维甲酸联合曲古抑素对甲状腺癌细胞的诱导分化作用

背景与目的:维甲酸诱导甲状腺癌分化的有效率约30%,但其毒副作用限制了临床应用。两种以上诱导剂联合应用于肿瘤的分化,临床已开展了Ⅰ～Ⅲ期试验。但对维甲酸和组蛋白脱乙酰基酶的抑制剂的联合应用,未有报道。本试验初步研究全反式维甲酸(retinoic acid,RA)联合曲古抑素(trichostain A,TSA)诱导人乳头状甲状腺癌细胞株(K1)和人滤泡状甲状腺癌细胞株(FTC-133)的分化,增强诱导作用的效果,同时降低单一药物的毒副作用,为临床前期试验提供理论依据。方法:RA联合TSA,分为4种浓度,分别为1组RA1×10-4mol/L+TSA1.65×10-7mol/L、2组RA1×10-4mol/L+TSA3.31×10-7mol/L、3组RA1×10-5mol/L+TSA1.65×10-7mol/L、4组RA1×10-5mol/L+TSA3.31×10-7mol/L,在3个时间点(12、24、48h)处理两种细胞后,采用苏木精-伊红染色后,观察细胞生长的数量、形态;采用氮蓝四唑盐法(methythiazoly ltetrazolium,MTT)计算细胞生存率(survival rate,SR),研究联合药物对细胞的增殖、抑制和毒性作用;采用电化学发光法测定两种细胞株培养液中,甲状腺球蛋白(thyroglobulin,Tg)的水平,研究联合药物对肿瘤细胞的诱导分化作用。结果:联合药物作用K1和FTC-133后,细胞形态趋于规则,细胞间隔增大,细胞核明显缩小。4种浓度、3个时间点SR的方差分析,K1的F值分别为:23.52、170.14,FTC-133的F值分别为:57.09、224.35(P=0.000,均<0.01),有统计学意义。SNK分析,SR由低到高的排列分别为:2组<1组<4组<3组。4种浓度、3个时间点Tg方差分析,K1的F值分别为:69.63、101.07,FTC-133的F值分别为:79.77、81.72(P=0.000,均<0.01),差异有统计学意义。LSD两两比较:K1和FTC-133的1组与3组比较,P分别为:0.06、0.2,>0.05,两者之间差异无统计学意义,其他组均有统计学意义。结论:低浓度RA联合低浓度TSA,既可以抑制K1和FTC-133增殖,降低药物毒性作用,又可以增强对肿瘤细胞的诱导分化。其可能的机制是,TSA作用于转录步骤的DNA前调节,RA可能作用于转录步骤的信号后续调节,两种作用可能形成增强作用。通过转录后的传导系统,达到了抑制肿瘤细胞增殖和增强诱导分化的作用。

曲古抑素A下调Bcl-2水平经线粒体途径诱导耐顺铂人肺腺癌细胞凋亡

背景与目的以铂类为基础的联合化疗是非小细胞肺癌目前首选的治疗方案,然而由于铂类药物的毒副作用和耐药的发生,限制了铂类药物的广泛应用。曲古抑素A(Trichostatin A,TSA)是一种组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂,能诱导肿瘤细胞生长抑制、分化、凋亡,并可以增强多种肿瘤细胞对铂类药物敏感性。本研究探讨TSA诱导耐顺铂人肺腺癌A549/CDDP细胞株凋亡的作用及机制。方法中性红法测定TSA对A549/CDDP细胞毒性,荧光显微镜观察细胞DNA的变化,流式细胞仪分析细胞周期及线粒体膜电位的变化,分别转染Bcl-2表达质粒过表达Bcl-2和利用siRNA干扰Bcl-2表达。Western blot分析凋亡相关蛋白的变化。结果TSA对A549/CDDP细胞的IC50是(446.59±27.32)nmol/L,随着TSA浓度升高A549/CDDP细胞生长率明显下降。细胞凋亡在浓度为(125-500)nmol/LTSA处理后24h出现。凋亡细胞主要表现为核染色质固缩,荧光染色增强。流式细胞仪检测发现TSA阻断细胞于S期,线粒体膜电位降低。Western blot结果显示,TSA处理细胞后,Bcl-2蛋白水平下降,而Bax表达上调,同时观察到caspase-3被激活。转染Bcl-2表达质粒可以抑制TSA诱导的细胞凋亡,而沉默Bcl-2表达可以增加细胞对TSA的敏感性。结论TSA可能通过线粒体途径诱导A549/CDDP细胞凋亡。

