油茶暹罗刺盘孢菌群体遗传结构分析

暹罗刺盘孢菌是油茶炭疽病病原之一,在我国多个油茶产区均有分布。研究油茶暹罗刺盘孢菌群体遗传结构可为全面、有效防治油茶炭疽病害提供理论依据。本研究对分离自海南、江西、湖南、广西4省(自治区)6个地区暹罗刺盘孢菌菌株的ITS、CAL和GAPDH 3个基因的序列进行群体遗传结构分析。根据拼接的上述3个基因的序列,57个暹罗刺盘孢菌菌株可定义为13个单倍型,其中单倍型H7为主要单倍型,分布于本研究所涉及的所有地区。病菌不同地理种群间的遗传分化较大,AMOVA分析显示,遗传变异主要发生在种群内,病菌未经历过大规模的种群扩张。研究结果表明油茶炭疽病原暹罗刺盘孢菌种群具有丰富的遗传多样性。

海南橡胶树暹罗刺盘孢菌群体遗传结构分析

暹罗刺盘孢菌Colletotrichum siamense是引起海南橡胶树炭疽病的重要病原之一,为了明确海南橡胶树暹罗刺盘孢菌群体的遗传结构,本研究对海南5个市(县)的橡胶树暹罗刺盘孢菌的ITS序列进行分析。结果表明,58个病菌样品可推导出11种单倍型,其中单倍型H11包含样品数最多且在5个市(县)均有分布,其次为单倍型H4,在4个市(县)有分布。遗传分化指数(Fst)表明保亭种群与其他种群的遗传分化较大。AMOVA分析显示,遗传变异主要发生在种群内,占总变异的93.9%。对所有地理种群病原菌ITS序列的核苷酸不配对进行分析,表明病菌未经历过大规模的种群扩张。系统发育分析表明,来自相同地区的病菌单倍型并没有聚在一起。研究结果表明海南橡胶树暹罗刺盘孢菌种群具有丰富的遗传多样性。

甜柿炭疽病病原种类及生物学特性比较

【目的】明确浙江金华太秋甜柿果实炭疽病主要病原种类,探究不同病原菌生物学特性的差异,为甜柿炭疽病防治提供科学依据。【方法】2021年6—10月,通过对浙江金华永康太秋甜柿生长期果实炭疽病病样的采集和分离,致病性测定和系统发育分析,确定其主要病原菌种类;通过对不同甜柿炭疽病病原菌在不同温度、pH值、培养基类型、光照等培养条件和致死温度的测定,揭示不同种之间的差异。【结果】3种甜柿炭疽病菌(Colletotrichum horii、C. siamense和C. fructicola)为浙江金华太秋甜柿果实炭疽病主要病原菌,其中暹罗刺盘孢引起太秋甜柿炭疽病为国内首次报道。生物学特性研究表明,果生刺盘孢、哈锐炭疽菌和暹罗刺盘孢最适生长温度为30℃,最适产孢温度为35℃,哈锐炭疽菌最适产孢温度为25℃;果生刺盘孢和暹罗刺盘孢菌丝生长最佳培养基为PDA、CMA和GA,果生刺盘孢产孢最佳培养基为胡萝卜煎汁培养基,暹罗刺盘孢产孢最佳培养基为CMA培养基;哈锐炭疽菌菌丝生长最佳培养基为PDA和CA,产孢最佳培养基为OA培养基。pH值4~10均适宜甜柿炭疽病菌菌丝生长,果生刺盘孢在pH值5和9时产孢最佳,暹罗刺盘孢和哈锐炭疽菌在pH值9和10时产孢最佳;光照对太秋甜柿炭疽病菌菌丝生长无影响,但对不同的炭疽病菌的产孢影响较大,持续光照有利于果生刺盘孢产孢,光照黑暗交替可刺激哈锐炭疽菌产孢,光照对暹罗刺盘孢的产孢影响不大;果生刺盘孢分生孢子的致死温度为47.9℃10 min,哈锐炭疽菌和暹罗刺盘孢分生孢子的致死温度为49.2℃10 min。【结论】首次研究明确3种甜柿炭疽病病原菌的生物学特性差异。

