5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对人胃癌细胞系MGC-803生物学行为的影响

目的:探讨5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌细胞系MGC-803生物学行为的影响.方法:人胃癌细胞系MGC-803按常规培养于含100g/L小牛血清的RPMI1640培养液中.实验分为5组:(1)空白对照组:不含细胞的培养液;(2)阴性对照组:细胞只换液,不加药物;(3)5-Aza-CdR组:细胞接种24h后,加入10.0μmol/L的5-Aza-CdR;(4)TSA组:细胞接种24h后,加入300μg/LTSA;(5)5-Aza-CdR+TSA组:细胞接种24h后,加入10.0μmol/L5-Aza-CdR,24h后再加入300μg/LTSA.应用RT-PCR检测各组细胞培养72h后细胞Runx3 mRNA的表达,MTT比色法测定各组细胞分别培养24、48、72h后细胞增殖.结果:单独应用5-Aza-CdR和TSA作用于MGC-803细胞72h后,Runx3 mRNA相对表达量增加,联合用药组分别与5-Aza-CdR组及TSA组相比,差异有统计学意义(0.883±0.025 vs 0.760±0.286,0.735±0.018,均P<0.05).细胞生长抑制率在同一组别随着药物作用时间的延长而增加,并且呈正相关(r=0.738,P<0.05);而在同一时间不同组别比较联合用药组细胞生长抑制率较单用药物组明显增加(24h:57.3% vs 40.4%,39.0%;48h:70.0% vs 56.0%,51.3%;72h:86.3% vs 68.0%,65.8%,均P<0.05).细胞Runx3 mRNA的相对表达量及生长抑制率在药物组与对照组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:与单用5-Aza-CdR或TSA相比,联合应用2种药物更显著的增强Runx3 mRNA的表达,抑制细胞的增殖.

5-氮杂-2-脱氧胞苷及曲古抑菌素A对人胃癌SGC-7901细胞生长及CHFR基因表达水平的影响

背景与目的:抑癌基因甲基化具有可逆性,相关药物可逆转甲基化使失活的基因重新表达。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-dC)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对体外培养的人胃癌SGC-7901细胞活性及CHFR基因mRNA和蛋白表达水平的影响。方法:使用不同浓度的5-Aza-dC和(或)TSA处理SGC-7901细胞,分为对照组、TSA组(250 nmol/L)、5-Aza-dC组(5μmol/L)及TSA(250 nmol/L)联合5-Aza-dC(5μmol/L)组等4个组,采用台盼蓝染色法检测细胞活性,并利用RT-PCR及蛋白质印迹法(Westernblot)方法检测CHFR基因mRNA和蛋白表达的水平。结果:5-Aza-dC和TSA作用24、48、60和72 h后SGC-7901细胞活性均被抑制,且抑制率呈浓度和时间依赖性,两药联合作用更明显;SGC-7901细胞经5-Aza-dC单独或与TSA联合干预后,能提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:5-Aza-dC和(或)TSA均能抑制细胞活性,提高CHFR基因mRNA和蛋白表达水平,两药联合的效果比单药明显增加,为临床胃癌患者的化疗方案提供了实验依据。

曲古抑菌素A通过上调原钙黏蛋白9表达抑制人胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)对人胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭能力的影响,及其可能的分子机制。方法体外常规培养SGC-7901细胞至对数生长期,给予不同浓度TSA(5、10、20、40、80、160 nmol/L)处理48 h,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,脂质体介导法将人原钙黏蛋白9(PCDH9)真核表达质粒转染SGC-7901细胞并筛选出稳定表达的细胞系,Transwell实验检测迁移率和侵袭率,RT-PCR法检测PCDH9 mRNA表达水平,免疫印迹法(Western blotting)检测PCDH9、Snail、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9的蛋白表达水平。结果 TSA在80 nmol/L以上时对人胃癌SGC-7901细胞活力有显著的抑制作用(P<0.05);而在较低浓度下(5~20 nmol/L)可剂量依赖性地抑制人胃癌SGC-7901细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05),下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平(P<0.05),上调E-cadherin和PCDH9蛋白表达水平(P<0.05),上调PCDH9 mRNA表达水平(P<0.05);PCDH9高表达也可抑制SGC-7901细胞迁移和侵袭(P<0.05),上调E-cadherin蛋白表达并下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达(P<0.05)。结论 TSA可在体外抑制胃癌SGC-7901细胞迁移和侵袭,这可能与其促进PCDH9基因表达,继而下调Snail、MMP-2和MMP-9蛋白表达,上调E-cadherin蛋白表达有关。

