细胞有丝分裂前期检查点和结肠癌转移相关蛋白1表达与直肠癌新辅助同步放化疗敏感性关系的研究

目的:探讨细胞有丝分裂前期检查点(CHFR)和结肠癌转移相关蛋白1(MACC1)表达与直肠癌新辅助同步放化疗(nCRT)敏感性关系。方法:收集2017年3月至2022年2月秦皇岛市第一医院住院治疗的166例直肠癌患者病案资料,所有患者术前仅接受nCRT,其中放疗采用三维适形调强放疗,化疗采用Capeox方案,nCRT治疗4~6周后均顺利完成腹腔镜下全直肠系膜切除术。免疫组织化学SP染色法检测直肠癌及其癌旁组织CHFR和MACC1蛋白表达。根据美国癌症分期联合委员会肿瘤退化分级(TRG)标准,将nCRT后肿瘤退化分级(TRG)0~2级的75例患者纳入nCRT不敏感组,TRG为3~4级的91例患者纳入nCRT敏感组,比较两组患者治疗前后癌组织CHFR和MACC1蛋白表达水平,分析患者临床病理特征与nCRT敏感性关系,以及nCRT敏感性的影响因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)分析CHFR和MACC1对直肠癌nCRT敏感性的预测价值。结果:直肠癌组织CHFR阳性表达率显著低于癌旁组织,MACC1阳性表达率显著高于癌旁组织(x^(2)=81.373、87.150,P<0.05)。166例患者nCRT治疗结束后,TRG为0级6例,1级8例,2级61例,3级59例,4级32例,nCRT敏感率为54.82%(91/166)。nCRT敏感组CHFR阳性表达率显著高于nCRT不敏感组,MACC1阳性表达率显著低于nCRT不敏感组(x^(2)=4.613、37.509,P<0.05)。nCRT敏感组T4分期占比高于nCRT不敏感组,N+分期占比高于nCRT不敏感组,差异有统计学意义(x^(2)=54.432、28.912,P<0.05)。CHFR和MACC1表达是影响直肠癌患者对nCRT敏感性的独立危险因素[OR=2.456(95%CI:1.294~4.563),OR=3.281(95%CI:1.472~6.479),P<0.05]。CHFR和MACC1联合检测预测直肠癌nCRT敏感性的灵敏度、特异度分别为65.89%和69.46%,联合检测预测、CHFR和MACC1单项检测的AUC分别为0.713,0.564和0.589,P<0.05。结论:CHFR和MACC1与直肠癌nCRT敏感性有关,即CHFR高表达和MACC1低表达患者对nCRT敏感性更高,故两者有可能成为预测直肠癌nCRT敏感性的指标。

细胞有丝分裂前期检查点过表达对鼻咽癌5-8F细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用及机制研究

