月华丸(胶囊)及其入血成分中地黄苷A、麦冬皂苷D和原百部碱的HPLC法测定

目的建立以高效液相色谱法同时测定月华丸(胶囊)及其含药血清中地黄苷A、麦冬皂苷D、原百部碱三种有效成分的方法,对月华丸(胶囊)及其含药血清进行质量控制。方法以地黄苷A、麦冬皂苷D和原百部碱为对照,采用Hypersil BDS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5um)。其中地黄苷A流动相∶乙腈∶水(6∶94),检测波长:203nm;麦冬皂苷D的流动相:乙腈∶水(48∶52),检测波长:208nm;原百部碱流动相:乙睛∶0.25%甲酸铵(25∶75),检测波长:305 nm。流速:1ml/min;柱温:35℃,进样量:20μl。结果按峰面积法计算,月华丸(胶囊)及其血中移行成分的地黄苷A、麦冬皂苷D和原百部碱的含量分别为0.276、0.161、0.508 mg/g和0.104、0.098、0.141mg/g。结论该方法可以用于月华丸(胶囊)及其入血成分的定性鉴定、定量测定和质量控制。

月华丸(胶囊)对耐多药结核菌感染自噬相关蛋白LC3的影响

目的:观察月华丸(胶囊)对结核分枝杆菌感染巨噬细胞自噬的影响,探寻其抗结核分枝杆菌的药效药理作用及其机制。方法:以月华丸(胶囊)含药血清干预感染结核分枝杆菌小鼠的单核巨噬细胞(RAW264. 7),实验共分为5组:阴性对照组、10%月华丸(胶囊)含药血清组、自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)+月华丸(胶囊)含药血清组、自噬诱导剂雷帕霉素(Rep)组,另设未被感染的细胞为正常组。采用免疫荧光染色法检测LC3。结果:阴性对照组细胞胞浆中未见LC3蛋白颗粒。与阴性对照组比较,3-MA+月华丸(胶囊)含药血清组细胞胞浆中可见少量LC3蛋白颗粒,10%月华丸(胶囊)含药血清组及Rep组细胞胞浆LC3蛋白颗粒均明显增多,3-MA+月华丸(胶囊)含药血清组多于10%月华丸(胶囊)含药血清组。结论:月华丸(胶囊)含药血清能诱导被耐多药结核菌感染巨噬细胞自噬。

月华丸(胶囊)及其拆方对巨噬细胞增殖影响的研究

目的:研究月华丸(胶囊)对小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)活性的影响,为后续研究月华丸(胶囊)对耐多药结核分支杆菌感染细胞自噬的影响提供前期实验基础。方法:取对数生长期的RAW264.7细胞,用10%胎牛血清培养制成的细胞悬液加入96孔培养板中培养。分别采用终浓度为1.25g/m L、0.63g/m L、0.32g/m L、0.16g/m L、0.125g/m L、0.063g/m L、0.032g/m L、0.016g/m L不含阿胶的月华丸(胶囊)以及相同浓度梯度含阿胶的月华丸(胶囊)处理RAW264.7细胞,并设不加药的对照组。以4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞存活情况。结果:(1)不含阿胶的月华丸(胶囊)在1.25g/m L、0.63g/m L浓度时对RAW264.7细胞增殖抑制率明显升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),表明不含阿胶的月华丸(胶囊)高浓度对巨噬细胞的增殖有一定的抑制作用。(2)含阿胶的月华丸(胶囊)对RAW264.7细胞增殖率明显升高,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05),提示含阿胶的月华丸(胶囊)对巨噬细胞的增殖有明显促进作用。(3)浓度为0.32g/m L的含阿胶月华丸(胶囊)对RAW264.7细胞增殖率最高,为最佳促细胞增长药液浓度。结论:月华丸(胶囊)能提高巨噬细胞的活力,增强巨噬细胞的增殖。