用替代对照品羟苯乙酯高效液相色谱方法测定大蒜辣素

大蒜辣素极不稳定,制备供含量测定用对照品非常困难。大蒜辣素在溶液中相对稳定,用高效制备液相色谱制备高纯度的大蒜辣素溶液(>99%),HPLC-ESI-MS/MS和NMR法鉴定该溶液中主成分大蒜辣素的结构,用衍生化紫外分光光度间接测定法和EP5.0收载的类似方法分别测定该溶液含量,确定该溶液中大蒜辣素的含量为0.719mg/mL。以此溶液为基准,在条件为:AlltechC18柱(250mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-0.4%甲酸(65∶35),流速为1.0mL/min,检测波长242nm,考察性质稳定而又易得的羟苯乙酯与大蒜辣素之间的校正因子。结果显示,测得1mg羟苯乙酯相当于4.71mg的大蒜辣素,该换算关系适用于大蒜辣素为0.018～2.9g/L的浓度范围,该方法与EP5.0的方法相比,分析时间明显缩短。

替代对照品法用于石杉碱甲片含量测定的研究

目的建立HPLC替代对照品测定石杉碱甲片含量的测定方法。方法在不同的条件下测定替代对照品西咪替丁对石杉碱甲对照品的校正因子,利用校正因子和替代对照品西咪替丁进行石杉碱甲片的含量测定。结果石杉碱甲和西咪替丁分别在2.5～160mg.L-1(r=1.0000)和0.1～20.0mg.L-1(r=1.0000)内与峰面积呈良好的线性关系(n=7),测得校正因子f=2.3624,用替代对照品测定方法测得回收率为97.0%(n=5),RSD=1.7%。结论本实验首次在高效液相色谱仪上使用替代对照品测定了石杉碱甲片含量,结果证明,用替代对照品进行药品质量控制是可行的、实用的。

替代对照品法用于丹参和复方丹参片含量测定的研究

目的:建立HPLC替代对照品法测定丹参和复方丹参片的含量。方法:选取对羟基苯甲酸甲酯作为丹参和复方丹参片含量测定对照品丹酚酸B的替代对照品,在不同的条件下测定替代对照品相对对照品的校正因子,利用校正因子和替代对照品对羟基苯甲酸甲酯进行丹参和复方丹参片中丹酚酸B的含量测定。结果:丹酚酸B和对羟基苯甲酸甲酯进样量分别在0.09～2.71μg(r=1.0000)和0.015～0.45μg(r=1.0000)内与峰面积呈良好的线性关系(n=7),测得校正因子f=5.2884,用替代对照品测定方法测得回收率为100.5%(n=9)。结论:本文首次在高效液相色谱仪上使用替代对照品测定了丹参和复方丹参片中丹酚酸B的含量,结果证明用替代对照品对于丹参和复方丹参片进行药品质量控制是可行的、实用的。

替代对照品法测定淫羊藿中淫羊藿苷的含量

目的:建立HPLC替代对照品法测定淫羊藿中淫羊藿苷的含量。方法:选取芦丁作为淫羊藿中淫羊藿苷的替代对照品,在不同的条件下测定替代对照品相对对照品的校正因子,利用校正因子和替代对照品芦丁进行淫羊藿中淫羊藿苷的含量测定。结果:淫羊藿苷和芦丁进样量分别在0.13～3.20μg(r=0.999 6)和0.34～8.50μg(r=0.999 7)内与峰面积呈良好的线性关系(n=6),测得校正因子f=2.586 1,用替代对照品测定法测得回收率为96.01%(n=9),RSD=1.42%。结论:在高效液相色谱仪上用替代对照品测定淫羊藿中淫羊藿苷的含量是可行的、实用的。