曲古抑素A预处理对大脑中动脉闭塞模型大鼠脑保护作用及其与IL-1β的关系

目的：探讨曲古抑素A（TSA）预处理对大脑中动脉闭塞（MCAO）模型大鼠的脑保护作用及其与IL-1β之间的关系,并评价年龄对TSA预处理所产生大鼠脑保护作用的影响。方法：采用梭性头端线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型,将96只SD青年雄性大鼠（3-4月龄）随机分为缺血再灌注对照组、二甲基亚砜（DMSO）预处理组、小剂量TSA预处理组（0.03 mg/kg）和大剂量TSA预处理组（0.1 mg/kg）,每组包括缺血再灌注6 h组、12 h组、24 h组、48 h组,每组6只大鼠。另将18只SD雄性大鼠分为老年组（22月龄）、青年组（3~4月龄）、幼年组（1月龄）,均采用大剂量TSA预处理。采用方差分析比较不同处理组脑梗死体积比、脑脊液和血液IL-1β含量的差异,Spearman秩相关分析脑梗死体积比与脑脊液、血液IL-1β含量的线性相关。结果：大剂量TSA组大鼠脑梗死体积比在缺血再灌注各时间点均小于其余3组。大剂量TSA组缺血再灌注各时间点脑脊液中IL-1β含量与对照组相应时间点相比明显减少。大剂量TSA组血清中IL-1β含量在缺血再灌注各时间点均低于DMSO组和对照组,小剂量TSA组与DMSO组无差别。脑梗死体积与血液IL-1β、脑脊液IL-1β含量的相关系数分别为0.841和0.618（P〈0.05）。不同年龄组大鼠的脑梗死体积比较差异无统计学意义,但老年组大鼠脑梗死体积大于其余两组。不同年龄组大鼠脑脊液中的IL-1β含量差异无统计学意义（P=0.076）。结论：大剂量TSA预处理可减小脑梗死体积比,并降低脑脊液和血液IL-1β含量;年龄对大剂量TSA预处理大鼠脑梗死体积比、血液和脑脊液IL-1β没有影响。

曲古抑素A激活FAS途径促使A549/CDDP细胞凋亡

目的探讨曲古抑素A(TSA)是否可以诱导FAS的表达,促进人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/CDDP细胞凋亡,揭示TSA诱导A549/CDDP细胞凋亡的可能机制。方法 Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化,间接免疫荧光检测FAS表达,蛋白印迹法检测FAS、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(caspase-8)表达变化。结果 TSA诱导A549/CDDP细胞凋亡,流式细胞仪检出凋亡率由3.9%递增至21.7%。procaspase-8被激活,FAS表达呈浓度和时间依赖性上调。结论 TSA诱导A549/CDDP细胞凋亡可能与死亡受体介导的途径相关。