5-氮杂-2-脱氧胞苷及曲古抑菌素A对人胃癌SNU-1细胞系中DLC-1基因启动子甲基化及mRNA表达的影响

目的探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-d C)联合曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对胃癌细胞株SNU-1中DLC-1基因的甲基化水平和mRNA表达的影响。方法应用甲基化特异性聚合酶链式反应(MSP)和实时荧光定量PCR,检测5-Aza-d C单药或联合TSA作用于SNU-1细胞后,DLC-1基因的甲基化水平及DLC-1基因mRNA表达量。结果对照组中DLC-1基因呈甲基化状态;5-Aza-d C药物干预组DLC-1基因出现明显的非甲基化条带,甲基化条带亮度减弱;TSA组条带无明显变化;5-Aza-d C+TSA组DLC-1基因甲基化条带明显减弱,且出现非甲基化条带。5-Aza-d C组DLC-1 mRNA表达量是对照组的2.22倍,TSA组DLC-1 mRNA表达量是对照组的2.20倍,5-Aza-d C+TSA组DLC-1 mRNA表达量是对照组的4.50倍(P<0.05)。结论5-Aza-d C能诱导胃癌细胞系SNU-1中DLC-1基因去甲基化,与TSA联用可提高DLC-1 mRNA表达。

5-氮-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对人胃癌细胞系MGC-803细胞增殖和凋亡的影响

目的研究人胃癌细胞系MGC-803经DNA甲基转移酶抑制剂5-氮-2-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)作用后细胞增殖和凋亡变化。方法MTT比色法测定各组细胞的增殖情况,Annexin V染色法检测各组细胞凋亡率。结果单独应用5-Aza-CdR或TSA作用于胃癌细胞系MGC-803后,细胞增殖均受到抑制,生长抑制率分别为68.0%、65.8%;凋亡率分别为(42.31±4.53)%、(39.30±5.37)%,而联合用药组细胞生长抑制率明显增加,达到86.3%,细胞凋亡率为(68.20±7.14)%。结论与单用5-Aza-CdR或TSA相比,联合应用两种药物更能显著的诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,这可能为胃癌的生物治疗提供一种新的思路。

曲古抑菌素A对胃癌细胞生长的抑制作用

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂-曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对胃癌细胞系SGC-7901的生长抑制作用,证实该作用是通过促使细胞凋亡而实现的.方法:用不同浓度(0.2、0.4和0.8mg/L)和不同作用时间(24、48和72h)的TSA作用于SGC-7901细胞,采用MTT法观察TSA对SGC-7901细胞增殖的抑制作用;通过流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率的变化;通过透射电镜观察细胞超微结构的变化.结果:TSA可抑制胃癌SGC-7901细胞的生长,且这种作用呈时间和剂量依赖关系.当TSA作用浓度分别为0.2、0.4和0.8mg/L时,与SGC-7901细胞均作用72h,TSA对SGC-7901细胞生长的抑制率分别为25%±1.2%,45%±1.4%和73%±1.7%,各组均与TSA0.2mg/L组比较,差异显著(P<0.05).当0.8mg/LTSA分别与SGC-7901细胞作用24、48和72h,TSA对SGC-7901细胞生长的抑制率分别为21%±1.1%,37%±2.0%和73%±1.7%,各组均与TSA作用24h组比较,差异显著(P<0.05).TSA可延缓细胞周期,具有明显的诱导细胞凋亡作用.电镜下见细胞染色质凝聚成段片状,细胞核固缩断裂,核膜破裂,细胞器及胞膜自溶,凋亡小体形成.结论:TSA通过诱导细胞周期阻止和凋亡来抑制胃癌细胞系SGC-7901的生长,且这种作用呈时间和剂量依赖性,为TSA用于胃癌的治疗提供理论依据.