替代对照品法同时测定前胡炮制品中主要香豆素成分

以白花前胡甲素为标准对照品,计算出白花前胡乙素和白花前胡E素的相对校正因子(f),建立HPLC替代对照品法含量测定方法同时测定前胡药材中白花前胡甲素、乙素和E素含量,并在此基础上考察不同前胡炮制品中主要香豆素类成分的含量变化,为前胡药材及炮制品质量标准的制定及其临床应用提供科学依据。采用Welch Materials Ultimate XB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L/min,柱温30℃,检测波长322 nm。该条件下测得前胡中白花前胡乙素和白花前胡E素相对于白花前胡甲素的相对校正因子分别为0.787 2和0.969 0,通过对15批药材进行含量测定,结果证明,替代对照品法与外标法测定的结果无明显差异,说明本研究建立的替代对照品法测定含量,方法准确可靠,可用于前胡及其不同炮制品中主要香豆素的含量测定。用该法测定各炮制品中香豆素总含量均低于生前胡。

基于UPLC替代对照品法测定大蒜中大蒜辣素

目的基于UPLC建立替代对照品法测定大蒜中的大蒜辣素。方法新鲜蒜泥甲醇提取物的分析采用Waters Acquity BEH C18柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm);流动相乙腈-0.1%甲酸水溶液;柱温30℃;体积流量0.3 mL/min;检测波长242 nm。结果大蒜辣素、羟苯乙酯在36.02~564.74、12.93~206.80μg/mL范围内线性关系良好(r≥0.9998),加样回收率98.8%~100.9%,定量下限1.73~2.03 mg/kg。外标法与替代对照品法测定结果无统计学差异(P>0.05)。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于大蒜的质量控制。

替代对照品法快速确证3种抗艾滋病药物

目的：建立替代对照品法快速确证茚地那韦、利托那韦、洛匹那韦的方法.方法：以利托那韦为参比物,采用有效相对保留时间和紫外光谱相似度双指标定性分析;采用相对校正因子进行定量分析.结果：建立了三种抗艾滋病药物的紫外光谱库;茚地那韦、利托那韦和洛匹那韦的有效相对保留时间分别为：0.466～0.518,1.000和1.664～1.840;茚地那韦、利托那韦和洛匹那韦的相对校正因子分别为0.858 7,1.000 0,0.752 0.结论：该方法快速、简便,适用于药品的快速检测,可作为近红外快筛技术确证方法.

替代对照品法测定复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷含量

目的:建立替代对照品测定复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷含量的方法。方法:以水杨酸为替代对照品,采用HPLC法,采用Welch Ultimate C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%三乙胺溶液(用磷酸调节pH值为2.3)(38:62)为流动相,在检测波长252 nm(甘草酸苷)/304 nm(水杨酸),柱温30℃的条件下,测定水杨酸与甘草酸苷的相对校正因子(f),利用相对校正因子(f)计算复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷含量。结果:水杨酸与甘草酸苷分别在35.23~352.32μg·mL-1(r=0.9999)和55.42~554.20μg·mL-1(r=1.0000)浓度范围内与峰面积有良好的线性关系;甘草酸苷的平均回收率为100.47%;水杨酸与甘草酸苷的相对校正因子(f)为1.7621。结论:以水杨酸作为替代对照品,用HPLC测定复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷的含量的方法经济、快速、可行,可作为复方甘草酸苷胶囊中甘草酸苷含量的测定方法。

