简图法理解标记有丝分裂百分率法测定细胞周期时间

一、细胞周期细胞周期是大概念“细胞的生存需要能量和营养物质,并通过分裂实现增殖”中的一个一般概念,对于连续分裂的细胞,从一次分裂完成时开始到下一次分裂完成时为止为一个细胞周期.一个细胞周期裂期,分裂间期占细胞周期的90%~95%,为分裂期进行活跃的物质准备,完成DNA分子的复制和有关蛋白质的合成,同时细胞有适度的生长,根据过程中的物质变化,分为G_(1)期、S期和G_(2)期(如图1);分裂期(M)则是把分裂间期复制得到的DNA平均分配到两个子细胞中的过程,根据染色体的行为分为前期、中期、后期和末期.

内体分选转运复合体:确保有丝分裂正确进行的分子机器

有丝分裂是真核细胞增殖的重要环节。内体分选转运复合体是与膜剪切过程密切相关的多蛋白复合体,其功能涉及内体成熟、病毒出芽、自噬等过程,其结构和功能异常与癌症等疾病发生发展密切相关。本文总结了内体分选转运复合体在细胞有丝分裂不同阶段所发挥的作用,以及内体分选转运复合体调控有丝分裂作用在疾病方面的研究进展。

线粒体分裂基因dnm1缺失对粟酒裂殖酵母细胞有丝分裂及能量代谢的影响

在粟酒裂殖酵母细胞中,线粒体分裂蛋白Dnm1是调控线粒体分裂和融合动态过程的关键蛋白.为研究酵母细胞dnm1基因缺失后对有丝分裂和能量代谢的影响,采用活细胞成像技术分析其细胞有丝分裂动力学的变化、RTqPCR技术分析cdc2和cdc13基因的转录水平、高效液相色谱质谱联用技术检测其能量代谢物的变化并验证.结果表明dnm1基因缺失后抑制裂殖酵母生长.活细胞成像显示dnm1Δ菌株在有丝分裂间期微管束长度较野生型增长了(0.83±0.70)μm(P<0.01),产生5根微管束的菌株增加、3根微管束的菌株减少.有丝分裂前期dnm1Δ菌株中纺锤体伸长时间延长(0.85±0.02)min(P<0.05),后期时间延长(5.80±1.62)min(P<0.01),后期纺锤体伸长速度减慢0.06μm·min^(-1)(P<0.05),且dnm1Δ菌株出现纺锤体延迟断裂和滞后的染色体分离.高效液相色谱质谱联用技术检测结果表明,dnm1Δ菌株存在辅酶合成缺陷,NADPH含量显著降低(P<0.05),中间代谢产物6-磷酸葡萄糖、6-磷酸果糖、柠檬酸、顺式乌头酸、丙酮酸、异柠檬酸和L-苹果酸相对含量显著降低(P<0.05),出现ATP产生障碍.验证结果显示代谢物分析结果可靠,且dnm1Δ菌株在对数生长期cdc2基因的表达量显著低于野生型.本研究为进一步探寻Dnm1蛋白在细胞有丝分裂中的功能和相关分子机制提供了一定的科学依据.

