人正常卵巢组织和上皮性卵巢癌组织中αB-crystallin表达;针对蛋白αB-crystallin的基因(CRYAB基因)设计合成靶向小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)重组慢病毒,并感染人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3;流式细胞仪、平板克隆、MTT检测细胞凋亡和增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果αB-crystallin在卵巢癌组织中表达高于正常卵巢组织,在Ⅱ型卵巢癌组织中呈明显高表达(P<0.01),稳转CRYAB si RNA慢病毒后SKOV3细胞内αB-crystallin蛋白表达降低64%,其凋亡和增殖无明显改变,但SKOV3细胞迁移和侵袭能力明显受到抑制(P<0.01),同时蛋白MMP-2和MMP-9表达下调(P<0.01)。结论αB-crystallin能够影响卵巢癌SKOV3细胞浸润转移,其在Ⅱ型卵巢癌组织中的高表达可能与其高侵袭潜能相关。

αB晶状体蛋白在晶状体外的研究概况

αB晶状体蛋白是脊椎动物眼晶状体中的主要蛋白成分之一,在机体各种组织中都有广泛表达,它是小分子热休克蛋白家族成员之一,具有分子伴侣活性,能抑制多种环境变化下的细胞凋亡,同时与某些肿瘤的发生发展及肿瘤治疗中的抗药性都有密切关系,作者就此对近年来的相关研究作一概述。

βB2晶状体蛋白在晶状体内外功能的研究进展

βB2晶状体蛋白是β族晶状体蛋白中含量最高的一类,主要高表达于晶状体内,其正常结构及其水溶性成分水平对维持晶状体的高折射系数和透明至关重要。新近研究发现,βB2晶状体蛋白不仅仅表达于晶状体内,在晶状体外组织如睾丸、脑、视网膜等也存在较高水平的表达,并对这些组织或细胞的某些相关功能有一定影响。

βB_2晶状体蛋白与白内障

βB_2晶状体蛋白是β族晶状体蛋白中含量最多的一种,在维持晶状体的透明性和屈光性中起着重要作用。βB_2晶状体蛋白异常可能与多种类型白内障的形成有关。近年来,CRYBB_2基因突变所致白内障的机制成为研究的热点。本文将对βB_2晶状体蛋白的结构、功能、相关突变、与各类型白内障关系做一综述。

CRYAB在前列腺癌中抗肿瘤作用研究

目的:探讨晶状体蛋白αB(CRYAB)与前列腺癌预后的关系以及潜在的作用机制。方法:使用R软件进行生物信息学分析,包括基因差异表达和临床相关性分析、绘制受试者工作特征(ROC)曲线和Kaplan-Meier(KM)曲线。使用RT-qPCR检测基因表达,采用Western印迹进行蛋白质表达量验证。采用CCK8试验、TUNEL试验、Transwell迁移和侵袭试验检测前列腺癌细胞的增殖、凋亡和转移能力。结果:从TCGA数据库和GEO数据库结果显示,与正常组织相比,前列腺癌组织中的CRYAB mRNA表达下调(P<0.05);与RWPE1细胞相比,CRYAB mRNA和蛋白质在前列腺癌细胞中表达下调(P均<0.05)。细胞功能实验表明,上调的CRYAB可以抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,促进凋亡(P均<0.05),并且CRYAB过表达细胞系中CDH1表达升高,CDH2表达降低。此外,CRYAB mRNA表达与Gleason评分相关(P<0.01)。ROC曲线下的面积为0.914,KM曲线表明,CRYAB对进展无疾病进展生存期(P=0.008)及疾病特异生存期(P=0.032)具有预后价值。结论:CRYAB在前列腺癌组织中表达下调,并与前列腺癌细胞的抗肿瘤功能相关,这可能通过调节上皮间充质转换分子影响前列腺癌细胞转移能力,CRYAB mRNA在前列腺癌中具有重要的诊断和预后价值。

一中国家系常染色体显性遗传性后极性白内障CRYAB基因突变分析

背景 约50％的先天性白内障与遗传因素有关,最常见的遗传方式是常染色体显性遗传（AD）.迄今为止,已证实AD性先天性白内障（ADCC）相关的候选基因位点39个及相关基因26个,确定先天性白内障的致病基因及突变位点是治疗的前提.目的 对1个3代AD性后极性白内障中国家系的致病基因进行分析,确定其发病的遗传学基础.方法 于2009年6-12月由山西省眼科医院收集1个中国汉族ADCC家系,家系的19名成员中共8例后极性白内障,11名表型正常.在获得所有受试者的知情同意后,对该家系成员进行临床检查,采集家系所有成员外周静脉血各8 ml并提取DNA.对微卫星标志物进行PCR扩增及其等位基因的检测,并在染色体1 q21-25、1p22.3、2q33-36、11 q22.1-23.21、7q11-12、21q22.3、22q11.2-12.1的区段内分别选取21个多态性微卫星标志物进行连锁分析,计算对数优势（LOD）值;对可能致病的候选基因外显子进行扩增和测序验证突变基因;对新发现的突变用PolyPhen2软件进行突变致病性预测,预测范围值按渐增的风险程度定为0～1.结果 该家系3代中各代均有后极性白内障患者,共8例,各代患者中男女发病机会均等,符合AD发病特征.连锁分析结果显示,在微卫星标志物D11S3178处最大LOD值为4.06（θ=0）.单体型分析表明,该致病基因位于D11S4176 ～ D11S908区域内.对编码区的测序结果表明,CRYAB基因的第2个外显子有1个错义突变（c.209T＞C）,导致其编码的晶状体蛋白第70位的亮氨酸被脯氨酸替代（p.Leu 70 Pro）.PolyPhen2软件分析测试结果表明,该新突变引起所编码的蛋白质结构和功能的损害预测分值为0.996.结论 CRYAB基因为该家系中遗传性先天性后极性白内障的致病基因.

