吡格列酮对淀粉样β蛋白片段1-42引起的大鼠海马有丝分裂原激活蛋白激酶p38信号传导通路变化的影响

目的探讨吡格列酮(Pio)对淀粉样β蛋白片段1-42(Aβ1-42)所致大鼠海马损伤的保护作用及其作用机制。方法大鼠随机分为正常对照组,Aβ1-42损伤组,Aβ1-42+Pio20,40及80mg·kg-1组。d1与d2,Pio处理组大鼠灌胃给予Pio,正常对照组和Aβ1-42损伤组灌胃给予0.2%二甲亚砜。d2给药处理后,Aβ1-42损伤组及Pio处理组大鼠左侧脑室内单次注射Aβ1-425μL(2.0mmo·lL-1)制备大鼠痴呆模型,正常对照组注射等量生理盐水。继续给药6d,处死大鼠,取海马CA1区,Western蛋白印迹法观察磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶激酶3/6(MKK3/6)、磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶P38(p38MAPK)、磷酸化活化转录因子2(ATF-2),磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶活化的蛋白激酶2(MAPKAPK-2)和磷酸化热休克蛋白27(HSP27)的蛋白表达水平的改变。结果脑室内注射Aβ1-42可引起海马CA1区磷酸化的MKK3/6、磷酸化的p38MAPK和磷酸化的ATF-2表达明显增加,而磷酸化的MAPKAPK-2和磷酸化的HSP27表达明显降低。Pio可明显抑制Aβ1-42引起的磷酸化的MKK3/6、磷酸化的p38MAPK和磷酸化的ATF-2表达的增加;逆转Aβ1-42引起的磷酸化的MAPKAPK-2和磷酸化的HSP27表达降低的变化。结论Pio对Aβ1-42引起的海马神经损伤的保护作用可能与其抑制Aβ1-42引起的磷酸化p38MAPK信号传导通路的改变有关。

肢体缺血预处理通过激活有丝分裂原激活蛋白激酶p38减轻脑缺血导致的大鼠海马CA1区神经元凋亡和脑水肿(英文)

目的旨在探讨肢体缺血预处理(LIP)能否减轻脑缺血过程中海马CA1区神经元凋亡和脑水肿。方法72只永久凝闭椎动脉的Wistar大鼠随机分为6组:假手术,LIP(双侧股动脉夹闭10min,间歇10min,3次循环),脑缺血,LIP+脑缺血,DMSO和SB 203580+LIP+脑缺血组。各组大鼠中6只在脑缺血后3d处死,TUNEL染色计数凋亡细胞;6只在脑缺血后24h处死,测定脑组织含水量。结果TUNEL染色显示,假手术和LIP组海马CA1区偶有TUNEL阳性细胞;脑缺血组海马CA1区可见大量棕黄色着色的TUNEL阳性细胞,与假手术组及LIP组相比,细胞数量明显增加;LIP+脑缺血组,TUNEL阳性神经元数与脑缺血组相比明显减少,提示LIP明显抑制缺血引起的海马CA1区锥体细胞凋亡;有丝分裂原激活蛋白激酶p38拮抗剂SB 203580+LIP+脑缺血组,海马CA1区阳性染色锥体细胞明显增加,与DMSO+LIP+脑缺血组相比有显著性差别,表明SB 203580可拮抗LIP抑制凋亡的作用。与假手术和LIP组比较,脑缺血组脑组织含水量明显增加,表明LIP降低了脑缺血引起的脑组织含水量增加;LIP前应用SB 203580可抑制LIP的脑保护作用,使脑组织含水量较LIP+脑缺血组显著增加。结论LIP能够减轻脑缺血过程中海马CA1区神经元凋亡和脑水肿,可能与活化有丝分裂原激活蛋白激酶p38有关。

