黄芪颗粒联合微RNA-30a对肾病综合征小鼠肾组织中内质网应激相关蛋白、有丝分裂原活化蛋白激酶蛋白和血清炎症因子水平的影响

目的探讨黄芪颗粒联合微RNA(miR)-30a对肾病综合征小鼠内质网应激、炎症水平和有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白表达的影响。方法将50只小鼠随机分为对照组(n=10)和模型组(n=40)。模型组小鼠经尾静脉注射阿霉素溶液(7.5 mg·kg^(-1))制备原发性肾病综合征(PNS)模型,对照组小鼠经尾静脉注射等体积的生理盐水。造模成功后将模型组小鼠随机分为PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组,每组10只。黄芪组小鼠灌胃黄芪颗粒冲剂(20 mg·g^(-1)),每日2次;miR-30a组小鼠经尾静脉注射miR-30a antagomir(10 mg·kg^(-1)),每周1次;黄芪+miR-30a组小鼠灌胃黄芪颗粒冲剂(20 mg·g^(-1),每周1次),同时经尾静脉注射miR-30a antagomir(10 mg·kg^(-1));模型组和对照组小鼠灌胃与黄芪组等量的生理盐水,每日1次;各组小鼠均干预4周。于给药0、2、4周时检测各组小鼠24 h尿蛋白;于末次给药24 h后,应用全自动生物化学分析仪检测各组小鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、血尿素氮(BUN)和血肌酐(Scr)水平,采用酶联免疫吸附试验法检测各组小鼠血清中白细胞介素(IL)-6、IL-8和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,苏木精-伊红染色观察各组小鼠肾组织病理学变化,免疫组织化学法检测各组小鼠肾组织中糖调节蛋白-78(GRP-78)和激活转录因子6(ATF6)的表达,Western blot法检测各组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、线粒体外活化蛋白激酶(ERK)、磷酸化线粒体外活化蛋白激酶(p-ERK)蛋白表达。结果PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠给药0、2、4周时24 h尿蛋白显著高于对照组(P<0.05)。给药2、4周时,黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠的24 h尿蛋白显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠的24 h尿蛋白比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠24 h尿蛋白显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平显著高于对照组(P<0.05);黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠血清中TC、TG、BUN、Scr水平显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著高于对照组(P<0.05);黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠血清中IL-6、IL-8、TNF-α水平显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。对照组小鼠肾小球排列规则,无明显炎症细胞浸润;PNS组小鼠肾小球排列不规则,有大量炎症细胞浸润到肾间质;与PNS组相比,黄芪组和miR-30a组小鼠肾组织病理学变化得到明显改善,肾间质炎症细胞浸润明显减少;黄芪+miR-30a组小鼠肾间质偶见炎症细胞。PNS组、黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值显著高于对照组(P<0.05);黄芪组、miR-30a组和黄芪+miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值显著低于PNS组(P<0.05);黄芪组与miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值比较差异无统计学意义(P>0.05);黄芪+miR-30a组小鼠肾组织中GRP-78、ATF6蛋白相对表达量及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK比值显著低于黄芪组和miR-30a组(P<0.05)。结论黄芪颗粒联合miR-30a可显著降低肾病综合征小鼠内质网应激,减轻炎症反应,抑制肾组织中MAPK蛋白的表达。

支架蛋白对丝裂原活化蛋白激酶信号途径中震荡的抑制

通过一种两体支架蛋白参与的丝裂原活化蛋白激酶 (mitogen activatedproteinkinase,MAPK)信号转导模型 ,研究了支架蛋白参与的存在负反馈的MAPK信号转导途径 .支架蛋白(scaffoldprotein)既可以促进信号过程 ,也可以抑制信号的转导 .由系统中支架蛋白的浓度以及支架与信号分子的相互作用共同决定了增加支架浓度造成的不同结果 .不仅如此 ,系统中支架蛋白浓度的增加 ,还会抑制负反馈系统中出现的持续震荡 .

