UHPLC-MS/MS法测定大鼠不同脑区乙酰胆碱的含量

建立一种快速、简便、准确的液-质联用法以检测大鼠4个脑区中内源性神经递质乙酰胆碱的含量.采用Waters Acquity UPLC HSS PFP柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),以0.1%甲酸水-0.1%甲酸乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为0.3 m L/min,柱温为35℃,离子源为电喷雾离子源,采用正离子多反应监测扫描方式检测.健康大鼠麻醉后,快速于冰上取脑分区,样品称重,与5倍0.1%甲酸水匀浆,再与4倍0.1%甲酸乙腈(含内标)沉淀蛋白,离心取上清进行LC-MS/MS检测.在本研究所建立的实验条件下,乙酰胆碱的方法学验证结果符合相关规定,其浓度在0.5~200 ng/mL范围内线性关系良好(r>0.99),定量下限为0.5 ng/m L,基质效应和回收率均大于80%,日内、日间精密度均在15%范围内,可准确、精密地检测大鼠脑区中乙酰胆碱的含量.由结果可知,乙酰胆碱在纹状体中含量显著高于其他3个脑区(P≤0.01,n=10).全面检测不同脑区乙酰胆碱的含量,能够根据其脑内含量的变化解析神经相关疾病的发病机制,有利于疾病的诊断和治疗.