替代对照品法测定甘草流浸膏中甘草苷和甘草酸含量

目的建立以橙皮苷为替代对照品测定甘草流浸膏中甘草苷和甘草酸含量的高效液相色谱法。方法采用替代对照品内加入法,以橙皮苷为替代对照品,通过测定甘草酸铵与橙皮苷、甘草苷与橙皮苷的相对校正因子(f值),利用f值计算甘草流浸膏中甘草苷和甘草酸含量。色谱条件:Welch Ultimate C 18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%三乙胺溶液(用磷酸调pH值为2.5)为流动相,梯度洗脱,检测波长为284 nm(橙皮苷)、276 nm(甘草苷)、252 nm(甘草酸铵),柱温为30℃,流速为1.0 mL/min。结果橙皮苷、甘草苷、甘草酸铵进样量分别为0.0332~0.4983、0.0493~0.7402、0.4330~6.4951μg,与其峰面积具有良好的线性关系(r=0.9995、0.9992、0.9993);甘草苷和甘草酸铵与橙皮苷的f值分别为1.0814、0.4492;甘草苷和甘草酸的平均回收率分别为98.96%、97.67%。替代对照品法样品含量测定数据与外标法比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论以橙皮苷为对照品,测定甘草流浸膏中甘草苷和甘草酸含量的高效液相色谱法具有成本低、实验时间短、操作过程和仪器噪音影响小等特点。

替代对照品法测定复方甘草口服溶液中甘草苷和甘草酸含量

目的建立以橙皮苷为替代对照品测定复方甘草口服溶液中甘草苷和甘草酸含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法采用替代对照品法,以橙皮苷为替代对照品,测定甘草酸铵与橙皮苷、甘草苷与橙皮苷的相对校正因子,利用相对校正因子计算复方甘草口服溶液中甘草酸和甘草苷含量。色谱柱采用Welch Ultimate C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为0.1%三乙胺溶液(用磷酸调pH至2.5)-乙腈(梯度洗脱),检测波长分别为276 nm(甘草苷)、284 nm(橙皮苷)、252 nm(甘草酸铵),柱温为30℃,流速为1.0 m L/min。结果橙皮苷、甘草苷、甘草酸铵的进样量分别在0.033 2~0.498 3μg(r=0.999 5),0.049 3~0.740 2μg(r=0.999 2),0.443 0~6.495 1μg(r=0.999 3)范围内与峰面积线性关系良好;甘草苷和甘草酸铵与橙皮苷的相对校正因子分别为1.081 4和0.449 2;甘草苷和甘草酸的平均回收率分别为98.94%和99.19%(n=6)。结论该方法成本低,试验时间短,仪器噪音小,适用于测定复方甘草口服溶液中甘草苷和甘草酸含量。

加校正因子的替代对照品法测定注射用头孢硫脒聚合物

目的建立加校正因子的替代对照品法测定注射用头孢硫脒中的聚合物。方法以头孢噻吩作为替代对照品,以紫外吸光系数比值法确定校正因子,以AKTA Prime LC高分子杂质分析仪测定聚合物含量;色谱柱:Sephadex G-10柱(14.0 mm×400 mm);流动相A:pH 8.0的0.2 mol·L^(-1)磷酸盐缓冲液[0.2 mol·L^(-1)磷酸氢二钠溶液-0.2 mol·L^(-1)磷酸二氢钠溶液(61∶39)],流动相B:超纯水;检测波长:254 nm;流速:0.9 mL·min^(-1)。结果头孢噻吩对照品在50~1000 ng·mL^(-1)内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9991),校正因子为0.7804。结论本方法能较好分离头孢硫脒与其聚合物杂质,为加校正因子的替代对照品法在抗菌药物聚合物定量中的应用做了有益探索。

替代对照品法测定当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的含量

建立HPLC替代对照品法测定当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的含量。采用资生堂CAPCELL PAK C_(18)色谱柱(4.6 mm×250.0 mm,5μm),以甲醇-乙腈-水(15∶35∶50)为流动相,柱温30℃,流速1.0 mL/min,丹皮酚的检测波长为274 nm,藁本内酯的检测波长为327 nm。以丹皮酚作为藁本内酯的替代对照品,在不同条件下测定相对校正因子,利用相对校正因子和替代对照品测定当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的含量。结果显示,藁本内酯和丹皮酚进样量分别在0.106 4~2.129 0μg(r=0.999 9)和0.063 6~2.544 4μg(r=0.999 9)范围内与峰面积呈良好的线性关系(n=7),测得相对校正因子f为1.978 5,不同条件下相对校正因子的重现性良好,通过相对校正因子f计算得到当归腹痛宁滴丸中藁本内酯含量与外标法实测值之间无明显差异。本方法经济、实用、快速、高效,可用于当归腹痛宁滴丸中藁本内酯的含量测定和产品质量控制,同时可解决因对照品缺乏与不稳定而给含量测定带来的困难,极大降低了分析检测的成本。