5-氮-2-脱氧胞苷与曲古抑菌素A对胃癌细胞生长抑制作用的研究

目的探讨5-氮-2-脱氧胞苷与曲古抑菌素A对胃癌细胞生长抑制作用。方法应用MTT比色法检测各组细胞增殖情况,应用金氏公式计算联合用药效果。结果单独及联合应用不同浓度的5-氮-2-脱氧胞苷与曲古抑菌素A作用MGC-803细胞不同时间,细胞生长抑制作用均随着药物浓度的增加和时间的延长逐渐增加,联合用药效果表现为相加作用(q>0.85)。结论单独应用5-氮-2-脱氧胞苷与曲古抑菌素A,细胞生长抑制率均明显增加;联合用药发挥相加作用,为临床联合用药提供了理论依据。

5-氮杂-2-脱氧胞苷联合曲古抑菌素A对胃癌细胞SGC-7901MGMT表达及NF-κB活性的影响

目的研究5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-dC)及曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对人胃癌细胞系SGC-7901细胞增殖、凋亡及移植瘤生长的影响,从体内、体外观察抑癌基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)表达,核转录因子NF-κB活性的改变,探讨5-Aza-dC联合TSA用于胃癌临床治疗的可行性。方法实验分对照组、5-Aza-dC组、TSA组和5-Aza-dC联合TSA组,利用CCK-8增殖试剂盒检测细胞增殖情况,流式细胞术分析细胞凋亡,RT-PCR检测各组MGMT mRNA表达,Western blot检测MGMT、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65的磷酸化水平。结果 5-Aza-dC、TSA单独处理均可抑制SGC-7901细胞的生长和促进其凋亡,联合用药后效果更明显(P<0.05);与对照组相比,单药组移植瘤变化没有统计学意义(P>0.05),而联合用药组较单药组移植瘤变小;5-Aza-dC、TSA单独或联合处理SGC-7901细胞和裸鼠移植瘤后,与对照组比较,MGMT基因mRNA及蛋白表达水平均上调,联合用药比单独用药升高明显,NF-κB p65在各处理组中的表达量未发生变化,但其磷酸化程度较对照组下降,联合用药较单药下降更明显(P<0.05)。结论 5-Aza-dC与TSA发挥抑制胃癌生长的作用可能是通过抑制NF-κB的活性,提高MGMT基因的转录和表达而实现的,两药联合使用的抗癌效果更加明显。

曲古抑菌素A促进As_2O_3诱导HL-60细胞分化与分子机制的研究

目的:研究曲古抑菌素A能否促进小剂量三氧化二砷(As2O3)诱导HL-60细胞分化并对其机制进行初步探讨。方法:用MTT实验测定药物对细胞增殖的变化;流式细胞仪检测细胞表面CD11b表达率观察药物对细胞的分化作用;RT-PCR方法检测p21和cyclinD3在mRNA水平的表达变化。结果:HL-60细胞经曲古抑菌素A和(或)小剂量As2O3作用24h后,联合用药组较单用As2O3组能明显抑制细胞增殖,促进细胞分化,p21在mRNA水平表达增加,cyclinD3在mRNA水平表达降低。结论:曲古抑菌素A能促进小剂量As2O3诱导HL-60细胞的分化,其机制可能与细胞周期蛋白cyclinD3和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21的表达变化有关。