晶状体蛋白αb在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨晶状体蛋白αb(Cryab)在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法收集兰州大学第一医院早复发和晚复发的结直肠癌标本10对,用RT-PCR法检测Cryab m RNA在早复发和晚复发患者中的表达差异;另收集兰州大学第一医院本部及东岗院区2005年1月至2008年12月期间100例行根治性手术切除患者的结直肠癌组织及其相应的癌旁组织,用免疫组织化学SP法检测100例结直肠癌组织和癌旁组织中Cryab蛋白的表达,并分析Cryab蛋白表达与结直肠癌患者的年龄、性别、肿瘤数目、肿瘤大小、TNM分期、分化程度、淋巴结转移及浸润深度的关系。使用Cox回归方法分析Cryab蛋白表达对结直肠癌患者预后的影响。结果 1 Cryab m RNA在早复发患者中的表达明显高于晚复发患者(P<0.05)。2 Cryab蛋白在结直肠癌组织中的表达明显高于其在癌旁组织中的表达(P<0.001)。3 Cryab蛋白表达与结直肠癌患者的肿瘤大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05),而与患者的性别、年龄及肿瘤数目无关(P>0.05)。4单因素分析结果显示,肿瘤大小、淋巴结转移及Cryab蛋白表达是结直肠癌患者总生存时间和无瘤生存时间的影响因素(P<0.05);进一步的Cox回归分析结果显示,淋巴结转移及Cryab蛋白表达是影响结直肠癌患者预后的独立危险因素。5 Cryab蛋白高表达患者的总生存率及无瘤生存率均明显低于Cryab蛋白低表达患者,差异有统计学意义(P=0.003,P=0.005)。结论 Cryab蛋白的高表达与结直肠癌的侵袭和发展有关,其可能参与了结直肠癌的演进,Cryab可能作为判断结直肠癌恶性程度和预后的指标。

βB2晶状体蛋白对小鼠卵巢发育及动情周期的影响

目的:初步探讨βB2晶状体蛋白(Crybb2)参与调节生殖过程的作用机制。方法:选取11-13周龄βB2基因敲除(KO组,n=19)与野生型C57BL/C(WT组,n=23)雌性小鼠,阴道涂片观察动情周期变化;HE染色观察卵巢病理变化;光学显微镜下计数卵巢最大切面原始卵泡、初级卵泡、闭锁卵泡;Western blotting和免疫组织化学确定βB2晶状体蛋白在卵巢组织中的表达与定位。结果:βB2晶状体蛋白主要表达在WT组小鼠卵巢颗粒细胞内。与WT组小鼠相比,KO组小鼠卵巢相对重量减轻,动情周期紊乱,原始卵泡、初级卵泡减少,闭锁卵泡增多。结论:βB2基因敲除小鼠的动情周期及卵巢发育异常,βB2晶状体蛋白对小鼠卵巢的发育有重要影响。

多发性硬化、视神经脊髓炎及临床孤立综合征患者脑脊液αB晶状体蛋白表达

目的探讨αB晶状体蛋白在多发性硬化（MS）、视神经脊髓炎（NMO）、临床孤立综合征（CIS）患者脑脊液中的表达，及其与MS临床分型的关系。方法对58例MS、NMO、CIS患者及21例对照组进行研究，MS分为传统MS（CMS）与视神经脊髓型MS（OSMS）。Western—blot法检测患者及对照组脑脊液αB晶状体蛋白。结果6例NMO、29例MS、23例CIS患者及21例对照组中，除2例CIS患者及1例对照组外，均可检测到分子量接近22Kda的条带，各组条带灰度强弱无显著差异，OSMS与CMS患者之间条带灰度强弱也无显著差异，各组间αB晶状体蛋白出现率的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论αB晶状体蛋白在NMO、MS、CIS患者及对照组脑脊液中均存在，各组含量无显著差异，与MS临床分型无明显关系，αB晶状体蛋白在MS及NMO中的致病作用有待进一步证实。