替代对照品法同时测定茯苓中多种三萜酸类成分的含量

目的:建立替代对照品法测定茯苓中7种三萜酸类成分含量。方法:色谱柱为Thermo Acclaim 120 C_(18)(4.6 mm×250 mm, 5μm),流动相为乙腈-磷酸水,梯度洗脱,流速1 mL·min^(-1),检测波长:210 nm,柱温30℃,进样量20μL。以中药标准物质替代品熊果酸作为内参物,分别建立去氢土莫酸、土莫酸、猪苓酸C、3-表去氢土莫酸、3-O-乙酰基-16α-羟基-氢化松苓酸、去氢茯苓酸、茯苓酸的相对校正因子,计算其含量,并与外标法测定结果进行对比分析,验证替代对照品法的合理性、可行性。结果:所建立的7种三萜酸相对校正因子重复性良好,25批茯苓中测定结果的计算值与实测值无显著性差异。结论:该方法测定结果可靠,实现了只用一个对照品同步测定茯苓中多个成分的方法,可为中药多指标成分质量评价模式提供参考。

替代对照品法同时测定川芎中丁苯酞和藁本内酯的含量

目的:建立HPLC替代对照品法同时测定川芎中丁苯酞和藳本内酯。方法:采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(52∶48)为流动相,流速1.0 mL.min-1,丁苯酞检测波长228 nm,藁本内酯检测波长330nm,柱温35℃。以丁苯酞作为藁本内酯的替代对照品,在不同条件下测定相对校正因子,利用相对校正因子和替代对照品同时测定川芎中丁苯酞和藁本内酯的含量。结果:丁苯酞和藁本内酯进样量分别在0.01～0.2μg(r=0.9999)和0.1～2.0μg(r=0.9999)范围内与峰面积呈良好的线性关系,测得相对校正因子f’为1.0806,不同条件下相对校正因子的重现性良好,利用相对校正因子计算川芎中待测成分含量与外标法实测值之间没有明显差异。结论:用丁苯酞替代藁本内酯作为对照品,同时测定川芎中丁苯酞及藁本内酯的含量,解决了藳本内酯对照品不稳定的难题,该方法可用于川芎的质量控制。

替代对照品法在中药多指标含量测定中的应用与技术要求探讨

本文分析和归纳了替代对照品法的国内外应用情况及研究中存在的问题,定量方面提出相对校正因子为物质百分吸光系数之比,并以此为基础分析了影响定量准确度的因素,认为波长和对照品为影响定量的关键因素;比较了相对保留时间法和对照提取物定性法等7种定性方法的优缺点;在方法实用性方面,提出色谱仪校正和色谱柱相似度评价等可能的研究方向;为该法的后续研究提供参考。

HPLC替代对照品法同时测定莪术油及其注射液中6种成分的含量

目的:建立HPLC替代对照品法同时测定莪术油及其注射液中6种成分含量。方法:本文采用HPLC方法,在不同条件下测定=牛儿酮与其他5种成分(莪术二酮、莪术醇、莪术烯、呋喃二烯及β-榄香烯)间的相对校正因子(RCF)。以上述6种成分为指标,分别利用替代对照品法和常规含量测定方法对莪术油及其注射液进行含量测定。色谱条件:采用Waters Symme-try C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-水,梯度洗脱,流速1.0 mL.min-1,柱温30℃,检测波长215 nm。结果:以替代对照品法测得的结果与常规含量测定方法结果一致。结论:本试验在高效液相液相色谱仪上使用替代对照品法同时测定了莪术油及其注射液中的6种成分的含量,结果证明,本方法经济实用,可以高效、准确地对莪术油及其注射液进行质量控制。