曲古抑菌素A抑制人脑肿瘤细胞增殖及提高p21和p27蛋白表达

背景和目的:研究提示组蛋白乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A能诱导细胞凋亡。本研究拟探讨曲古抑菌素A对人脑肿瘤细胞的杀伤作用和机制。材料和方法:选用两种人脑肿瘤细胞株,一株为p53突变型的人胶质瘤细胞株T98G,另一株为p53野生型的人神经母细胞瘤细胞株SKNSH;采用SRB细胞毒测定方法检测TSA作用后肿瘤细胞的增殖状态,用琼脂糖凝胶DNA电泳和流式细胞仪定性和定量分析肿瘤细胞凋亡情况,应用Western印迹分析TSA作用前后,肿瘤细胞中高度乙酰化的组蛋白H3、H4,内源性p53蛋白、乙酰化p53蛋白、以及细胞周期相关蛋白p21、p27的变化。结果:TSA在纳摩尔级浓度即能有效抑制肿瘤细胞增殖,并引起高度乙酰化的组蛋白分子H3和H4集聚;用320nM的TSA作用肿瘤细胞24小时,即发生显著的肿瘤细胞凋亡;TSA刺激肿瘤细胞48小时内,p21和p27蛋白表达显著增强,其中p21蛋白水平在4小时后时即明显升高,8小时达高峰;p27蛋白水平升高发生在8小时后,而内源性p53蛋白水平和乙酰化的p53蛋白水平未发生变化。结论:TSA在体外能有效抑制对传统化疗耐药的人脑肿瘤细胞生长,其抗肿瘤生长机理可能是通过上调p21和p27蛋白水平实现的,而不受内源性p53基因状态和蛋白改变的影响。

曲古抑菌素A对细胞PANC-1株凋亡和肿瘤转移相关基因表达的影响

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)诱导胰腺癌细胞PANC-1细胞凋亡机制。方法 TSA 0.1～0.6μmol.L-1培养PANC-1细胞0～48 h,MTT法检测细胞存活率并计算IC50。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～48 h,Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化。TSA 0.4μmol.L-1PANC-1培养0～12 h,检测胱天蛋白酶3活性。TSA 0.4μmol.L-1与PANC-1培养24 h,实时定量PCR检测c-myc,p53,Bcl-2,Bax,存活素,基质金属蛋白酶1(MMP1)和基质金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1)和Notch-1基因的表达。TSA 0.4和0.6μmol.L-1与PANC-1培养24 h,细胞免疫化学方法检测Notch-1蛋白的胞内活性形式NICD表达。结果TSA可以明显抑制PANC-1细胞增殖,12,24和48 h的IC50值分别为0.42,0.32和0.19μmol.L-1,具有量效(r=0.640,P=0.01)和时效(r=0.768,P=0.002)关系。Hoechst 33258染色结果表明,TSA 0.4μmol.L-1增加PANC-1细胞核的蓝色荧光并出现凋亡特征。TSA 0.4μmol.L-1作用4,8和12 h后,胱天蛋白酶3的活性分别为正常对照组的1.62±0.12,2.68±0.17和(3.92±0.23)倍。PCR结果显示,TSA 0.4μmol.L-1作用24 h后,p53,c-myc和存活素mRNA表达下降,分别为对照组的(18.3±5.1)%,(24.2±0.9)%和(15.8±1.0)%,Bcl-2和Notch-1 mRNA未见明显变化,而Bax,MMP1和TIMP-1 mRNA升高(P<0.05),Bcl-2/Bax比值降低到正常对照组的(13.0±2.8)%。Notch-1活性分子NICD明显升高(P<0.05)。结论TSA可通过线粒体途径诱导胰腺癌PANC-1细胞凋亡,而且使Notch-1激活,促进转移相关基因表达。

曲古抑菌素A对结肠癌细胞株SW480细胞周期影响的机制研究

为了研究组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对结肠癌细胞周期和凋亡的影响,初步探讨TSA作用细胞周期的可能机制,将人结肠癌细胞系SW480经TSA处理后,运用流式细胞术检测细胞周期、凋亡以及细胞周期素的变化,最后采用western-blot对细胞周期相关的基因进行检测.结果表明,TSA处理细胞后,TSA能够延缓细胞周期G1-S进程,阻滞细胞于G1期,并且影响细胞周期素cyclinE、cyclinA聚集,而对凋亡无明显的影响.Western-blot显示,TSA能够上调p21Waf1/Cip1、p27Kip1的表达,下调CDK2、cyclinE以及cycli-nA的表达.以上结果说明在结肠癌细胞中,TSA能够通过上调p21Waf1/Cip1、p27Kip1的表达以及下调CDK2、cy-clinE、cyclinA的表达,从而阻滞细胞周期于G1期,最终影响肿瘤细胞的生长,以上研究为HDAC抑制剂应用于结肠癌治疗提供了理论依据.