聊红椿炭疽病病原菌的分离鉴定

炭疽病是为害聊红椿的重要病害,为鉴别聊红椿叶部病害炭疽病的病原菌,本研究首先进行病原菌的分离纯化,然后采用形态观察、rDNA-ITS测序比对,并结合柯赫氏法则,对其病原菌进行了鉴定。经病原菌的分离和形态学观察初步确定菌株A2为刺盘孢属(Colletotrichum)真菌;经致病性鉴定,分离得到的病原菌接种后引起的病害特征和聊红椿炭疽病病害特征一致;进一步利用引物ITS4/ITS5对提取的DNA进行PCR扩增,可以扩出600 bp的病原菌DNA片段,经过测序和同源性分析发现病原菌的rDNA-ITS序列与暹罗刺盘孢(Colletotrichum siamense)同源性达到100%。综合形态学、rDNA-ITS分子序列同源性和致病性测定结果,将分离到的病原菌鉴定为暹罗刺盘孢。

中国滇南地区莲雾炭疽病病原菌的形态学和分子生物学鉴定

莲雾炭疽病是国内外莲雾种植区的常年流行病及引起严重经济损失的一种重要真菌病害,但不同地区的病原菌种可能不同.该研究主要描述云南省南部发生的莲雾炭疽病症状,分离纯化病原菌并鉴定其种类.经观察,此莲雾炭疽病的典型病斑为椭圆或不规则形,中央区灰白色,周围褐色,最外围有一黄色晕圈;后期病斑扩展形成不规则大斑或枯斑;病害侵染果实引起腐烂变质.通过分离培养和纯化获得7个真菌菌株,柯赫氏致病性试验表明从西双版纳和普洱两地样品中获得的LWTJ2和LB4为致病菌株.两菌株形态特征相同,在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)上的菌落为圆形,白色或淡黄白色,边缘光滑齐整,表面呈绒毛状,气生菌丝发达;后期菌落颜色稍加深,中央区灰黑色并产生大量蛋橙色分生孢子团;在显微镜下观察,病菌菌丝透明,分隔,呈锐角或近直角分枝;分生孢子无色,长椭圆形,两端盾圆,大小为9.8~18.0(平均13.9±2.1)μm×4.5~6.0(平均5.5±1.0)μm;未观察到病菌的有性型.采用ITS1/ITS4通用引物通过PCR扩增获得两菌株的rDNA-ITS序列均为545 bp(GenBank登录号为OL963924和OL413460).Blast-n比对和系统演化树分析表明,两个菌株Blast-n相似度及在演化树上聚集于同一末端分枝的置信限均为100%;两者与暹罗刺盘孢Collectotrichum siamense WZ-365菌株(Acc.No.MN856443)对比的相似度为99.08%,在系统演化树中与暹罗刺盘孢聚于同一末端分枝的置信限为96%.该研究较详细地观察记载了滇南地区莲雾炭疽病的症状及病原菌的形态特征,根据形态学与rDNA-ITS序列的Blast-n对比和演化树分析鉴定获得的LWTJ2和LB4菌株均属于暹罗刺盘孢C.siamense.这是莲雾炭疽病的一种新病原真菌,其进一步证明了莲雾炭疽病病原菌的多样性,也为该病害的诊断监测和有效控制提供了科学依据.

百日草炭疽病病原菌的分离鉴定及防治药剂筛选

为明确百日草炭疽病的病原菌,依据柯赫氏法则,对采集的病叶进行病原物分离并进行分离菌株致病性试验。确定菌株的致病性后,结合菌落形态,初步判断其为炭疽菌。运用分子生物学方法,扩增获得肌动蛋白基因(actin gene, ACT)、几丁质合酶基因(chitin synthase A gene, CHS)、磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH)、核糖体内部转录间隔区(ribosomal internal transcribed spacer, ITS)、锰超氧化物歧化酶(manganesesuperoxide dismutase, SOD2)、谷氨酰胺合酶(glutamine synthatase, GS)、微管蛋白(beta-tubulin-TUB2)以及钙调蛋白(calmodulin, CaM) 8个基因序列,进行联合系统发育分析,确定该菌为暹罗刺盘孢菌Colletotrichum siamense。离体抑菌活性测定结果表明,9种杀菌剂制剂75%肟菌·戊唑醇水分散粒剂、35%氟菌·戊唑醇悬浮剂、75%百菌清可湿性粉剂、250 g/L嘧菌酯悬浮剂、50%咪鲜胺可湿性粉剂、10%苯醚甲环唑水分散粒剂、10%丙硫菌唑悬浮剂、500 g/L氟啶胺悬浮剂和25%溴菌晴可湿性粉剂对供试病原菌的EC50值分别为0.152、0.407、2.48、252、0.034 2、0.556、317、0.002 91和27.4 mg/L,其中500 g/L氟啶胺悬浮剂和50%咪鲜胺可湿性粉剂抑菌活性最强。

