重庆城口发现野生曲茎石斛新分布

于2021年7月在重庆市城口县东安镇发现国家一级重点保护野生植物曲茎石斛(Dendrobium flexicaule)新分布记录,凭据标本存放于重庆市中药研究院标本馆(SM)。通过对曲茎石斛植株形态特征、生境群落及伴生植物特征进行描述,提供了相应图版,为重庆市兰科植物资源提供新资料。

曲茎石斛在崇明地区原生态栽培技术初探

曲茎石斛作为一种具有极高药用和观赏价值的品种,由于其对生长对环境条件要求高,分布区域性强,产量低,经济价值高。根据市场需求和对生长环境要求,结合崇明气候条件,以活树附生栽培为重点,开展相关技术的栽培试验研究,摸清了在不同季节对温湿度、光照和肥料的需求,经过二年栽培,制订了林下曲茎石斛原生态栽培技术规范,为崇明林下曲茎石斛的发展,提供技术支撑。

曲茎石斛及其近似种鉴别的形态和DNA分子证据

目的 探讨曲茎石斛 (南阳居群 )与同属近似种 :细茎石斛 (南阳居群 )、霍山石斛 (霍山居群 )、铁皮石斛(天台居群 )药材鉴别的形态及DNA分子证据。方法 对曲茎石斛 (南阳居群 )及其近似种的药材进行了外部形态和rDNAITS序列比较。结果 曲茎石斛及其近似种药材的外部形态虽无明显区别 ,但在rDNAITS序列上却存在着显著而稳定的差异。曲茎石斛 (南阳居群 )与铁皮石斛 (天台居群 )的rDNAITS序列的差异最小 ,绝对遗传距离为 7;但与细茎石斛 (南阳居群 )及霍山石斛 (霍山居群 )rDNAITS区的差异较大 ,绝对遗传距离分别为 4 0和 4 2。在rDNAITS区域中 ,作者共挑选了 7个碱基位点用作鉴别曲茎石斛 (南阳居群 )及其近似种的DNA证据。结论 根据药材的形态特征及rDNAITS区碱基序列差异 ,可准确鉴别曲茎石斛及其近似种药材。

曲茎石斛组织培养研究

目的：提供药用石斛可脱瓶移栽的粗壮试管苗，以提高移栽的成活率。方法：采用种子苗与茎段外植体苗不同培养基的双向培养，并对二者的生长特点进行比较。结果：外植体苗繁殖快，粗壮，但需原植株量大，种子苗生长周期长，细弱，但培养基数高。结论：二者结合培养对快速繁殖，提高成活率有利。

云南番茄曲叶病是由烟草曲茎病毒引起的

从云南省德宏田间表现曲叶症状的番茄植株上分离到病毒分离物Y41,采集的带病植株在实验室可经烟粉虱(Bemisiatabaci)传播到健康的番茄。用针对非洲木薯花叶病毒(ACMV)、印度木薯花叶病毒(ICMV)及秋葵曲叶病毒(OLCV)的15种单抗对病样进行TAS-ELISA检测,结果表明,番茄曲叶病是由菜豆金色花叶病毒属(Be gomovirus)病毒引起的,但其抗原表位型与我国广西报道的中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCV)不同。对Y41进行DNA-A全序列测定和分析表明,Y41DNA-A全长2743个核苷酸,共编码6个ORF,其中病毒链编码AV1和AV2两个ORF,互补链编码AC1、AC2、AC3和AC44个ORF。对Y41及其它双生病毒CP进行同源性比较及系统进化关系分析表明,Y41属于"旧世界"的粉虱传双生病毒,与我国报道的烟草曲茎病毒(TCSV)及印度报道的番茄曲叶Karnataka病毒(ToLCKV)同源性最高,达到98 8%。进一步比较基因组发现,Y41与TCSVAV1、AV2、AC1、AC2、AC3、AC4各ORF同源性分别为98 8%、96 6%、86 4%、93 3%、89 6%和89 7%,基因间隔区(IR)、DNA-A同源性分别为92 1%和93 4%,且在基因间隔区内含有相似的重复子序列及排列方式。这些结果表明:Y41是TCSV在自然条件下侵染番茄的一个分离物。

烟草曲茎病毒复制相关蛋白基因原核表达条件优化

为了提高烟草曲茎病毒(Tobacco curly shoot virus,TbCSV)复制相关蛋白(replication-associated protein,Rep)基因在大肠杆菌中表达量,研究了大肠杆菌菌株、温度、诱导时间以及诱导剂IPTG浓度等不同条件对GST-Rep融合蛋白表达量的影响.结果表明,大肠杆菌菌株Rosetta在37℃培养3h后,使用终浓度为0.5mmol·L-1的IPTG在28℃诱导培养4h时,GST-Rep融合蛋白表达量最高,表达的GST-Rep融合蛋白可占细菌总蛋白的42%以上.用GST-Sepharose 4B亲和层析柱对GST-Rep融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE表明GST-Rep融合蛋白大小约为66kD,与预计的分子量大小一致,Western blot分析表明其能与GST多克隆抗体起特异性反应.Rep基因的优化表达为研究该基因的作用机理打下了基础.