目的探究细胞有丝分裂前期检查点(checkpoint with forkhead-associated and ring finge,CHFR)对鼻咽癌(NPC)5-8F细胞裸鼠移植瘤生长抑制作用,并探究可能的机制。方法将重组慢病毒LV-CHFR及空载体慢病毒-绿色荧光蛋白质粒(LV-GFP)作为阴性对照导入5-8F细胞中,构建LV-CHFR/5-8F重组细胞,激光共聚焦显微镜观察细胞感染效率;将裸鼠随机分为3组(每组5只):空白对照组(接种0.2 ml未感染病毒的5-8F细胞悬液)、阴性对照组(接种0.2 ml稳转株LV-GFP/5-8F细胞悬液)、过表达CHFR组(接种0.2 ml稳转株LV-CHFR/5-8F细胞悬液),并绘制肿瘤生长曲线图;免疫组化法检测瘤体组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Polo样激酶1(polo like kinase 1,PLK1)蛋白表达情况;原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测各组瘤体组织中细胞凋亡情况;免疫印迹法检测各组瘤体组织中PLK1、CHFR、细胞周期素B(CyclinB1)、细胞周期蛋白(CyclinB1)、周期蛋白依赖性激酶2(CDC2)蛋白表达。结果随处理时间(9、12、15、18、21 d)延长,过表达CHFR组各时间点裸鼠瘤体体积均小于空白对照组、阴性对照组(F=7.872、5.778、6.717、70.020、11.782,P=0.007、0.011、0.010、0.001)。免疫组化检测显示,在空白对照组、阴性对照组裸鼠移植瘤组织中PLK1呈强阳性,在过表达CHFR组中,裸鼠移植瘤组织中PLK1表达呈弱阳性。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤细胞凋亡率升高(P<0.005)。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤细胞凋亡率升高(F=355.256,P=0.000)。与空白对照组、阴性对照组比较,过表达CHFR组移植瘤组织中PLK1、Cyclin B1、CDC2蛋白水平均降低(F=5.201、2.0304、129.946,P=0.024、0.142、0.000),CHFR蛋白水平升高(F=38.919,P=0.000)。结论过表达CHFR对NPC 5-8F细胞裸鼠移植瘤生长有一定抑制作用,可能与抑制PLK1通路活化有关。

宫颈癌组织中Skp2和有丝分裂前期检查点蛋白的表达

目的:探讨宫颈癌组织中S期激酶相关蛋白2(Skp2)及有丝分裂前期检查点(Chfr)蛋白的表达及其与宫颈癌临床病理特征的关系。方法:采用免疫组织化学SP法检测60例宫颈癌组织、30例宫颈上皮内瘤变(CIN)组织及30例正常宫颈组织中Skp2和Chfr蛋白的表达。结果:宫颈癌、CIN和正常宫颈组织中Skp2的阳性表达率分别为63.3%、30.0%和6.7%,而Chfr的阳性表达率分别为48.3%、73.3%和90.0%,组间差异均有统计学意义(χ2=28.525和16.484,P<0.001)。Skp2和Chfr蛋白的表达与宫颈癌的分化程度(χ2=14.713和20.356,P<0.001)及淋巴结转移(χ2=6.854和8.477,P=0.009和0.004)有关,而与肿瘤大小、临床分期无关。宫颈癌组织中Skp2与Chfr蛋白的表达呈负关联(rP=0.501,P<0.001)。结论:Skp2和Chfr蛋白的表达与宫颈癌的发生发展有密切的关系。

纺锤体组装检查点在肺癌中的研究进展

纺锤体组装检查点(spindle assembly checkpoint,SAC)是细胞正确进行有丝分裂(mitosis)的一种保护机制,以防止有丝分裂中后期染色体动粒(kinetochore)存在未附着或不正确附着微管的情况下继续有丝分裂,从而避免整条染色体的增加或丢失而产生非整倍体(aneuploidy)细胞。非整倍体以及SAC组成蛋白的表达改变是不同癌症种类,包括肺癌的共同特征之一。因此,SAC是一种潜在的肺癌治疗新靶点。目前,SAC上游组分蛋白单极纺锤体蛋白激酶1(monopolar spindle 1,MPS1)小分子抑制剂已有5种进入临床试验。本文介绍了SAC的生物学功能,总结了SAC组分蛋白在多种癌症中的表达异常和MPS1抑制剂的研究进展,期望对未来开发靶向SAC组分的肺癌治疗策略提供参考。

口腔鳞癌细胞染色体不稳定潜在机制的探讨

目的:探讨口腔鳞癌细胞染色体不稳定形成的潜在机制。方法:对7株非整倍体口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞系细胞,采用荧光活化细胞分类(FACS)及免疫荧光染色(IF)的方法,观察非整倍体OSCC细胞有丝分裂检查点(又称纺锤体检查点)功能及中心体状况。结果:7株非整倍体OSCC细胞系细胞经过0.2μg/ml噻氨酯哒唑(Noco鄄dazole)处理18小时后,都出现了高比例分裂中期(G2/M)细胞的累积,提示这些细胞有丝分裂检查点功能正常;而中心体异常(数目增多及形态的异常)可以在所有非整倍体OSCC细胞系中观察到,异常细胞百分率0.4%～18.8%。结论:OSCC细胞CIN表型与有丝分裂检查点功能异常之间可能无直接机制上的联系,但中心体异常可能是OSCC细胞染色体不稳定形成的潜在机制之一。