广州市沙田柠檬炭疽病病原菌种类的分子鉴定

【目的】明确沙田柠檬炭疽病的病原菌种类,为沙田柠檬炭疽病的田间防治提供指导。【方法】对采集的炭疽病样本进行分离纯化培养,获得ST2-1、ST2-2、ST2-3、ST3-1、ST3-2、ST3-3、ST4-1、ST4-2和ST4-3等9株沙田柠檬炭疽病病原菌。分别采用针刺和喷洒接种的方法测定上述菌株的致病性,并分别克隆其核糖体内转录间隔区(ITS)、β微管蛋白(TUB2)、钙调蛋白(CAL)、肌动蛋白(ACT)、核糖体大亚基(LSU)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)和几丁质合成酶1(CHS1)基因部分片段进行多基因联合鉴定。【结果】ST2-1、ST2-2、ST2-3、ST3-1、ST3-2、ST3-3、ST4-1、ST4-2和ST4-3均具有较强致病性,其中ST2-1、ST2-2和ST2-3的生物学特征和进化树表明它们属于暹罗刺盘孢菌(Colletotrichum siamense),ST3-1、ST3-2和ST3-3属于兰花刺盘孢菌(Colletotrichum cliviicola),ST4-1、ST4-2和ST4-3属于果生刺盘孢菌(Colletotrichum fructicola)。【结论】综合形态学特征和分子生物学鉴定结果,引起沙田柠檬炭疽病的病原菌有暹罗刺盘孢菌、兰花刺盘孢菌和果生刺盘孢菌,其中暹罗刺盘孢菌仅分离自沙田柠檬发病的果实,兰花刺盘孢菌和果生刺盘孢菌分离自沙田柠檬发病的叶片,其中兰花刺盘孢菌能在柑橘类植物上引起炭疽病为国际上首次报道。

美丽崖豆藤炭疽病病原鉴定及防治药剂的室内毒力测定

【目的】明确引起美丽崖豆藤炭疽病的病原菌种类并筛选其防治药剂。【方法】采用组织分离法对病原菌进行分离、纯化后,利用柯赫氏法则验证其致病性,依据菌株的形态学特征和多基因序列分析确定病原菌种类;采用菌丝生长速率法测定病原菌对生产上常用于炭疽病防治的4种杀菌剂的敏感性。【结果】分离得到的6株菌中有2株菌可侵染美丽崖豆藤叶片引起褐色病斑;结合形态学鉴定和多基因序列分析,确定引起美丽崖豆藤炭疽病的病原菌为暹罗刺盘孢Colletotrichum siamense。该病菌对苯醚甲环唑、咪鲜胺、吡唑醚菌酯和甲基硫菌灵的敏感性均高,抑制中浓度(EC50)均小于0.1 mg/L,其中,以咪鲜胺的防效最佳,EC50为0.015 mg/L。【结论】美丽崖豆藤炭疽病的病原菌为暹罗刺盘孢,苯醚甲环唑、咪鲜胺、吡唑醚菌酯和甲基硫菌灵可作为防治美丽崖豆藤炭疽病的首选药剂。

广西玉林火龙果炭疽病病原菌的分离与鉴定

2020年4月,广西玉林市兴业县太平镇火龙果种植区发生了严重的炭疽病,发病率约为25%,严重影响植株的开花结果。为明确该炭疽病的病原种类,采用组织分离法获得3株菌株,通过致病性、形态学特征和分子生物学特性进行鉴定。致病性测定结果显示,分离菌株均可引起火龙果茎部腐烂,症状与田间病株的相似;菌落呈白色至灰色,分生孢子为单细胞,柱状,附着胞呈椭圆形至不规则形,呈暗褐色,形态特征符合暹罗刺盘孢菌(Colletotrichum siamense)的分类特征。进一步通过核糖体内转录间隔区(internal trnscribed spacer,ITS)、肌动蛋白基因(actin gene,ACT)、几丁质合成酶A基因(chitin synthase A gene,CHS-1)和3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene,GAPDH)多基因序列分析,分离菌株与模式菌株(ICMP 18578 C.siamense)的同源性为100%。因此,广西玉林市兴业县火龙果炭疽病的病原鉴定为暹罗刺盘孢菌(C.siamense)。该菌引起火龙果炭疽病为国内首次报道。