细胞有丝分裂前期检查点和结肠癌转移相关蛋白1表达与直肠癌新辅助同步放化疗敏感性关系的研究

目的:探讨细胞有丝分裂前期检查点(CHFR)和结肠癌转移相关蛋白1(MACC1)表达与直肠癌新辅助同步放化疗(nCRT)敏感性关系。方法:收集2017年3月至2022年2月秦皇岛市第一医院住院治疗的166例直肠癌患者病案资料,所有患者术前仅接受nCRT,其中放疗采用三维适形调强放疗,化疗采用Capeox方案,nCRT治疗4~6周后均顺利完成腹腔镜下全直肠系膜切除术。免疫组织化学SP染色法检测直肠癌及其癌旁组织CHFR和MACC1蛋白表达。根据美国癌症分期联合委员会肿瘤退化分级(TRG)标准,将nCRT后肿瘤退化分级(TRG)0~2级的75例患者纳入nCRT不敏感组,TRG为3~4级的91例患者纳入nCRT敏感组,比较两组患者治疗前后癌组织CHFR和MACC1蛋白表达水平,分析患者临床病理特征与nCRT敏感性关系,以及nCRT敏感性的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析CHFR和MACC1对直肠癌nCRT敏感性的预测价值。结果:直肠癌组织CHFR阳性表达率显著低于癌旁组织,MACC1阳性表达率显著高于癌旁组织(x^(2)=81.373、87.150,P<0.05)。166例患者nCRT治疗结束后,TRG为0级6例,1级8例,2级61例,3级59例,4级32例,nCRT敏感率为54.82%(91/166)。nCRT敏感组CHFR阳性表达率显著高于nCRT不敏感组,MACC1阳性表达率显著低于nCRT不敏感组(x^(2)=4.613、37.509,P<0.05)。nCRT敏感组T4分期占比高于nCRT不敏感组,N+分期占比高于nCRT不敏感组,差异有统计学意义(x^(2)=54.432、28.912,P<0.05)。CHFR和MACC1表达是影响直肠癌患者对nCRT敏感性的独立危险因素[OR=2.456(95%CI:1.294~4.563),OR=3.281(95%CI:1.472~6.479),P<0.05]。CHFR和MACC1联合检测预测直肠癌nCRT敏感性的灵敏度、特异度分别为65.89%和69.46%,联合检测预测、CHFR和MACC1单项检测的AUC分别为0.713,0.564和0.589,P<0.05。结论:CHFR和MACC1与直肠癌nCRT敏感性有关,即CHFR高表达和MACC1低表达患者对nCRT敏感性更高,故两者有可能成为预测直肠癌nCRT敏感性的指标。

细胞分裂周期蛋白73基因缺失抑制粟酒裂殖酵母细胞的有性生殖和有丝分裂

cdc73基因编码粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces Pombe)RNA聚合酶Ⅱ辅助因子Cdc73,参与G_(2)期检查点激活并调控细胞周期。但cdc73基因缺失对细胞有丝分裂动力学的调控尚不清楚。本研究采用活细胞成像、荧光蛋白标记技术探究粟酒裂殖酵母cdc73基因缺失后对细胞有性生殖和细胞有丝分裂中微管、肌动蛋白、线粒体和组蛋白动力学的影响。结果表明:在有性生殖中,cdc73基因缺失会导致子囊孢子长度增加14.23%,产4个孢子数量的细胞减少64.08%;活细胞成像结果分析发现,在有丝分裂中,分裂后期微管伸长的长度缩短11.21%,伸长时间减少17.39%;肌动蛋白环形成和收缩速率分别降低33.33%和26.09%,形成和收缩时间分别延长58.00%和40.38%;同时,肌动蛋白环、线粒体和组蛋白表达量都增加。本研究揭示了cdc73基因缺失可抑制有丝分裂中纺锤体的伸长,延缓肌动蛋白环的形成与收缩,为进一步探寻Cdc73蛋白在细胞分裂中参与调控微管和肌动蛋白动力学功能提供了一定的科学依据。

ubr1基因缺失对粟酒裂殖酵母有丝分裂动力学的影响

为探究粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中ubr1基因缺失后有丝分裂动力学的变化情况,采用荧光蛋白标记和活细胞成像技术分析ubr1基因缺失型(ubr1Δ)菌株和野生型(WT)菌株细胞形态和有丝分裂期的细胞动力学差异。结果显示,ubr1基因缺失后细胞长宽比变小,微管束数目增多,细胞形态出现短棒状和梨形。有丝分裂过程中18.5%的ubr1Δ菌株会错误形成双动粒,且有丝分裂后期纺锤体伸长长度较野生型菌株增加(1.58±0.76)μm,有丝分裂后期持续时间较野生型菌株延长(3.00±1.36)min。有丝分裂末期纺锤体出现鱼钩型和S型断裂,且纺锤体断裂延迟。同时,ubr1Δ菌株与野生型菌株相比肌动蛋白环初始直径增加(1.12±0.19)μm,形成时间延长(3.60±2.85)min,收缩时间延长(4.90±0.21)min,但收缩速度并无明显差异。研究结果可为明确ubr1基因在有丝分裂中的功能及分子机制提供科学依据。