曲古抑菌素A对人肺腺癌细胞A549的生长抑制作用

目的评价组蛋白去乙酰化酶(HDAC)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对肺腺癌细胞株A549的生长抑制作用。方法分别以体外药物敏感实验、流式细胞术观察TSA处理肺腺癌细胞株A549后,其生长抑制情况以及细胞周期、细胞凋亡等指标的变化,Western blot检测p21及细胞外信号调节激酶(ERK)表达水平的变化。结果 TSA对肺腺癌细胞株A549具有生长抑制作用,其细胞毒性呈时间依赖性和浓度依赖性;TSA作用48及96h后,A549细胞凋亡、G0/G1期及G2/M期细胞显著增加(P<0.05);S期细胞显著下降(P<0.05)。p21蛋白表达显著增强,磷酸化ERK蛋白表达显著下降。结论 HDAC抑制剂TSA对肺腺癌细胞株A549具有生长抑制作用,其机制可能是上调p21蛋白的表达,阻断ERK通路的活化,从而引起细胞周期的阻滞和细胞凋亡。

5-氮杂-2'-脱氧胞苷和曲古抑菌素A对卵巢癌顺铂耐药细胞中hMLH1表达及DNA甲基化的影响

背景与目的:顺铂能造成细胞内DNA的损伤,而DNA错配修复蛋白能发现顺铂导致的DNA损伤,产生损伤信号,诱导细胞凋亡,从而摧毁肿瘤细胞。hMLH1是DNA错配修复系统的一个重要成员,其缺失能导致肿瘤对顺铂的耐受。本研究目的在于探讨卵巢癌顺铂耐药细胞中hMLH1表达及其基因启动子区DNA甲基化状态,同时探讨去甲基化制剂—5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'——deoxycytidine,5-Aza-dC)和组蛋白脱乙酰化酶抑制剂——曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对hMLH1表达及DNA甲基化的逆转作用。方法:应用5-Aza-dC和TSA作用于卵巢癌细胞COC1与其顺铂耐药细胞COC1/DDP,应用甲基化特异性PCR、RT-PCR和Western blot检测上述两种细胞中hMLH1基因启动子区DNA甲基化、hMLH1 mRNA和hMLH1蛋白表达的变化。MTT法检测药物对细胞增殖的影响。结果:COC1细胞存在hMLH1 mRNA和蛋白的表达,其启动子区域表现为DNA非甲基化。单独应用5-Aza-dC、TSA及联合应用5-Aza-dC和TSA对COC1细胞中hMLH1 mRNA、hMLH1蛋白表达和DNA甲基化均没有影响(P>0.05),细胞形态变化不明显。COC1/DDP细胞中hMLH1 mRNA和蛋白表达缺失,启动子区域表现为DNA甲基化。5-Aza-dC不但能使COC1/DDP细胞中hMLH1基因发生DNA去甲基化,而且能使表达缺失的hMLH1 mRNA和hMLH1蛋白重新表达。TSA对COC1/DDP细胞中hMLH1 mRNA、hMLH1蛋白表达和DNA甲基化均没有影响(P>0.05)。联合应用5-Aza-dC和TSA不但能使hMLH1基因发生DNA去甲基化,而且与单独应用5-Aza-dC相比较,对hMLH1 mRNA和hMLH1蛋白表达的影响更明显(P<0.05)。5-Aza-dC单用及联合应用TSA对COC1/DDP细胞生长抑制率明显高于COC1组、阴性对照组(P<0.05)。结论:COC1/DDP细胞对顺铂的耐药性与hMLH1mRNA和蛋白的表达缺失有关,而hMLH1基因和蛋白的表达缺失与其基因启动子区DNA甲基化相关,5-Aza-dC单用及联合TSA使hMLH1基因发生DNA去甲基化,促进hMLH1的表达,逆转COC1/DDP细胞对DDP的耐药性。

