探讨曲霉抗原抗体检测在结核后肺曲霉病中的诊断价值

结核病是由结核分枝杆菌引起的慢性传染病,可累及全身多个脏器,以肺结核最为常见。肺组织结构的破坏、空洞的形成及支气管扩张为曲霉定植和生长提供了场所。结核患者体内中性粒细胞和吞噬细胞的数量减少以及免疫功能降低,造成曲霉感染的风险增加,而且长期服用抗结核药物,导致菌群失调。当肺结核患者感染曲霉时,由于临床症状和影像学相似导致鉴别诊断困难,延误最佳治疗时机,造成患者预后不佳。因此,如何能早期、快速诊断并给出精准的治疗方案是临床急需解决的问题之一。该文总结了结核后肺曲霉病的现状,同时探讨了曲霉抗原抗体检测在结核后肺曲霉病中的诊断价值。

肺泡灌洗液宏基因组二代测序对老年人肺曲霉菌病的诊断价值研究

目的 研究肺泡灌洗液(bronchial alveolar lavage fluid, BALF)宏基因组二代测序(metagenomic next-generation sequencing, mNGS)在老年肺曲霉菌病中的诊断价值。方法 纳入190例符合肺曲霉菌病诊断的病人,按照年龄≥60岁分为老年组和非老年组,分析传统微生物培养、血清曲霉半乳甘露聚糖抗原检测(GM试验)、BALF GM试验及BALF mNGS在2组病人中的阳性率。结果 老年组和非老年组中BALF mNGS阳性率最高,其次为BALF GM试验。2组BALF GM试验阳性率差异有统计学意义。ROC曲线得出老年组和非老年组BALF GM试验的诊断效能均优于血清GM试验,且老年组BALF GM试验的敏感度和特异度高于非老年组。在血清GM试验<0.5的99例老年病人中,61例行BALF mNGS,49例(80.3%)阳性;BALF GM试验<0.8的28例老年病人中,26例行BALF mNGS,全部阳性。结论 老年人和非老年人肺曲霉菌病诊断中,BALF mNGS阳性率最高,其次为BALF GM试验。对于GM试验阴性仍高度怀疑肺曲霉菌感染的病人行BALF mNGS将大大提高检出率,BALF GM试验结合BALF mNGS检测将使肺曲霉菌病的诊断准确率显著提高。

1组曲霉单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备并鉴定一组抗曲霉不同抗原的单克隆抗体。方法采用烟曲霉细胞壁抗原成分、分泌抗原和灭活分生孢子,分别免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,免疫荧光法鉴定单克隆抗体与曲霉属和念珠菌属抗原的交叉反应。结果获得29株稳定分泌抗曲霉单抗的杂交瘤细胞株,其中用烟曲霉细胞壁抗原成分免疫获得11株,用分泌抗原免疫获得13株,用孢子免疫获得5株;Ig亚类鉴定,11个克隆株为IgG1亚类,3个克隆株为IgG3,15个克隆株为IgM。免疫荧光法鉴定29株单抗特异性识别烟曲霉细胞壁抗原,与其他曲霉抗原有交叉反应。结论29株单克隆抗体,对于建立侵袭性曲霉感染早期诊断方法、筛选曲霉保护性抗体以及研究抗体保护机制奠定了实验基础。

抗烟曲霉菌单克隆抗体鉴定和初步应用

目的 :制备抗烟曲霉菌单克隆抗体 (McAb) ,建立一种快速检测烟曲霉菌抗原方法。方法 :用基因重组烟曲霉菌半乳糖甘蛋白 (AFMP1)抗原 ,免疫BALB/c小鼠 ,制备单克隆抗体 ,选择针对不同抗原决定簇单抗配对 ,建立双抗夹心ELISA法检测烟曲霉菌抗原。结果 :筛选出 3株稳定分泌抗烟曲霉菌单抗杂交瘤细胞株 ,IgG亚类鉴定分别为IgG1、IgG2a、IgG2b ,抗体亲和常数分别为 1 2× 10 10 、4 5 6× 10 9和 1 81× 10 10 mol/L ,免疫印迹证实单抗特异性识别烟曲霉菌培养上清和细胞裂解产物 ,相加试验表明 3株单抗是针对不同抗原决定簇 ,组成配对双抗夹心ELISA法 ,检测最高灵敏度为 0 1ng/ml,可测范围为 0 1～ 6 0ng/ml。结论 :3株杂交瘤细胞株特异性好、亲和力高 ,组成配对夹心ELISA法可用于快速检测烟曲霉菌抗原。