基于“数据有丝分裂”的公共数据的确权与授权

现阶段,不同法律与政策性文件中存在政务数据、政府数据、社会数据、公共管理数据、公共服务数据等文字表述,同时存在联合使用等情况。对于公共数据的内涵与外延,尚未有任何法律文件对其界定。公共数据在推动数据经济发展、促进数据流通大循环方面发挥着至关重要的作用。与个人数据和企业数据所代表的民事权益不同,公共数据代表的是公共利益,前者更加侧重于数据的开发与利用,而后者则侧重于数据的开放与共享。据此,对于公共数据的确权与授权机制,拟从不同维度出发,首先探讨公共数据从何而来又因何而去的整个动态过程,在“关于谁的数据”与“由谁生产的数据”的分类基础上构建综合判断法,来对公共数据的内涵与外延进行界定。其次,通过对作为载体的数据与其所承载的信息内容之间的关系进行内部性分析,来构建“数据有丝分裂”理论进而突破“一物多权”或共享数据产权的理论困境,为公共数据的确权与授权提供基础。最后,通过构建以控制与管理为主导的数据产权,对包括公共数据在内的所有数据构建确权与授权机制,以保障公共数据能够被高效利用与循环,促进数据经济的高质量发展。

根尖分生组织细胞的有丝分裂实验改进

“观察根尖分生组织细胞的有丝分裂”是细胞分裂的重要实验内容。该实验的成功率低,教学效果差。通过对比实验结果,创新使用改良的苯酚品红作为染色剂,观察染色体效果较好;并在此基础上,又采用10-10mol/L生长素处理大蒜根尖细胞,能明显提高有丝分裂细胞数,尤其是中后期细胞的数目,实验效果好。

观察根尖分生区细胞的有丝分裂实验改进

“观察根尖分生区细胞的有丝分裂”实验的开课率较低,往往达不到预期的教学效果。本文针对教材中实验的不足之处进行探索改进,选择小葱作为实验材料,并通过对实验步骤的改进,实现了分裂相更明显、细胞更分散、操作更简捷、实验时间更短、观察时间更充分、染色更清晰和成功率更高的实验效果。