替代对照品法测定连翘中连翘酯苷A和连翘苷的含量

目的:建立HPLC替代对照品法同时测量连翘中连翘酯苷A和连翘苷的含量。方法:选取连翘苷作为连翘含量测定对照品连翘酯苷A的替代对照品,在不同条件下测定替代对照品相对对照品的校正因子,利用校正因子和替代对照品连翘苷进行连翘中连翘酯苷A的含量测定。色谱条件:采用Agilent ZORBAX SB-C18(2)(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱,以乙腈(A)-0.3%的醋酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱[0～5 min,A-B(15∶85)→A-B(17∶83);5～10 min,A-B(17∶83)→A-B(20∶80);10～15 min,A-B(20∶80)→A-B(23∶77);15～20 min,A-B(23∶77)→A-B(25∶75)],流速0.8 mL·min-1,柱温25℃,检测波长230 nm。结果:连翘酯苷A和连翘苷进样浓度分别在0.08～0.62 mg·mL-1(r=0.9995)和0.012～0.08 mg·mL-1(r=0.9995)内与峰面积呈良好的线性关系,测得校正因子f=0.4761,用替代对照测定方法测得回收率(n=6)为99.20%。结论:本法使用替代对照品法测定了连翘中连翘酯苷A的含量,结果证明了替代对照品法用于连翘药材质量控制可行、实用。

超滤法结合替代对照品HPLC测定大蒜辣素与大鼠及人血浆的蛋白结合率

目的:测定大蒜辣素与大鼠及人血浆的蛋白结合率,为大蒜辣素的成药性研究提供参考。方法:以羟苯乙酯为替代对照品,采用C_(18)色谱柱,流动相甲醇-1%甲酸梯度洗脱,流速1.0 m L·min^(-1),检测波长254 nm,结合超滤法对大蒜辣素与大鼠及健康人血浆的蛋白结合率进行测定。结果:测得75,150,300 mg·L^(-1)大蒜辣素溶液与大鼠和人血浆蛋白结合率分别为23.2%,19.8%,28.1%及15.5%,25.8%,40.0%。结论:大蒜辣素与大鼠及人的血浆蛋白结合率均较低,替代对照品HPLC可用于测定大蒜辣素的血浆蛋白结合率。

替代对照品法测定龙血竭原料中龙血素A和B的含量

目的:建立替代对照品法同时测定龙血竭原料剑叶龙血树中龙血素A、B的含量。方法:提出了相对斜率的概念,解释了它与相对校正因子的数学关系,阐释了相对斜率(相对校正因子)的物理意义,进而采用相对斜率算法建立剑叶龙血树的含量测定法,并进行方法学验证。结果:方法的线性和回收率均良好;以龙血素A为参照,龙血素B的相对斜率和相对保留时间平均值为1.248和1.06,且在5个不同的色谱系统上保持稳定;相对斜率值与使用紫外分光光度计按吸光系数法测得值一致。结论:相对斜率算法简便、准确,以此进行替代对照品法测定剑叶龙血树中龙血素A、B是可行的。

替代对照品法测定新疆孕马尿中3种主要结合雌激素含量

目的建立HPLC替代对照品法测定新疆孕马尿中3种主要结合雌激素的含量。方法采用HPLC在不同条件下测定替代对照品雌酮硫酸钠对于马烯雌酮硫酸钠及17α-双氢马烯雌酮硫酸钠对照品的校正因子,利用校正因子和替代对照品雌酮硫酸钠测定孕马尿中3种主要结合雌激素的含量。结果以替代对照品法测得的结果与常规含量测定方法结果一致。结论在高效液相色谱仪上使用替代对照品法测定孕马尿中的3种主要结合雌激素的含量,此方法准确可靠,可节约检测成本。