Chfr基因在急性白血病骨髓细胞中表达的研究

为了探讨急性白血病(AL)患者骨髓细胞中有丝分裂早期检查点Chfr基因的表达及其意义,对46例初诊未治疗的AL患者骨髓单个核细胞,用RT-PCR和免疫组织化学的方法检测Chfr基因mRNA及蛋白的表达,并与正常人骨髓单个核细胞进行对照。结果表明:免疫组织化学和RT-PCR分析显示,28例急性髓细胞白血病(AML)中的15例,18例急性淋巴细胞白血病(ALL)中的13例骨髓单个核细胞Chfr基因mRNA和蛋白的表达与正常对照相比显著下降,同时Chfr基因表达异常病例染色体检查存在核型异常。结论:急性白血病骨髓细胞有丝分裂检查点Chfr基因表达受损,可能在白血病发病中具有重要作用。

染色体不稳定的潜在机制及其与口腔癌发生的关系

在口腔癌发生发展的影响因素中,染色体不稳定表现扮]了十分重要的角色。其中包括染色体数目异常和染色体结构改变。前者由于有丝分裂检查点缺陷和中心体异常,导致不正常的染色体分离。染色体结构改变与DNA损伤检查点和DNA双链断裂点修复系统缺陷有关,引起染色体易位或断裂发生。相关研究已证明,染色体不稳定发生的分子遗传学异常改变与口腔癌的发生发展密切相关。

CHFR基因在肿瘤中的研究现状及意义

肿瘤的发生是一个复杂的生物学过程,主要是由于细胞内癌基因、抑癌基因及其他相关调节基因突变,从而使细胞基因组失去稳定性,最终导致肿瘤的发生。正常细胞的生长和分裂是一个高度复杂和精细的过程,为了确保细胞分裂的正常进行,每个细胞内均有一套严格的精确调控细胞增殖过程的监控系统——检查点,以维持基因组的稳定性。人类肿瘤的相关研究发现基因完整性的改变与有丝分裂检查点的功能缺失有关。

卵巢上皮性肿瘤组织中Bub1蛋白的表达及其意义

基因组的不稳定性和异倍体细胞的存在是肿瘤细胞的遗传学特征之一，而纺锤体的失控是其重要原因之一。纺锤体检查点，又称有丝分裂检查点，是细胞在长期的进化过程中产生的监控纺锤体形态、染色体着丝点与微管联接及其产生的张力、染色体排列、确保姐妹染色单体精确分离的质控机制。Bubl作为纺锤体检测点蛋白，可能通过染色体不稳定性和非整倍体传代促进肿瘤发生。对于卵巢癌患者，微管稳定剂紫杉醇类药物现已广泛应用于临床，但耐药现象仍频繁出现，相关研究指出，