大豆曲茎性状的遗传分析和RAPD标记研究

曲茎遗传材料NG94-156与遗传背景不同的3个正常茎品种杂交,获得1个F2群体和2个重组自交家系(F7∶8)。后代分离分析的结果表明,NG94-156的曲茎性状受两对隐性重叠基因控制。利用4个亲本和1个重组自交家系筛选260个RAPD随机引物,其中有1个引物S-506扩增出的多态性条带有较好的重复性。经过连锁分析,RAPD标记S-5061600与控制曲茎的基因的遗传距离为6.94 cM。

激素对曲茎石斛试管苗生长的影响

曲茎石斛(Dendrobium flexicaule Z.H.Tsi,S.C.Sun et Z.G.Xu)是中药西枫斗的原植物之一。因其生长在悬崖峭壁上,采挖十分困难,采收时连根拔起,使自然资源日益减少。为解决种源供人工栽培,近年来,我们对其进行了无性快速繁殖、培养出了大量试管苗。但大多数苗及根细小,成活困难,为解决这一问题,我们进行了选择不同激素对曲茎石斛试管生长的影响试验。现将结果报告如下。

烟草曲茎病毒卫星DNA在不同寄主中的分子变异比较

The molecular variation of satellite DNA associated with Tobacco curly shoot virus (TbCSV) was compared by DNA sequencing of progenies of TbCSV DNA in Nicotiana benthamiana and N. glutinosa plants agroinoculated with infectious clones of TbCSV and its associated DNA. Comparisons indicated that TbCSV DNA populations had the higher levels of mutation frequency in N. glutinosa than that in N. benthamiana, and mutations generated in N. benthamiana were found upstream or downstream of C1 ORF whereas those in N. glutinosa were mostly located in A-rich region. No mutation was found in C1 ORF and satellite conserved region of DNA. The biological significance of the mutation accumulation and its role in disease epidemic were discussed.

侵染青蒿的烟草曲茎病毒的分子鉴定及基因组结构特征分析

菜豆金色花叶病毒属病毒是一类在全球热带及亚热带地区造成严重经济损失的植物病毒,田间杂草是这类病毒重要的中间寄主。本研究从云南省玉溪市采集了表现黄脉的青蒿植株,通过PCR扩增、克隆及测序从样品中获得两条菜豆金色花叶病毒属病毒DNA-A全基因组序列,分别为YN6393-23和YN6393-27,其全长均为2739 bp,相似性为100%。序列分析发现,YN6393-23和YN6393-27的核苷酸序列与烟草曲茎病毒Tobacco curly shoot virus(TbCSV)的分离物YN4584的核苷酸序列相似性最高,为99.45%。根据国际病毒分类委员会对菜豆金色花叶病毒属病毒种的分类标准,全基因组序列相似性大于91%则为同种病毒,表明此病毒分离物为烟草曲茎病毒的一个分离物。这是菜豆金色花叶病毒属病毒侵染青蒿植株的首次报道。

烟草曲茎病毒Y128分离物及伴随卫星的分子鉴定

从云南保山田间表现曲叶症状的烟草植株上分离到病毒分离物Y128,病株在实验室可经烟粉虱(Bemisiatabaci)传播到健康烟草上。分别用针对烟草曲茎病毒(TbCSV)、云南烟草曲叶病毒(TLCYNV)、中国番茄黄化曲叶病毒(TYLCCNV)及泰国番茄黄化曲叶病毒(TYLCTHV)等田间常复合侵染的云南粉虱传双生病毒的特异性引物对Y128DNA-A进行PCR扩增,结果表明Y128是烟草曲茎病毒(TbCSV)的1个分离物。利用DNAβ的特异性引物β01和β02,在Y128中扩增到卫星DNA分子(Y128β)。对Y128进行DNAβ全序列测定及分析表明,Y128β全长1350个核苷酸,其互补链上编码1个有功能的ORF(βC1)。Y128β的全序列与TbCSV各个分离物的卫星分子(Y2β、Y35β和Y115β)的同源性最高,分别为85·2%、94·3%和88%;与其它已报道的卫星DNAβ的同源性均低于56·1%。

曲茎石斛营养器官的解剖学研究

曲茎石斛 (DendrobiumflexicauleZ .H .Tsi,SC .SunetL .G .Xu)的叶为等面叶 ,气孔四列型 ,分布于下表皮。茎中外韧有限维管束 2 1条 ,散生。根被由 3层细胞组成 ,辐射维管束 7原型 ,无髓 ;内、外皮层和中柱鞘均为一层细胞 ,均具通道细胞。

烟草曲茎病毒复制蛋白基因的原核表达和免疫定位

利用PCR方法从烟草曲茎病毒 (TbCSV)Y35分离物的病株中获得复制蛋白 (Rep)基因 ,将其克隆到原核表达载体pGEX 4T 1上获得重组质粒pGEX Y35Rep。重组质粒导入大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS中 ,IPTG诱导表达后发现部分Rep融合蛋白以可溶性形式表达。利用GST Sepharose 4B亲和层析柱纯化了Rep的融合蛋白 ,免疫家兔获得Rep蛋白的抗体。对TbCSV侵染烟草中Rep蛋白的亚细胞分布研究发现 ,Rep蛋白主要分布于含有细胞核的组份中。利用免疫胶体金技术对感病烟草中Rep蛋白进行了定位 。