补阳还五汤通过抑制p38有丝分裂原激活蛋白激酶通路改善大鼠缺血性脑损伤

目的：探讨补阳还五汤针剂对缺血性脑卒中的治疗作用及机制.方法：大鼠分为假手术组,模型组,补阳还五汤高、低剂量组.参照Zea-Longa线栓法建立大鼠局灶性脑缺血模型.术后H-E染色观察海马区神经细胞形态变化,免疫组织化学法和免疫印迹法检测海马区磷酸化有丝分裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）和环氧化酶-2（COX2）表达,原位缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞.伤后3～7d水迷宫法测试动物学习记忆功能.结果：与对照组比较,脑缺血后海马区神经元结构损伤明显、磷酸化p38MAPK水平（术后1、6、24h）、COX2蛋白（术后1、6、24、48h）、凋亡神经细胞数量（6、24、48、72h）增加;大鼠的学习记忆功能下降;与模型组比较,补阳还五汤组中大鼠的学习记忆功能改善,神经元形态结构损伤减轻,磷酸化p38MAPK、COX2蛋白以及神经细胞凋亡数量下降,上述变化在高剂量补阳还五汤组更为明显.结论：补阳还五汤对脑缺血再灌注损伤有很好的治疗作用,其机制与调控p38MAPK/COX2信号通路,抑制神经细胞凋亡有关.

有丝分裂激活蛋白激酶激活与前列腺癌的恶化进展

目的 :研究人前列腺癌组织中有丝分裂激活蛋白激酶 (MAPK)激活和前列腺癌发生、恶化进展的关系。方法 :采用免疫组织化学分析方法 ,用抗磷酸化MAPK蛋白的抗体检测 4 8例人前列腺癌组织标本中MAPK激活。结果 :所有前列腺癌组织中均有磷酸化MAPK蛋白表达 ,而非癌前列腺组织中未发现有磷酸化MAPK蛋白表达。磷酸化MAPK蛋白表达强阳性在Gleason分值≤ 7和 8～ 10组中分别为 2 0 %和 6 1.1% (P <0 .0 1) ;在局部浸润性肿瘤 (T3 期 )中强阳性率 5 7 1%明显高于局限性肿瘤 (T1～T2 期 ) 2 6 5 % (P <0 .0 1)。结论 :MAPK激活和人前列腺癌的发生及恶化进展密切相关 ,可以作为估价前列腺癌恶性程度和预后的指标。

有丝分裂原激活蛋白激酶与多器官功能障碍综合征关系的研究进展

有丝分裂原激活蛋白激酶(MAPK)是细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,是介导细胞产生反应的重要信号系统。p38信号传导通路是MAPK家族的成员之一,参与了脓毒症、多器官功能障碍综合征(MODS)的发病过程,通过调控p38 MAPK信号通路,可能为降低MODS的发生率和死亡率提供一新的治疗选择。

大麻素受体1拮抗剂利莫那班对肉仔鸡下丘脑食欲调控因子和腺苷酸激活蛋白激酶基因表达的影响

研究旨在探讨大麻素受体1(CB1)拮抗剂利莫那班(SR141716)对肉仔鸡下丘脑食欲调控因子和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)基因表达的影响。选取1日龄体重相近的健康爱拔益加(AA)肉仔鸡20只,7日龄时随机分为2个组,进行第3脑室埋管,恢复3 d。10日龄08:00试验组以1μg剂量脑室注射SR141716,对照组同时注射等量的二甲基亚砜(DMSO)。统计每只鸡在注射后2 h的采食量,然后采集血液和下丘脑样品,测定血清中丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶活性及葡萄糖、尿酸、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇含量,利用荧光定量PCR技术检测下丘脑中AMPKα1、AMPKα2以及食欲调控相关基因厌食神经肽(POMC)、促食神经肽Y (NPY)、刺鼠色蛋白相关蛋白(AgRP)、可卡因和苯丙胺调节转录物(CART)的基因表达量。结果表明:1)与对照组相比,肉仔鸡脑室注射SR141716后,2 h内的采食量显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,肉仔鸡脑室注射SR141716显著提高了血清中低密度脂蛋白胆固醇含量(P<0.05),对其他血清生化指标无显著影响(P>0.05)。3)与对照组相比,肉仔鸡脑室注射SR141716显著降低了下丘脑AMPKα1、AMPKα2、POMC和AgRP的基因表达量(P<0.05),显著提高了下丘脑CART的基因表达量(P<0.05),对下丘脑NPY的基因表达量无显著影响(P>0.05)。由此可见,脑室注射CB1受体拮抗剂SR141716可降低肉仔鸡食欲,并影响中枢AMPK及其下游食欲调控因子POMC的基因表达;中枢通过抑制促食神经肽AgRP和提高抑食神经肽CART的基因表达,参与肉仔鸡食欲调控。