不同剂量曲古抑素A后处理在脑缺血再灌注损伤中的脑保护作用

目的观察不同剂量组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑素A（trichostatin-A,TSA）对大鼠短暂性大脑中动脉缺血再灌注损伤（Transient Middle cerebral artery occlusion,tMCAO）模型进行缺血后处理的脑保护作用。方法健康雄性SD大鼠随机分为4组：I/R组、TSA组、溶剂对照组（DMSO）和假手术组（Sham）。TSA组分为3个亚组,分别在大脑中动脉栓塞成功后立即尾静脉注射不同剂量的TSA：TSA1组——注射TSA 0.03mg/kg;TSA2组——注射TSA 0.1 mg/kg;TSA3组——注射TSA 0.3 mg/kg。分别于再灌注后6 h和24 h进行神经功能缺陷评分,之后处死取材,行TTC染色测量脑梗死容积。结果与sham组相比较,TSA组和I/R组均出现程度不同的神经生物学缺陷,神经功能缺陷评分在2~5分之间,sham组无神经功能缺陷。与I/R组相比较,TSA 0.3 mg/kg组无明显改善大鼠的神经功能缺损评分,与I/R组差异无显著性。TSA 0.03 mg/kg和0.1mg/kg组均可以降低神经功能缺陷评分,显著减少脑梗死容积,TSA 0.03 mg/kg和0.1 mg/kg组较I/R组分别减少脑梗死容积43.5%和42.8%。TSA 0.03 mg/kg组和0.1 mg/kg组相比较差异无显著性。结论对tMCAO大鼠缺血后单次静脉注射0.03 mg/kg和0.1 mg/kg的去乙酰化酶抑制剂TSA可以减少脑梗死容积,改善神经生物学功能。而注射0.3 mg/kg的TSA却无显著的脑保护作用。

利用转录组初步探索曲古抑素A延缓香菇菌丝转色机制

组蛋白去乙酰化是最重要的表观遗传修饰之一,在发育中起着多种作用,但组蛋白去乙酰化在香菇中的详细功能和机制尚不清楚。本研究使用广泛的去乙酰化抑制剂(HDACi)曲古抑素A(TSA)来确定组蛋白去乙酰化对香菇发育过程的作用。通过香菇菌包的培养,观察到外源性应用TSA能够抑制香菇后熟转色的进程。随后,我们进行了转录组学分析以揭示潜在的机制。数据显示,TSA处理产生393个差异表达基因,这些基因主要富集于次生代谢物的生物合成、内质网中的蛋白质加工、不同环境中的微生物代谢等途径。通过分析TSA处理和对照组的基因表达差异,发现TSA可能通过影响组蛋白乙酰化水平直接或间接影响细胞色素P450、漆酶,糖蛋白家族等相关基因,从而影响香菇菌丝转色。为认识组蛋白去乙酰化对香菇后熟转色发育的影响提供依据,进一步为香菇工厂化生产缩短周期提供一定的借鉴作用。

维甲酸联合曲古抑素诱导及治疗荷人甲状腺滤泡状癌裸鼠的实验研究

目的探讨全反式维甲酸（ATRA）和曲古抑素（TSA）对人甲状腺滤泡状癌细胞株（FTC-133）和荷人甲状腺滤泡状癌裸鼠（NMB—hFTC）肿瘤模型摄碘能力的影响。方法不同量ATRA、TSA诱导VFC-133细胞：ARTA 1．0×10^-6mo／L（A低组）、1．0×10^-4mol／L（A高组）、TSA1．65×10^-7mol／L（T组）、A低＋T组、A高＋T组和无水乙醇（对照组），96h后行HE染色，测定FTC-133细胞摄碘率；制备NMB—hFTC，成瘤后分组：ATRA组（2mg／kg灌胃）、TSA组（10mg／kg腹腔注射）、联合组（ATRA＋TSA，用量同前）、对照组（生理盐水灌胃＋腹腔注射，均为10ml／kg），剂量均按鼠体质量给予。给药22d后，腹腔注射37MBq ^131I，分别于注射后4，6，12和24h行γ显像，测定体内生物分布；显像后取肿瘤组织行HE染色观察细胞形态。实验结果采用SPSS13．0软件进行单因素方差分析。结果FTC-133细胞摄碘率A低＋T组、A高＋T组分别为（23885±616．0）和（13849±728．2）计数·min^-1·10^-6细胞，其他各组在（985±84．2）～（17600±782．7）计数·min^-1·10^-6细胞范围内，各组间比较差异有统计学意义（F=600．879，P〈0．001）。^131I注射后6，12和24h联合组裸鼠种植瘤％ID／g分别为6．17±0．46，9．34±0．61，11．19±0．98，其余各组保持在（1．97±0．34）～（5．14±0．65）之间；肿瘤质量各组间比较差异有统计学意义（F=3．723，P〈0．05）。结论ATRA联合TSA，可增强FTC-133细胞和NMB—hFTC病灶的分化、摄碘能力，达到增强^131I杀死甲状腺癌病灶的协同作用。