黄芪颗粒联合微RNA-30a对肾病综合征小鼠肾组织中内质网应激相关蛋白、有丝分裂原活化蛋白激酶蛋白和血清炎症因子水平的影响

目的探讨黄芪颗粒联合微RNA(miR)-30a对肾病综合征小鼠内质网应激、炎症水平和有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白表达的影响。方法将50只小鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(n=40)。模型组小鼠经尾静脉注射阿霉素溶液(7.5 mg·kg^(-1))制备原发性肾病综合征(PNS)模型,对照组小鼠经尾静脉注射等体积的生理盐水。造模成功后将模型组小鼠随机分为PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组,每组10只。黄芪组小鼠灌胃黄芪颗粒冲剂(20 mg·g^(-1)),每日2次;miR-30a组小鼠经尾静脉注射miR-30a antagomir(10 mg·kg^(-1)),每周1次;黄芪+miR-30a组小鼠灌胃黄芪颗粒冲剂(20 mg·g^(-1),每周1次),同时经尾静脉注射miR-30a antagomir(10 mg·kg^(-1));模型组和对照组小鼠灌胃与黄芪组等量的生理盐水,每日1次;各组小鼠均干预4周。于给药0、2、4周时检测各组小鼠24 h尿蛋白;于末次给药24 h后,应用全自动生物化学分析仪检测各组小鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平,采用酶联免疫吸附试验法检测各组小鼠血清中白细胞介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,苏木精-伊红染色观察各组小鼠肾组织病理学变化,免疫组织化学法检测各组小鼠肾组织中糖调节蛋白-78(GRP-78)和激活转录因子6(ATF6)的表达,Western blot法检测各组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、线粒体外活化蛋白激酶(ERK)、磷酸化线粒体外活化蛋白激酶(p-ERK)蛋白表达。结果PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠给药0、2、4周时24 h尿蛋白显著高于对照组(P<0.05)。给药2、4周时,黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠的24 h尿蛋白显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠的24 h尿蛋白比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠24 h尿蛋白显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平显著高于对照组(P<0.05);黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05);黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。对照组小鼠肾小球排列规则,无明显炎症细胞浸润;PNS组小鼠肾小球排列不规则,有大量炎症细胞浸润到肾间质;与PNS组相比,黄芪组和miR-30a组小鼠肾组织病理学变化得到明显改善,肾间质炎症细胞浸润明显减少;黄芪+miR-30a组小鼠肾间质偶见炎症细胞。PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值显著高于对照组(P<0.05);黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。结论黄芪颗粒联合miR-30a可显著降低肾病综合征小鼠内质网应激,减轻炎症反应,抑制肾组织中MAPK蛋白的表达。

有丝分裂结束后细胞代谢通路重启过程探析

能量物质氧化过程和基因表达过程是细胞内的两个核心过程,二者之间相互作用是细胞中各种生命现象的基础。有丝分裂是细胞增殖的基础,有丝分裂结束后,细胞需要对能量代谢过程和基因表达过程进行重启。细胞内存在三种重启代谢过程的模式:葡萄糖主导的代谢通路重启;氨基酸主导的代谢通路重启;脂质主导的代谢通路重启。其中葡萄糖主导的代谢通路重启是顺应能量物质氧化梯度的重启模式,是细胞的最优选择。基因表达过程重启滞后于代谢通路重启。在代谢通路重启过程中,能量物质氧化和基因表达间的正反馈推动细胞分化。细胞内代谢通路重启过程中存在抵抗病毒入侵的时间窗。

细胞有丝分裂前期检查点过表达对鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用及机制研究

目的探究细胞有丝分裂前期检查点(checkpoint with forkhead-associated and ring finge,CHFR)对鼻咽癌(NPC)5-8F细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用,并探究可能的机制。方法将重组慢病毒LV-CHFR及空载体慢病毒-绿色荧光蛋白质粒(LV-GFP)作为阴性对照导入5-8F细胞中,构建LV-CHFR/5-8F重组细胞,激光共聚焦显微镜观察细胞感染效率;将裸鼠随机分为3组(每组5只):空白对照组(接种0.2 ml未感染病毒的5-8F细胞悬液)、阴性对照组(接种0.2 ml稳转株LV-GFP/5-8F细胞悬液)、过表达CHFR组(接种0.2 ml稳转株LV-CHFR/5-8F细胞悬液),并绘制肿瘤生长曲线图;免疫组化法检测瘤体组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Polo样激酶1(polo like kinase 1,PLK1)蛋白表达情况;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组瘤体组织中细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组瘤体组织中PLK1、CHFR、细胞周期素B(CyclinB1)、细胞周期蛋白(CyclinB1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDC2)蛋白表达。结果随处理时间(9、12、15、18、21 d)延长,过表达CHFR组各时间点裸鼠瘤体体积均小于空白对照组、阴性对照组(F=7.872、5.778、6.717、70.020、11.782,P=0.007、0.011、0.010、0.001)。免疫组化检测显示,在空白对照组、阴性对照组裸鼠移植瘤组织中PLK1呈强阳性,在过表达CHFR组中,裸鼠移植瘤组织中PLK1表达呈弱阳性。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤细胞凋亡率升高(P<0.005)。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤细胞凋亡率升高(F=355.256,P=0.000)。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤组织中PLK1、Cyclin B1、CDC2蛋白水平均降低(F=5.201、2.0304、129.946,P=0.024、0.142、0.000),CHFR蛋白水平升高(F=38.919,P=0.000)。结论过表达CHFR对NPC 5-8F细胞裸鼠移植瘤生长有一定抑制作用,可能与抑制PLK1通路活化有关。

