腐乳在发酵过程中脂肪酶活力变化研究

研究了雅致放射毛霉脂肪酶的酶学特性及其脂肪酶活力在腐乳发酵过程中的变化,和对脂肪水解作用的程度。研究发现,雅致放射毛霉脂肪酶的最适作用温度为40℃,最适pH为7.0。对腐乳在发酵不同阶段的pH,酸值,脂肪含量以及脂肪酶活力的研究中发现,腐乳在毛坯阶段其脂肪酶活力最高,自盐坯阶段起,脂肪酶活力一直呈下降的趋势。而脂肪含量在白坯、毛坯和盐坯(扣除盐分重量)阶段基本保持不变,在后期发酵阶段呈现下降的趋势。pH随着后期发酵的进行呈现出下降的趋势,脂肪酸值则呈现出相反的趋势,逐步上升。

固定化胰蛋白酶的性质研究

目的 测定固定化胰蛋白酶的催化特性和部分稳定性。方法 在相同的条件下,测定固定化和可溶性胰蛋白酶的活力,得其最适作用pH值和最适作用温度,再测定活力,得到各自的米氏常数(Km)值;测得两种状态酶的热稳定性和酸碱稳定性。同时测定了固定化胰蛋白酶的低温稳定性。结果 固定化和可溶性胰蛋白酶的最适作用pH值分别为8 .0～9. 0和7. 0～9.0 ,最适作用温度分别为6 0℃和5 5℃,Km值分别为2 . 32 6、1 42. 9mg·ml-1 ;固定化胰蛋白酶在5 5℃条件下,保温5h ,仍有78 92 %的活性;在4℃条件下,8d后,活性才略微下降,两周活性保留达90 %以上;在pH 9.0的活性未下降,在pH 7.0～1 0 .0范围内也比较稳定(相对活性>80 %)。结论 胰蛋白酶经固定化后,最适作用pH值范围变窄,最适作用温度和Km值升高;

普鲁兰酶N467G突变体的酶学性质分析

在淀粉制糖工业中,普鲁兰酶通常与糖化酶配合使用,其在酸性pH和较高温度下的催化活力是影响淀粉脱支效率的主要因素。该研究通过对长野芽胞杆菌(Bacillus naganoensis)普鲁兰酶蛋白质解折叠自由能的差值(ΔΔG)的计算预测和突变位点稳定性分析,选择突变位点并进行定点突变,获得突变体N467G。与野生型普鲁兰酶分子相比,突变体N467G的最适作用温度提高至60℃,最适作用pH降低至4.5;其在60℃条件下孵育2.5 h或在pH 3.5~5.5孵育1 h残留酶活力均保持在80%以上,稳定性明显提高。此突变体的获得为其后续高效表达与工业化应用奠定了重要基础。

普鲁兰酶N端结构域CBM68对酶学性质的影响

碳水化合物结合模块(Carbohydrate Binding Modules,CBMs)在普鲁兰酶结构中普遍存在,对酶的催化性质起重要作用.本文将酸性普鲁兰酶Pul B的N端结构域CBM41-X45替换成耐热普鲁兰酶Pul A的N端结构域CBM68,得到重组酶Pul-11,同时将Pul-11的催化结构域替换成Pul A的催化结构域,得到重组酶Pul-12.结果显示,重组酶Pul-11和Pul-12的最适温度均较Pul B提高了10℃,最适pH分别提高了0.5和1;60℃下热稳定性分别提高了41.4%和44.0%;同时,重组酶Pul-11和Pul-12的底物亲和力和催化效率较Pul B也均有一定程度提高.可见,来源于耐热普鲁兰酶的新型底物结构域CBM68对普鲁兰酶的最适作用温度、最适作用pH及催化效率具有重要影响.