曲古抑素A对耐顺铂人肺腺癌细胞株凋亡影响及其机制的探讨

目的:探讨曲古抑素A(TSA)诱导耐顺铂(DDP)人肺腺癌A549/DDP细胞株凋亡的作用及机制。方法:荧光染色检测细胞凋亡,蛋白质印迹法分析cFLIP、Caspase-8、Caspase-3和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白表达的变化,同时比色法测定Caspase-8活性。结果:曲古抑素A能诱导凋亡A549/DDP细胞株凋亡,随着浓度增加,其凋亡率逐渐增加。蛋白质印迹法结果显示,TSA处理细胞后,cFLIP蛋白水平下降,Pro-caspase-8减少,提示该酶被激活,促使Bid蛋白切割。Procaspase-3减少,提示酶被激活。PARP蛋白减少,切割的条带逐渐增加,提示PARP活性增加,促进细胞凋亡。比色法结果显示TSA对Caspase-8活性和cFLIP的影响具有浓度和时间依赖性。结论:TSA可以通过降低cFLIP水平激活Caspase-8诱导A549/DDP细胞凋亡。

曲古抑素A通过JAK/STAT信号通路对脑缺血-再灌注损伤的影响

目的 研究曲古抑素A （trichostatin-A,TSA）是否可以作用于JAK激酶/信号转导和转录激活因子（Janus kinase/Signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT）信号通路对大鼠的脑缺血-再灌注损伤的影响.方法 36只健康雄性SD大鼠随机（随机数字法）分成3组（n=12）：假手术组、缺血-再灌注（ischemia/reperfusion,I/R）组、TSA处理组,采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,其中假手术组不进行线栓栓塞,TSA组栓塞前20min通过阴茎静脉注射TSA 0.05 mg/kg.3组制模成功后再灌注24 h,按照Longa 5分法进行大鼠神经功能缺损评定,脑切片TTC染色,ipp 6.0软件计算脑梗死体积百分比；每组随机取6只（n=6） Elisa检测JAK2蛋白的表达,其余6只（n=6）用于检测p-JAK2蛋白的表达.使用方差分析及非参数分析统计所得数据.结果 3组均有少量JAK2表达,组间差异无统计学意义（P=0.266）；与I/R组相比,TSA处理组神经学损伤评分降低（P =0.019）,脑梗死体积缩小（P＜0.01）,p-JAK2表达减少（P =0.009）,组间差异有统计学意义.结论 TSA可一定程度地减轻脑缺血-再灌注损伤,发挥脑保护作用,这可能与TSA抑制p-JAK2介导的JAK/STAT信号通路有关.

p21在曲古菌抑素A诱导人肝癌细胞Hep3B uc002mbe.2表达中的作用

目的探讨p21在曲古菌抑素A(TSA)诱导肝癌细胞内uc002mbe.2表达中的作用。方法通过Western blot和q PCR检测TSA处理肝癌细胞Hep3B后p21蛋白与uc002mbe.2表达变化的关系,并进一步利用RNA干扰技术敲低肝癌细胞p21的表达,利用实时荧光定量PCR分别检测单干扰p21和干扰p21联合TSA处理后Hep3B细胞uc002mbe.2表达的变化。结果干扰p21表达,对Hep3B细胞uc002mbe.2表达无明显影响,但能显著降低TSA诱导的Hep3B细胞uc002mbe.2的表达(P<0.05)。结论 p21在TSA诱导肝癌细胞uc002mbe.2表达中起了一定的作用。