曲古抑菌素A和紫杉醇对子宫内膜癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)和紫杉醇(paclitaxel,PTX)对人子宫内膜癌细胞株KLE增殖和凋亡的影响。方法:TSA和PTX、卡铂(carboplatin,Carbo)、多柔比星(doxorubicin,Dox)单独或联合作用于KLE细胞,锥虫蓝法观察药物对肿瘤细胞生长的影响;Annexin V、Hoechst染色和线粒体膜电位检测细胞凋亡;Western blotting检测肿瘤细胞凋亡信号通路中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)、半胱天冬氨酸蛋白酶9(caspase-9)和乙酰化微管蛋白的表达。结果:PTX、Carbo、Dox和TSA对KLE细胞增殖均有抑制作用,TSA和PTX联用后抑制作用最强。Annexin V染色、Hoechst染色、线粒体膜电位法和PARP、Caspase-9的检测显示,单用PTX或TSA均可诱导细胞凋亡,联合应用产生最强的协同作用。Western blotting和免疫组化分析显示,PTX和TSA均可诱导微管蛋白乙酰化,联合用药后微管蛋白乙酰化明显增加。结论:TSA和PTX联合使用有明显的协同作用,能显著抑制子宫内膜癌KLE细胞生长和诱导细胞凋亡,其机制与激活线粒体凋亡信号通路和增强微管蛋白乙酰化有关。

曲古抑菌素A对前列腺癌LNCaP细胞抑制效应的细胞信号通路研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对前列腺癌LNCaP细胞抑制作用的细胞信号机制。方法:半固体培养检测TSA对前列腺癌细胞集落形成能力的影响;Western Blot分析细胞蛋白乙酰化水平、细胞信号通路蛋白及细胞周期相关蛋白的表达。结果:TSA能够有效杀伤前列腺癌LNCaP细胞,在较低浓度即能抑制具有集落形成能力的细胞;药物处理使细胞内蛋白乙酰化水平增高,乙酰化组蛋白H3积累,多种细胞信号通路的相关蛋白如雄激素受体、HER2、Raf-1、Akt、CDK4等呈时间依赖性和剂量依赖性被清除。结论:TSA能够同时阻断对细胞生长具有重要作用的多条细胞信号通路,从而对前列腺癌LNCaP细胞发挥抑制作用。

曲古抑菌素A对小鼠混合淋巴细胞培养中淋巴细胞增殖和IL-2表达的影响

目的研究曲古抑菌素A(TSA)对小鼠体外混合淋巴细胞培养中淋巴细胞增殖及IL-2表达的影响,探讨TSA对T细胞免疫功能的影响。方法采用0.16、0.8、4、20、100、500nmol/L倍比浓度TSA作用于BALB/c及C57BL小鼠混合淋巴细胞培养体系,根据不同的OD值测定12、24、48h各浓度TSA对T淋巴细胞增殖的抑制率;相同浓度梯度TSA再作用于经丝裂霉素处理过的BALB/c淋巴细胞与C57BL淋巴细胞单向混合淋巴细胞培养体系,以环磷酰胺作对照,应用流式细胞技术观察其对IL-2表达的影响。结果TSA可以抑制小鼠混合淋巴细胞培养中T淋巴细胞的增殖,这种抑制能力表现出明显的量效及时效依赖性;TSA也显著抑制经刺激激活的小鼠T淋巴细胞的IL-2的表达,并且随着TSA浓度的升高,IL-2表达逐步下降,但与CTX比较有显著性差异(P<0.01)。结论TSA能抑制混合淋巴细胞培养中淋巴细胞的增殖,减少激活T淋巴细胞IL-2的表达,降低T细胞的免疫活性,能够减弱对外来抗原刺激的免疫应答。