有丝分裂激酶Aurora B对染色体形态变化的影响

目的探究有丝分裂激酶Aurora B对HeLa细胞染色体形态变化影响及其可能的作用机制。方法在HeLa细胞中加入二甲基乙酰胺(DMA),观察染色体形态的变化;将HeLa细胞分为A、B组,分别加入DMSO和Aurora B激酶抑制剂处理,应用Western blot检测两组组蛋白H3 S10的磷酸化水平,利用免疫荧光技术、活细胞成像和细胞染色体分离实验检测两组细胞的染色体形态变化;在B组细胞处理的基础上加入磷酸酶抑制剂处理(C组),利用免疫荧光技术检测磷酸酶对染色体形态变化的影响;使用小干扰RNA(siRNA)筛选Aurora B激酶的底物蛋白。结果A组和B组细胞中组蛋白H3 S10磷酸化水平比较差异有显著性(t=23.58,P<0.05)。B组加入Aurora B激酶抑制剂处理30、60、90 min时染色体聚集细胞数量较A组显著增多,差异具有统计学意义(F=379.28~738.73,P<0.05),抑制Aurora B激酶能够促进染色体的聚集。A组、B组、C组染色体聚集的细胞数量差异有显著性(F=969.20,P<0.05),其中C组明显低于B组(t=22.41,P<0.05)。siRNA筛选结果显示,染色体上可能存在多种Aurora B激酶的底物蛋白影响染色体的形态变化。结论有丝分裂激酶Aurora B通过磷酸化多种底物蛋白使染色体处于分散状态,而磷酸酶则发挥去磷酸化作用促进染色体的聚集,两者协同调控有丝分裂染色体的形态变化。

粟酒裂殖酵母SPAC27E2.11c基因缺失对有丝分裂期微管动力学的影响

SPAC27E2.11c基因编码的是一种尚未被正式命名的粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)特异性蛋白,该蛋白定位于线粒体质膜外侧.采用活细胞成像技术,研究粟酒裂殖酵母SPAC27E2.11c基因缺失后有丝分裂不同时期微管动力学的变化情况.结果表明:SPAC27E2.11c基因缺失导致间期含5根微管束的细胞比例增加,含3根微管束的细胞比例减少,并出现含2根微管束的细胞;间期微管束长度增加,收缩速率降低,且微管束在细胞壁停留时间延长;前期“棒状”纺锤体形成减少并出现单极纺锤体;中期纺锤体伸长速率降低,伸长时间延长,提示纺锤体组装检查点被激活;后期纺锤体“拱型”断裂减少,“直线型”断裂增加,“S型”断裂消失.SPAC27E2.11c基因缺失还导致染色体不完全分离向细胞两极及染色体分离后细胞不分裂的异常情况.以上结果表明SPAC27E2.11c基因缺失导致间期微管动力学失衡,分裂期纺锤体形成和断裂缺陷及染色体分离缺陷.