不同预处理后缺血再灌注损伤大鼠心肌αB晶状体蛋白的变化

目的研究3种不同预处理对在体大鼠缺血再灌注心肌的保护作用及αB晶状体蛋白在不同预处理心肌细胞缺血再灌注损伤中的变化。方法24只SD大鼠按完全随机法分成4组，每组6只，分别为缺血再灌注组、缺血预处理组、腺苷预处理组、远程预处理组。建立大鼠在体缺血再灌注损伤模型，观察各组缺血再灌注前后心功能变化，并检测再灌注末血清肌钙蛋白T（cTnT）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）的变化以及心肌组织αB晶状体蛋白的表达。结果心肌缺血再灌注120min后，与缺血再灌注组比较，其余3组左心室室内压最大上升和下降速率（＋dp／dtmax）均明显升高（均P〈0．05）.缺血预处理组、腺苷预处理组、远程预处理组血清cTnT含量均低于缺血再灌注组[（12．898±2．887）、（5．049±4．387）、（7．049±4．387）／xg／L比（22．902±3．146）ug／L，均P〈0．05]；MDA含量也均低于缺咀再灌注组[（10．648±3．635）、（11．736±8．903）、（9．834±6．128）umol／L比（16．083±10．423）umol／L，均P〈0．05]；SOD含量均高于缺血再灌注组[（82．808±22．407）、（162．266±54．128）、（102．266±34．134）U／ml比（76．757±39．446）U／ml，均P〈0．05]。腺苷预处理组SOD含量高于缺血预处理组和远程预处理组；cTnT含量则低于缺血预处理组（均P〈0．05）。与缺血再灌注组比较，其余3组αB晶状体蛋白表达均显著增高（均P〈0．05）。结论腺苷预处理、远程预处理均可以模拟缺血预处理的心肌保护作用。3种预处理可能通过上调αB品状体蛋白表达从而减轻在体大鼠心肌缺血再灌注损伤。

乳腺癌中α-晶状体B链蛋白表达的临床病理研究

目的:探讨α-晶状体蛋白B链(Alpha-crystallin B chain,CRYAB)在乳腺癌中表达的临床病理学意义。方法:收集乳腺癌病例及相应的临床资料包括随访资料,应用IHC染色方法检测CRYAB在乳腺良性病变(BBD)、无淋巴结转移乳腺癌(NMBC)、有淋巴结转移乳腺癌(MBC)及配对淋巴结转移灶(PMLN)中的表达,分析CRYAB表达与乳腺癌临床病理指标(患者年龄、肿块大小、淋巴结转移情况、临床分期、组织学分型和分级、雌孕激素受体和c-cerb B2表达情况、绝经情况)间及生存状态的关系。结果:CRYAB在对照组BBD组、NMBC组、MBC组、PMLN组的阳性表达率分别为97.9%(46/47)、44.6%(37/83)、13.1%(14/107)、10.8%(11/107),其中BBD组和NMBC组,BBD组、NMBC组分别与MBC组、PMLN组均存在显著性差异。CRYAB表达与淋巴结转移(P<0.001)、临床分期(P=0.001)、组织学分级(P=0.037)和雌孕激素受体表达情况(P<0.001)有显著相关,无淋巴结转移组的阳性表达率显著高于有淋巴结转移组,临床晚期的阳性表达率低于临床早期,雌孕激素受体阳性病例的阳性表达率显著低于雌孕激素受体阴性病例。生存分析结果显示CRYAB阳性表达的患者生存期比CRYAB阴性表达的患者生存期更长(p=0.037)。结论:CRYAB与乳腺癌的转移、临床分期、生存状态、雌孕激素受体表达有关。

基于PI3K/AKT通路研究升降通癃方对前列腺增生细胞的影响

目的:研究升降通癃方通过调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路对前列腺增生细胞增殖和凋亡的影响。方法:培养人前列腺增生细胞(BPH-1),随机分为对照组、升降通癃方低、中、高浓度组、阳性组五组,分别给予各组需要的药物处理24 h后,通过四唑盐比色法(CCK8法)检测药物对BPH-1细胞增殖的影响;用细胞划痕实验测定BPH-1的水平迁移能力;通过流式细胞术(FCM)检测升降通癃方对BPH-1细胞细胞凋亡的影响;通过蛋白质印迹法(Western blot)检测药物对细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氧酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)、重组人α晶状体球蛋白B(Cryab)蛋白表达的影响。结果:加入升降通癃方后,BPH-1的迁移能力明显受到抑制,升降通癃方高、中、低浓度组比较差异有统计学意义(均P<0.05);FCM检测结果显示,升降通癃方组低、中、高浓度组的细胞凋亡率明显高于对照组,差异具有统计学意义(均P<0.05)。Western blot检测结果显示,升降通癃方处理24 h后,Caspase-3和Bax在BPH-1细胞中表达较高,Bcl-2、PI3K、AKT、Cryab在BPH-1细胞中表达较低,细胞凋亡率升高。结论:升降通癃方能在一定程度上抑制前列腺增生细胞的增殖、迁移并促进其凋亡,其作用机制可能是升降通癃方通过降低Cryab蛋白表达,负性调控PI3K/AKT信号通路而完成的。