曲古抑菌素A抑制小鼠CD4^＋T细胞活化的机制

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对小鼠脾脏CD4+T细胞相关分子的基因转录和表达以及对活化信号转导途径的影响,探讨TSA影响CD4+T细胞活化的作用机制。方法采用2、20、200 nmol/L倍比浓度TSA作用于C57BL小鼠脾脏中分离出的CD4+T细胞24 h,观察对CD3,CD28以及IL-2基因转录和表达的影响;观察TSA对采用抗CD3,CD28单抗激活CD4+T细胞表达蛋白酶ZAP70和PI3K的影响。结果 TSA能抑制CD4+T细胞CD28基因转录和分子表达,且与作用浓度相关;能抑制抗体激活的小鼠CD4+T细胞表达PI3K蛋白,而对CD3分子活化信号下游的ZAP70蛋白的表达无明显影响;TSA还能抑制CD4+T细胞IL-2的基因转录和显著减少激活的CD4+T细胞表达IL-2(P<0.01)。结论 TSA通过抑制CD28基因转录和分子表达,影响激活CD4+T细胞活化过程中共刺激信号向细胞内的传导,减少IL-2的分泌,从而降低CD4+T细胞的免疫活性。

JNK通路参与曲古抑菌素A诱导的胰腺癌PANC-1细胞凋亡

目的研究JNK通路在曲古抑菌素A(TSA)诱导人胰腺癌PANC-1细胞凋亡过程中的激活情况,并探讨其机制。方法 PANC-1细胞经TSA 1.0μmol·L-1与JNK抑制剂(SP600125)20μmol·L-1单独或联合处理24h后,分别用CCK-8法和Hoechst33258染色法检测对PANC-1细胞的生长和细胞凋亡的作用;荧光定量PCR检测c-Jun,c-fos,Elk1,bax和bcl-2 mRNA表达;Western蛋白质印迹法检测p-c-Jun、p-JNK、bax、活性胱天蛋白酶8、bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白表达。结果 CCK-8结果显示,TSA单独处理,PANC-1细胞的存活率随着TSA浓度的增加而降低,并具有一定的量效关系(r=0.9564,P<0.05)。TSA+SP600125组细胞存活率较TSA单独处理明显增加(P<0.05)。Hoechst33258染色显示,正常对照组、TSA组和TSA+SP600125组凋亡率分别为(1.8±0.4)%,(6.2±1.4)%和(3.9±0.9)%,组间差异具有明显的统计学意义(P<0.05,24h)。与TSA组比较,TSA+SP600125组促凋亡基因bax以及JNK通路相关基因c-Jun和c-fos mRNA表达明显降低,Elk1mRNA表达降低,差异显著(P<0.05);而抗凋亡基因bcl-2mRNA表达明显升高(P<0.05)。TSA作用PANC-1细胞1h后激活JNK通路的相关蛋白c-Jun和JNK,并在2h达到最高峰。与TSA组比较,TSA+SP600125组bax及活性胱天蛋白酶8蛋白的表达明显降低(P<0.05),bcl-2和胱天蛋白酶3蛋白的表达明显升高(P<0.05)。结论激活JNK通路是TSA诱导PANC细胞凋亡的重要机制之一,可能是通过影响线粒体凋亡途径发挥作用。

曲古抑菌素A对CNE2鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究曲古抑菌素A(TSA)在体外对人鼻咽癌细胞的影响,为鼻咽癌的药物治疗提供依据。方法将鼻咽癌CNE2细胞经0.125%胰酶处理制成细胞悬液,培养24 h。试验设TSA1～TSA5组及对照组,TSA1～TSA5组分别加入TSA200、300、400、500、600 nmol/L,对照组加入等量生理盐水;6、12、24、36 h后MTT法计算细胞抑制率。将CNE2细胞接种于25 ml培养瓶中,分为TSA1～TSA3组及对照组,TSA1～TSA3组分别加入300、400、500nmol/L TSA处理24 h;对照组加入等量生理盐水;流式细胞仪检测分析细胞周期及细胞凋亡率。结果 TSA可明显抑制CNE2细胞生长,同时点细胞抑制率对照组<TSA1组<TSA2组<TSA3组<TSA4组<TSA5组,并呈剂量时间效应关系,P均<0.05。TSA干预后CNE2细胞G2/M期细胞明显增多,出现G2/M期阻滞,细胞凋亡率明显升高,且呈浓度依赖性。结论 TSA能明显抑制CNE2细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有G2/M期阻滞效应,是治疗鼻咽癌的潜在药物。