有丝分裂实验的好材料——葱和大蒜的茎尖

本文通过对有丝分裂实验材料的改进,将人教版教材中洋葱或大蒜的根尖改为葱或大蒜的茎尖进行实验。实验发现,葱的茎尖及大蒜鳞芽形成期前的茎尖均可作为实验材料且分裂相明显。结果表明,葱或大蒜的茎尖比根尖易获取,且制成的装片可观察到更多分裂相。

淫羊藿苷通过诱导细胞有丝分裂灾变抑制外阴鳞癌SW962细胞增殖

目的:探讨淫羊藿苷(ICA)能否抑制外阴鳞癌SW962细胞增殖及其潜在机制。方法:选取外阴鳞癌SW962细胞系为研究对象,ICA处理后,通过相差显微镜及HE染色、DAPI染色方法观察细胞形态变化;MTT法检测细胞增殖;免疫荧光法检测α-微管蛋白(α-tubulin)和波形蛋白(Vimentin)表达及分布;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测有丝分裂灾变及凋亡相关蛋白表达。结果:ICA诱导SW962细胞核发生多核分裂,抑制细胞活性,并将细胞阻滞在G 2/M期。免疫荧光检测结果显示α-tubulin和Vimentin蛋白呈多极分布并凝聚在细胞核周围。ICA在12 h内显著上调有丝分裂相关蛋白Chk1、CDK1、cyclinB1和cdc25c表达,但在24~48 h持续下降。凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达持续升高。结论:ICA可诱导外阴鳞癌SW962细胞发生有丝分裂灾变,抑制细胞增殖,最终导致细胞凋亡。

蛋白磷酸酶1调节亚基14B对神经母细胞瘤细胞有丝分裂进程的调控作用

目的 研究蛋白磷酸酶1调节亚基14B(PPP1R14B)对神经母细胞瘤(NB)细胞有丝分裂进程的调控作用,为其治疗提供潜在新靶标。方法 在NB细胞SK-N-BE(2)-M17中转染2条不同序列小干扰RNA(siRNA)(PPP1R14B siRNA#1和#2)敲低PPP1R14B,实时定量PCR和Western印迹法检测PPP1R14B的敲低效果。在SK-N-BE(2)-M17 GFP-H2B细胞中转染PPP1R14B siRNA#1和#2,Time-lapse活细胞成像技术动态监测敲低PPP1R14B对该细胞有丝分裂进程的影响。采用酶切克隆法构建靶向PPP1R14B的2条不同序列短发夹RNA(shRNA)(sh PPP1R14B#1或#2)慢病毒质粒,并感染SK-N-BE(2)-M17细胞建立PPP1R14B稳定敲低细胞,Western印迹法检测其敲低效果,克隆形成实验观察敲低PPP1R14B对SK-N-BE(2)-M17细胞生长的影响。基于GEO数据库的临床数据,按NB不同临床分期分组,分析各组样本中PPP1R14B mRNA表达水平及其与预后的相关性。结果 与转染对照siRNA相比,转染PPP1R14B siRNA#1和#2均可有效敲低SK-N-BE(2)-M17细胞中PPP1R14B mRNA和蛋白表达(P<0.01)。Timelapse活细胞成像结果显示,与转染对照siRNA相比,转染PPP1R14B siRNA#1和#2组SK-N-BE(2)-M17GFP-H2B细胞有丝分裂期时间延长(P<0.05),且主要是有丝分裂前中期时间显著延长(P<0.01)。Western印迹法结果显示,与转染对照shRNA相比,转染sh PPP1R14B#1和#2均可有效敲低SK-N-BE(2)-M17细胞中PPP1R14B蛋白表达(P<0.01);克隆形成实验结果表明,转染sh PPP1R14B#1或#2稳定敲低组细胞克隆形成数亦明显降低(P<0.01)。GEO数据库分析显示,PPP1R14B mRNA表达水平与NB恶性程度呈正相关,与患者预后呈负相关。结论 敲低PPP1R14B导致SK-N-BE(2)-M17细胞有丝分裂期阻滞和生长减慢,PPP1R14B在NB发生发展中发挥重要作用。