C-myc通过调控BubR1影响食管鳞癌细胞对紫杉醇的敏感性

探讨C-Myc与有丝分裂期检查点蛋白BubR1的表达关系和对紫杉醇药物作用的可能影响。用免疫组化方法检测23例食管鳞癌组织标本中C-Myc和BubR1的表达水平,并通过免疫印迹的方法比较3株食管鳞癌细胞株ECA-109,KYSE150和KYSE180中C-Myc和BubR1的表达高低,分析相关性;将人BUB1b基因启动子上游约2000bp片段插入pSEAP2分泌型碱性磷酸酶报告质粒中构建为pSEAP2-BubR1-P2000,分别转染至3株鳞癌细胞内,检测启动子激活效果;在ECA-109细胞内过表达C-Myc后再转染pSEAP2-BubR1-P2000后,检测启动子的激活效果;免疫印迹方法检测C-Myc抑制剂10058-F4对BubR1蛋白表达的影响;通过MTT检测10058-F4干扰C-Myc后ECA-109细胞在梯度紫杉醇浓度下的生存率变化;最后通过DAPI染色观察单用C-Myc抑制剂,单用低浓度紫杉醇(100nM)或联用10058-F4和紫杉醇组的凋亡比例。结果发现在临床食管鳞癌标本和食管鳞癌细胞株中C-Myc和BubR1的表达有相关一致性;C-Myc高表达的细胞株中BubR1启动子活性的激活程度更强,并且过表达C-Myc后能进一步上调启动子活性;C-Myc特异性抑制剂10058-F4可以有效下调BubR1表达,并减低细胞在梯度紫杉醇作用下的细胞生存率。DAPI染色结果显示联用10058-F4和低浓度紫杉醇能明显增加细胞处于有丝分裂期的比率。在食管鳞癌细胞中C-Myc能上调有丝分裂期检查点蛋白BuR1的水平,并与食管癌对紫杉醇的敏感性相关,C-Myc可能通过上调BubR1表达而减低食管鳞癌对紫杉醇的反应。

单极纺锤体蛋白激酶1在肿瘤治疗方面的研究进展

有丝分裂检查点(SAC)是有丝分裂过程中一个极为重要的监测环节,其作用是在有丝分裂中期向后期转化之前,确保所有的姐妹染色单体排布到中期板上。最新研究显示,该检查点异常与肿瘤发生、发展与转移机制具有较高相关性。单极纺锤体蛋白激酶1 (Mps1)是一种保守双特异性蛋白激酶,其主要功能是中心体复制和激活SAC,这两个过程都有助于预防有丝分裂错误,防止肿瘤发生。最新研究结果显示,Mps1的表达水平与乳腺癌恶性程度相关,更值得注意的是抑制Mps1激酶活性或通过siRNA敲除Mps1都会导致肿瘤细胞分裂过程障碍,导致肿瘤细胞凋亡,且不会影响正常细胞的活性。细胞周期的失调与恶性肿瘤的侵袭性生物学行为亦密切相关,成为肿瘤进展的一个基本标志,细胞周期主要由若干检查点调控通路精准调控,而这些检查点特异性地在肿瘤细胞中失调并有潜力成为设计肿瘤细胞选择性治疗的靶标。本研究对Mps1如何调控SAC以及其在肿瘤治疗方面的最新进展进行综述。

癌基因c-myc对食管癌BubR1的调控

目的探讨癌基因c-myc对食管癌有丝分裂检查点效应蛋白BubR1的调控作用。方法将Bub1b基因启动子亚克隆至载体pSEAP2-Basic中,构建重组质粒pSEAP2-Bub1b-P2000,在Lipofectamine 2000的介导下,分别转染过表达c-myc的HEK-293细胞(经Ad-c-myc感染)和ECA-109细胞;转染6 h后,经c-myc抑制剂10058-F4作用ECA-109细胞。SEAP化学发光法检测各组细胞的ALP活性;采用RT-PCR和Western blot法分别检测抑制c-myc表达的ECA-109细胞中Bub1b基因mRNA转录和BubR1蛋白的表达水平。结果重组质粒经PCR、双酶切及测序鉴定构建正确;重组质粒转染过表达c-myc的HEK-293细胞和抑制c-myc表达ECA-109细胞的ALP活性明显升高(P<0.000 1);抑制c-myc表达可明显下调ECA-109细胞中Bub1b基因mRNA转录和BubR1蛋白的表达水平(P<0.05)。结论癌基因c-myc对食管癌细胞中BubR1的表达有正调控作用,为进一步研究BubR1在食管癌中发挥的作用奠定了基础。