大豆曲茎性状的表现及遗传研究

大豆曲茎材料PI227224在南京分期播种及杂交试验的结果表明：曲茎性状受不同播期的光温条件影响，夏播下曲茎表现程度高于春秋播；曲茎与矮秆各受一对隐性基因控制，曲茎和矮秆之间存在连锁关系，用极大似然法估算的重组值r为9．23±1．22％。

野生曲茎石斛的离体培养及再生体系研究

以野生的曲茎石斛茎段为试材,探讨了不同生长调节剂对其不定芽诱导、增殖和生根的影响,并建立了野生曲茎石斛的高效再生体系。结果表明,利于野生曲茎石斛分化的诱导培养基为M(B5)+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.8 mg/L+3.0%蔗糖;以MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA1.2mg/L+3.0%蔗糖为增殖培养基时的增殖效果较佳,增殖倍数为5.6;野生曲茎石斛的高效再生体系为MS+KT1.5 mg/L+NAA1.0 mg/L+IBA1.0 mg/L+2.0%蔗糖,其生根率可达94%;移栽基质以小树皮+碎火山石+椰壳粉(1.2∶1.2∶1)为佳,移栽成活率可达到94%。

曲茎石斛放养研究

曲茎石斛放养研究石友亭，杨联合，施子棣，段振离，韩莉（河南中医学院郑州４５０００３）解国一，郝芬兰，解涛，齐丙申，于丙午（河南省西峡县４７４５５０）曲茎石斛现完全靠野生供药，自然药源濒临灭绝。近年来试管苗放养虽有报道，但成活率极低。为探索试管苗放养技...

与烟草曲茎病毒相伴随的DNAβ的βC1基因原核表达及蛋白的单抗制备

将PCR扩增的烟草曲茎病毒（Tobacco curly shoot virus，TbCSV）Y35分离物βC1基因克隆到pET-32a原核表达载体，构建原核表达重组载体pET32a-Y35βC1．重组载体导入大肠杆菌BL21（DE3），经过IPTG诱导、Ni^2＋ NTA亲和柱纯化获得与硫氧还蛋白融合的重组蛋白Y35βC1．以Y35βC1重组蛋白为抗原免疫BALB／c小鼠，用杂交瘤细胞技术制备了9株能够稳定传代并分泌抗Y35βC1蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，分别制备它们的单抗腹水．9株单抗腹水的间接ELISA效价在10^-5～10^-6之间.Y35βC1单克隆抗体的研制为该蛋白的亚细胞定位及功能研究，明确Y35βC1基因在致病过程中的作用机理奠定了基础．

烟草曲茎病毒 AC4基因的原核表达与免疫定位

利用 PCR方法从烟草曲茎病毒 ( Tb CSV) Y3 5分离物的病株中获得 AC4基因 ,将其克隆到原核表达载体 p ET-3 0 a上获得重组质粒 p ET-Y3 5 AC4,重组质粒导入大肠杆菌 BL2 1 ( DE3 ) p Lys S中 ,IPTG诱导后 SDS-PAGE发现 ,AC4蛋白已在大肠杆菌中获得了表达。利用 Ni2 +-NTA亲和树脂纯化了 AC4重组蛋白 ,免疫家兔获得 AC4蛋白的多克隆抗体。利用免疫胶体金技术对感病烟草中AC4蛋白进行定位发现,TbCSV AC4蛋白主要在细胞质的叶绿体和线粒体中积累。

与含卫星DNA的烟草曲茎病毒伴随的nanovirus类DNA分子鉴定

利用已报道的两种粉虱传双生病毒DNA1分子的全长特异性引物进行PCR扩增 ,在含有卫星DNAβ的烟草曲茎病毒 (TbCSV)Y35和Y1 1 5分离物中扩增到一种单链环状DNA小分子(命名为DNA1 ) ,而在不含有卫星DNAβ的TbCSVY1和Y1 2 1分离物中没有扩增到DNA1分子 .免疫捕获PCR表明DNA1分子包裹在双生病毒粒子中 .Southernblot检测进一步证实仅在含卫星DNAβ的TbCSVY35和Y1 1 5分离物中存在DNA1分子 .序列分析表明 ,Y35和Y1 1 5DNA1序列全长分别为 1 36 7和 1 36 8nt ,各有一个较保守的开放阅读框 (ORF) ,编码类似nanovirus的Rep蛋白 .两个DNA1分子与辅助病毒DNA A序列无同源性 .Y35和Y1 1 5DNA1全长核苷酸序列同源性为 92 % ,ORF编码的氨基酸同源性为 96 % ,而与已报道的胜红蓟黄脉病毒和木尔坦棉花曲叶病毒的DNA1的核苷酸序列同源性为 70 %～ 79% ,氨基酸序列同源性为 87%～ 90 % .将DNA1与nanovirusesDNA比较后发现 。