有丝分裂原激活的蛋白激酶作用激酶抑制剂研究进展

有丝分裂原激活的蛋白激酶作用激酶(MNK)对真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)209位丝氨酸的磷酸化作用与肿瘤相关mRNA的翻译起始过程密切相关,在肿瘤的发生、转移等过程中具有重要作用,MNK已经逐渐成为抗肿瘤的重要靶标。近年来MNK小分子抑制剂的开发已受到了研究人员的关注,因此本文在总结MNK的结构和信号转导机制的基础上,对MNK小分子抑制剂的研究进展进行综述。

p38信号通路激活与肾小球硬化的研究进展

肾小球硬化是各种肾小球疾病发展的最终结局，是慢性。肾小球肾炎进展的主要原因。细胞内信号通路在肾小球硬化中的作用是目前研究的热点。MAPK（有丝分裂原激活的蛋白激酶）是调节细胞内一系列病理、生理功能改变的重要信号通路，p38MAPK通路在炎症、应激、细胞周期、凋亡等多种细胞生理／病理过程发挥着重要的作用，本文综述如下。

丝氨酸526位点在MEKK3介导的IL-1信号途径中的作用

目的:确定MEKK3分子中介导IL-1信号途径的关键性氨基酸.方法:对哺乳动物MEKK3活性环526位点的丝氨酸进行人工诱变后,用瞬时转染的方法分别将526A基因单独及与TRAF6基因同时导入GES-1细胞中;用免疫印迹、NF-κB荧光素酶报告基因测定及免疫沉淀实验检测了526A突变体的表达水平、对IL-1及TRAF6介导的NF-κB基因的表达及MEKK3与TRAF6相互作用的影响.结果:通过与野生型MEKK3的对比,观察到526A不但阻断了IL-1及TRAF6介导的依赖于MEKK3的NF-κB基因的激活,同时阻断了TRAF6与MEKK3的相互作用.结论:526位点的丝氨酸在MEKK3介导的IL-1信号途径中起关键性的作用,是不可缺少的关键性氨基酸.

瑞舒伐他汀对内皮细胞中组织因子途径抑制物表达的影响

目的探讨瑞舒伐他汀对组织因子途径抑制物(TF-PI)表达的调节作用及机制。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),给予多种剂量的瑞舒伐他汀和(或)肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)抑制剂与激活剂处理细胞,利用实时定量PCR、Western blot技术检测内皮细胞中TFPI表达的变化。结果 TNF-α下调内皮细胞中TFPI的的表达水平,而这一作用被瑞舒伐他汀所阻断。而且,瑞舒伐他汀呈时间及剂量依赖性上调TFPI的mRNA与蛋白水平。AMPK抑制剂———Compoud C则可逆转瑞舒伐他汀对TFPI表达的上调作用,而AMPK激动剂———Aicar则具有与瑞舒伐他汀相似的上调TFPI的作用。结论瑞舒伐他汀通过激活AMPK途径上调血管内皮细胞中TFPI的表达。

支架蛋白——信号转导系统中的分子胶水

信号转导系统存在一种本身不具备酶活性的蛋白质———支架蛋白 .它能同时结合两个或多个蛋白质 .支架蛋白的作用类似分子胶水 ,将功能相关的蛋白粘合在一起 。

二甲双胍调节内皮细胞组织因子途径抑制物的表达

组织因子途径抑制物（tissue factor pathway inhibitor,TF-PI）高表达于血管内皮细胞表面,特异性抑制外源性凝血途径,是一种控制凝血启动的抗凝蛋白。血栓形成是糖尿病的主要并发症之一。糖尿病患者血糖持续升高,导致糖基化终末产物（advanced glycosylation end products,AGEs）的生成。AGEs水平可上调组织因子,促进血栓形成。

低聚原花青素对过度训练大鼠骨骼肌损伤的保护作用机制

为研究低聚原花青素对过度训练大鼠骨骼肌损伤的保护作用机制,将大鼠随机分为安静对照组(C)、过度训练组(OM)、低聚原花青素干预组(OOM)。C组无运动干预,其他组采用42 d递增负荷跑台训练。训练期间, OOM组每天灌胃低聚原花青素1次(150 mg/kg, 5 m L/kg),其他组给予等体积蒸馏水。末次训练后即刻取材,经HE染色后观察骨骼肌组织形态,采用免疫组化法、酶联免疫法、放射免疫法等方法检测相关生化指标:血清睾酮(testosterone, T)、皮质酮(corticosterone, Cor)、肌酸激酶(creatine kinase, CK)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH);骨骼肌p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase, p38 MAPK)及其磷酸化蛋白质、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine, 3-NT)和8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2-deoxyguanosine, 8-OHdG)。结果显示:低聚原花青素干预可以改善过度训练所致骨骼肌组织形态学改变,显著提高血清T/Cor比值及骨骼肌SOD活性(P<0.01),降低骨骼肌p38 MAPK/p-p38 MAPK水平、血清CK活性(P<0.05)及骨骼肌MDA、3-NT、8-OHdG含量(P<0.05或P<0.01)。实验结果表明低聚原花青素通过改善氧化应激,调控p38 MAPK信号通路相关蛋白质表达,保护过度训练大鼠骨骼肌结构/功能。