Supervillin isoform 4(SV4)通过增强Aurora A活性调控细胞有丝分裂

有丝分裂是真核生物进行细胞增殖的主要方式,染色体复制与准确分离对于有丝分裂的顺利进行至关重要。Supervillin是一种细胞膜与微丝肌动蛋白结合蛋白质,前期研究发现,其通过调控F-肌动蛋白、肌球蛋白II在细胞分裂过程中的皮层分布动态变化,从而保证肌动蛋白-肌动蛋白环组成收缩环并正确分布以及参与胞质分裂的最终完成,但不清楚在分裂中期是否有功能。Supervillin蛋白有多个剪接异构体,supervillin isoform 4(SV4)是其中分子量最大的一种剪接异构体。本研究利用RNA干扰方法敲低SV 4在细胞中的表达,通过实时显微成像、免疫荧光染色等技术,对细胞有丝分裂的动态进程及星极纺锤体形态进行了检测和观察,初步解析SV4调控细胞有丝分裂的潜在分子机制。结果显示,敲低SV 4后细胞分裂异常:细胞有丝分裂从中期到后期退出的时间出现延迟(P<0.001),由中心体介导的微管动态组装异常,以及出现多极纺锤体的细胞数量增多2倍,中心体内的γ-微管蛋白信号减少(P<0.001)等。通过GST pull down和质谱鉴定实验,发现SV4与Aurora A相互结合,SV4调节有丝分裂期间细胞中Aurora A在中心体的定位与活化。综上所述,supervillin蛋白在细胞有丝分裂进程中发挥着重要作用,异构体SV4在分裂中期,通过与Aurora A激酶的相互作用并募集其在中心体的正确定位与激活,从而调节纺锤体的完整性维持以及γ-微管蛋白的募集,促进双极纺锤体的微管正确组装,保证染色体的准确分离和有丝分裂的顺利进行。

半乳糖代谢酶uge1基因的缺失导致裂殖酵母有丝分裂中细胞动力学的变化

uge1基因编码一种参与半乳糖代谢的酶,对细胞生长和有性繁殖等有着重要作用.该文以裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)为材料,采用激光共聚焦活细胞成像的方式首次探究了uge1基因缺失对有丝分裂的分裂期染色体、纺锤体、肌动蛋白动力学的影响.对间期微管的观察结果显示,uge1Δ细胞中含有5根微管的细胞比例增加.有丝分裂期的染色体、纺锤体动力学结果表明,uge1基因缺失会导致染色体分离异常、单极纺锤体的出现、纺锤体从形成到解聚的时间显著增加.uge1基因缺失还会影响裂殖酵母有丝分裂前期和后期纺锤体伸长.纺锤体形成类型显示,uge1Δ细胞中“棒状”纺锤体的比例显著降低,而“点状”纺锤体比例则显著增加.uge1Δ细胞的形态相较野生型细胞有显著变化,表现为长度增加及长宽比增加.肌动蛋白动力学跟踪结果表明,uge1Δ细胞中肌动蛋白束长度、从聚合到解聚的时间、停留时间和收缩时间均显著增加,而肌动蛋白从聚合到解聚的速率显著降低.以上结果表明,uge1基因缺失会导致有丝分裂染色体、纺锤体及肌动蛋白动力学缺陷.

驱动蛋白KIF14与有丝分裂及肿瘤关系的研究进展

驱动蛋白KIF14是一种马达蛋白,依靠ATP水解酶的活性,向微管正极末端运动。在细胞内,KIF14参与物质运输、纤毛发生和细胞有丝分裂等过程。近年来的研究表明,在细胞质分裂的不同阶段KIF14通过与多种蛋白质相互作用来调控有丝分裂的进程。KIF14的表达异常会导致细胞有丝分裂失常,造成细胞基因组不稳定,而基因组的不稳定是导致肿瘤发生的重要原因。KIF14与多种肿瘤的发生发展密切相关,并且与肿瘤细胞的迁移、侵袭和对药物的敏感性有关,其已成为肿瘤早期诊断、治疗和预后评估的潜在靶点,因此,开发靶向KIF14的抑制剂,将为肿瘤的临床治疗提供新药物。