血清半乳甘露聚糖抗原检测在肺曲霉菌病临床诊治的应用价值

目的探讨血清曲霉菌半乳甘露聚糖抗原(GM)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法在早期免疫功能低下患者合并肺曲霉菌感染诊断的可行性和指导临床治疗的价值。方法采用ELISA方法检测临床确诊或拟诊的侵袭性肺曲霉菌病患者血清曲霉菌GM抗原的水平后,将其中27例患者随机分为A组(13例)、B组(14例),均给予伏立康唑静脉与口服序贯治疗,在6、8、12周时评价临床疗效:A组检测血清GM、临床特征、痰真菌培养及胸部CT;B组观察临床特征、痰真菌培养及胸部CT。结果临床确诊或拟诊的侵袭性肺曲霉菌病32例,血清GM阳性30例,其中27例患者给予伏立康唑治疗,治疗6周,A组治愈5例,显效6例,好转1例,有效率84.6%;B组治愈7例,显效4例,好转1例,有效率78.6%;治疗8周,A组治愈9例,显效3例,有效率92.3%;B组治愈7例,显效5例,好转1例,有效率85.7%;12周,A组治愈10例,显效3例,有效率100.0%;B组治愈8例,显效5例,有效率92.9%;其中A组1例在11周时因原发性血小板减少死亡,B组1例在8周抗真菌治疗效果欠佳时放弃治疗,两组治疗有效率不同,差异有统计学意义。结论曲霉菌半乳甘露聚糖抗原ELISA检测可用于早期临床诊断侵袭性肺曲霉菌病;以cutoff≥0.5为阳性折点,给予先发抗真菌治疗有重要意义;定期连续观察血G-M可用于肺曲霉菌治疗的病情监测,同时联合胸部CT、痰培养可用于抗真菌治疗的疗效评价。

烟曲霉菌孢子对支气管哮喘大鼠肺Toll样受体2表达的影响

烟曲霉菌是支气管哮喘（简称哮喘）患者症状加重，甚至死亡的一个危险因素。在呼吸道中Toll样受体2（TLR2）是识别烟曲霉菌抗原，并与之结合产生生物学作用的重要受体之一。我们在建立大鼠哮喘模型的基础上观察烟曲霉菌孢子对大鼠肺泡灌洗液（BALF）中总蛋白浓度和气道阻力变化时大鼠肺TLR2的变化。

变应性支气管肺曲霉病血清学诊断的研究进展

变应性支气管肺曲霉病（allergicbronchopulmonaryAspergillosis，ABPA）在囊性纤维化或哮喘患者中是一种常见的临床综合征，可导致不可逆的支气管扩张、肺纤维化，甚至死亡。ABPA的早期诊断及治疗可预防不可逆的肺部损伤。尽管多个APBA的诊断标准被先后提出，然而其临床和影像学特点与囊性纤维化、哮喘曲霉过敏有部分重叠，所以诊断上仍存在一定困难。因此，有效的血清标志物对于ABPA的诊断非常关键。从众所周知的标志物如总血清免疫球蛋白E（immunoglobulinE，IgE）、烟曲霉特异性IgE、烟曲霉特异性免疫球蛋白G（immunoglobulinG，IgG）、沉淀素到新的血清生物标志物如曲霉菌抗原重组体（recombinantAspergillusfumigatusallergen，rAsp）、胸腺活性调节趋化因子（thymusglandactivityregulatingchemokine，TARC）、嗜碱细胞活性试验（basophiliccellsactivitytest，BAT）、细胞过敏原刺激实验（cellallergenstimulationtest，CAsT），结合文献复习上述血清标志物在提高APBA早期发现及诊断中的地位及有效性。