体外顺铂诱导肝癌 SMMC- 7721细胞凋亡时细胞信号转导因子活性变化

目的 体外使用顺铂诱导肝癌 SMMC- 772 1细胞凋亡 ,检测细胞转导因子 MAPKs及转录因子 (JUN,CREB)活性的变化 .方法 采用免疫细胞化学法和流式细胞术法 .结果 15 m g· L- 1 顺铂作用肝癌 SMMC- 772 1培养细胞 4 8h可观察到明显的凋亡峰 ,72 h免疫细胞化学染色发现胞质或(和 )胞核中 MAPKs(JIN/ SAPKs,p38MAPK,ERK)及转录因子 (JUN,CREB)均有明显表达 .结论 在体外顺铂诱导肝癌 SMMC- 772 1细胞凋亡过程中 ,MAPKs途径 (JIN/ SAPKs,p38MAPK,ERK)及转录因子 (JUN,CREB)参与诱导了细胞凋亡 .

五味子甲素通过MAPK/ERK途径拮抗黑素细胞中黑素生成的机制研究

目的:探讨五味子甲素通过丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)/胞外信号调节激酶(ERK)途径拮抗黑素细胞中黑素生成的机制。方法:设人表皮黑素细胞组,五味子甲素低、中及高剂量组(125、250及500μmol/mL)。培养结束后,采用噻唑蓝法测定细胞活力,流式细胞仪评估细胞凋亡指数,黑素制备标准曲线测定黑色素合成能力,酶联免疫吸附试验测定酪氨酸酶水平,逆转录聚合酶链反应及蛋白质印迹法测定细胞MAPK、ERK mRNA和蛋白表达水平。结果:与人表皮黑素细胞组比较,五味子甲素低、中及高剂量组的吸光度(OD)值、存活率、黑素合成水平和酪氨酸酶水平均降低,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着五味子甲素剂量的升高,人表皮黑素细胞OD值、存活率、黑素合成水平和酪氨酸酶水平逐渐降低,五味子甲素各剂量组呈剂量-效应趋势(P<0.05)。与人表皮黑素细胞组比较,五味子甲素低、中及高剂量组细胞凋亡率,MAPK、ERK mRNA和蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);且随着五味子甲素剂量的升高,人表皮黑素细胞凋亡率,MAPK、ERK mRNA和蛋白表达水平逐渐升高,五味子甲素各剂量组呈剂量-效应趋势(P<0.05)。结论:五味子甲素能抑制黑素细胞增殖,促进黑素细胞凋亡,进而抑制黑素生成;其机制可能与五味子甲素促进人表皮黑素细胞MAPK、ERK mRNA和蛋白表达,进而激活MAPK/ERK途径有关。

白介素1-β对人肺腺癌细胞COX-2表达的作用及调节机制(英文)

目的探讨细胞因子白介素-1β(IL-1β)对人肺腺癌细胞株A549细胞环氧合酶2(COX-2)表达的影响及调节机制。方法A549细胞培养达80%融合后,用不同浓度的IL-1β(0、0.1、1、5和10ng/mL)干预或用5ng/mLIL-1β干预不同时间(0、3、6、9、12和24h)观察白介素-1β(IL-1β)对A549细胞COX-2表达的影响;用5ng/mLIL-1β与有丝分裂原激活的细胞外调节激酶(ERK)抑制剂PD098059、P38有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)抑制剂SB203580、蛋白激酶C(PKC)抑制剂H-7共同干预A549细胞观察IL-1β诱导A549细胞COX-2表达的信号传导途径;用COX-2系列报告基因质粒及对照质粒转染A549细胞后予以IL-1β干预,以不加IL-1β干预的细胞为对照组观察IL-1β对COX-2启动子的影响;Westernblot检测COX-2蛋白表达,RT-PCR检测COX-2mRNA表达。COX-2报告基因活性应用荧光素酶活性分析法测定。结果A549细胞COX-2蛋白表达和mRNA表达呈IL-1β浓度依赖性表达增加,干预9h表达达高峰;SB203580、H-7可明显抑制IL-1β诱导A549细胞COX-2表达,PD098059对IL-1β诱导A549细胞COX-2表达无影响;IL-1β对COX-2报告基因无影响。结论PKC途径和P38MAPK途径参与IL-1β诱导A549细胞COX-2蛋白表达。

阻断p38信号转导通路对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究老年大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡与p38信号转导通路的关系,明确以p38为靶向的信号转导在VSMCs中的分子调控机制。方法:将p38特异性抑制剂SB203580(25μmol/L)作用于大鼠VSMCs,运用MTT比色法检测细胞增殖状态,流式细胞术检测SB203580对细胞凋亡的影响,Western blot法检测药物作用前后p38通路相关蛋白p38α、MKK3、GADD153和c-myc的表达及相关蛋白磷酸化活性。结果:SB203580可以时间、剂量依赖的方式抑制VSMCs增殖促进其凋亡。加入SB203580的VSMCs中p-p38α、GADD153和c-myc表达的水平,随作用时间的延长而下降(P<0.01)。结论:阻断p38信号转导通路可能通过下调其下游靶基因GADD153和C-myc的表达,抑制血管平滑肌细胞增殖,促进其凋亡。

反义PKCζ对角质形成细胞增殖的调节

目的:探讨角质形成细胞中,反义蛋白激酶Cζ与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和细胞外信号调节激酶ERK1/2信号转导网络以及与核因子NF-κB的相互作用关系。方法:通过细胞原位杂交、间接免疫荧光和激酶活性测定方法,研究反义PKCζ抑制角质形成细胞增殖的信号转导机制。结果:表达反义PKCζ的角质形成细胞中,PI3K的基因表达显著下调,ERK1/2和NF-κB的核内表达水平以及ERK1/2的激酶活性明显降低。结论:表达反义PKCζ可通过下调PI3K和ERK1/2信号通路抑制角质形成细胞的增殖。

慢病毒介导RNAi沉默IL-1 Ⅰ型受体在大鼠骨关节炎MAPK信号转导中的作用

目的观察慢病毒介导的RNAi沉默IL-1Ⅰ型受体对实验性大鼠膝骨关节炎(osteoarthritis,OA)中的丝裂素原激活的蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)途径的影响,探讨IL-1和MAPK在OA中的作用。方法40只SD大鼠随机分为A～D4组,每组10只。A～C组行单侧前交叉韧带和内侧半月板前1/3切除术,分别于术后第7和9天,A组关节腔中注射慢病毒介导IL-1Ⅰ型受体有效RNA干扰片段,B组注射慢病毒介导IL-1Ⅰ型受体无效RNA干扰片段,C组单纯注射生理盐水。D组为正常动物不做处理。术后4周处死动物,对关节软骨的状况进行评分。取膝关节软骨组织,用Western blot方法检测软骨组织中p38、ERK1/2和JNK1/2的蛋白质表达水平。结果大体观察显示:A组软骨退行性变显著轻于B、C组(P<0.05),但高于D组(P<0.05)。Western blot显示,A组p38蛋白质表达水平显著低于B、C组(P<0.05),与D组没有显著性差异(P>0.05)。A组ERK1/2和JNK1/2的表达显著低于B、C组(P<0.05),但要显著高于D组(P<0.05)。结论慢病毒介导RNA干扰沉默IL-1Ⅰ型受体能抑制MAPK的表达,特别是对其中的p38蛋白质抑制更为明显。

脑膜炎奈瑟菌W_(135)菌群和炭疽芽胞杆菌

由于国际旅游业的发展,自2001年1月以来,一种十分少见的脑膜炎双球菌W135菌群引起的化脓性脑脊髓膜炎在很多国家和地区广为流行,而自2001年美国9.11恐怖事件后,有关以炭疽杆菌为生物恐怖活动工具的报道一时甚嚣尘上。鉴于这两种菌医院检验科的同行接触不多,本文特将收集到的资料作一简要介绍。

p38 Mitogen-Activated Protein Kinase Is Required for Central Nervous System Myelination

p38MAPKs是一个激酶家族,负责调节包括细胞迁移、增生和分化在内的多种细胞功能。本文主要介绍p38对少突胶质细胞分化的调节作用。采用PD169316和SB203580抑制p38后,不同分化阶段少突胶质细胞特异性标志物的蛋白和mRNA的聚集减少,包括髓鞘碱性蛋白、髓鞘相关糖蛋白、鞘糖脂、半乳糖酰基鞘氨醇和硫脂。同时,细胞周期调节因子p27kip1和转录因子Sox10的表达也有显著的下降。最为重要的是,p38抑制剂能够通过少突胶质细胞完全和不可逆地阻断背根神经节神经元的髓鞘形成,并阻止轴-胶粘附分子Caspr的轴膜组装。本实验结果提示p38 MAPKs在OLGs成熟和启动髓鞘形成的关键调控步骤中扮演了重要角色。