丝裂素原激活蛋白激酶途径在内毒素激活枯否细胞中的作用

目的 :探讨丝裂素原激活蛋白激酶 (MAPKs)途径在脂多糖 (L PS)激活枯否细胞 (KC)中的作用。方法 :用 3种 MAPK通路阻滞剂 ,测定其后培养 KC中肿瘤坏死因子 α m RNA(TNFα m RNA)、白介素 6m RNA (IL 6 m RNA )以及诱生型一氧化氮合酶 (i NOS)表达和 TNFα、IL 6以及 NO的释放。结果 :1ERK1/ 2途径抑制剂 (PD0 980 5 9)对 KC中 TNFα m RNA表达和 TNFα的释放影响极小 ,而对 IL 6m RNA和 i NOS的表达以及 IL 6和 NO的释放有明显的抑制作用 ;2 p38MAPK途径抑制剂 (SB2 0 35 80 )对KC中 TNFα m RNA和 IL 6 m RNA表达以及 IL 6和 TNFα的释放影响极小 ,而对 i NOS的表达和 NO的释放有明显的抑制作用 ;3当用 SB2 0 2 4 74抑制整个 MAPK途径时 ,KC中 TNFα、IL 6 m RNA和 i NOS的表达和 TNFα、IL 6以及 NO的释放均明显降低。结论 :TNFα m RNA表达和 TNFα的释放主要受MAPK途径中的 JNK/ SAPK途径的调节 ,IL 6 m RNA表达和 IL 6的释放主要受 MAPK途径中的 ERK1/ 2和 JNK/ SAPK通路的调节 ,而 i NOS的表达和 NO的释放可能与以上 3种途径均有关系。

cAMP对胰岛素刺激的NIH3T3细胞丝裂原激活蛋白激酶活性的抑制作用

目的 探讨 c AMP- PKA信号途径对胰岛素激活的 Ras-丝裂原激活蛋白激酶 (MAPK)信号途径的影响。 方法 以 3-异丁基 - 1-甲基黄嘌呤 (IBMX)提高细胞内环腺苷酸 (c AMP)浓度 ,藉四唑蓝比色法 (MTT法 )和蛋白免疫印迹试验分别观察 c AMP对胰岛素刺激的小鼠成纤维细胞 (NIH3T3细胞 )的生长增殖和胞内丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)活性的影响。 结果 IBMX(0 .5 mmol/ L )抑制静息的和胰岛素 (10 m U / m L )刺激的 NIH3T3细胞的增殖 ,作用呈时间依赖性。在胰岛素 (10 m U/ m L)刺激的 NIH3T3细胞 ,MAPK出现酪氨酸磷酸化 ;而以 IBMX(0 .5 mmol/L)预处理细胞 30 min后 ,再以胰岛素作用 10 min,胰岛素刺激的 MAPK的酪氨酸磷酸化受抑制。 结论 c AMP可通过抑制 MAPK磷酸化活化对

体内外不同环境下成纤维细胞丝裂素原激活蛋白激酶的变化

目的:观察脱离体内环境因素时成纤维细胞中信号蛋白表达及细胞生物学特性的变化。方法:瘢痕疙瘩和正常皮肤(作为阴性对照)均来自北京大学第三医院成形科手术患者各6例。取小块瘢痕疙瘩和正常皮肤组织,用组织块接种法进行成纤维细胞原代培养后,进行细胞传代。试验所用为第5～8代细胞。①评价信号蛋白的含量,用体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞中p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶的积分吸光度值。②评价信号蛋白的活化强度,用体外培养的瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞中p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶的平均积分吸光度值。③评价信号蛋白的活化程度用活化率值(磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶积分吸光度值÷p44/42丝裂原活化蛋白激酶积分吸光度值)。结果:①p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶平均积分吸光度值比较:瘢痕疙瘩成纤维细胞均低于正常皮肤成纤维细胞(0.023±0.005和0.025±0.005,0.030±0.000和0.042±0.004,P<0.05)。②p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶积分吸光度值比较:瘢痕疙瘩成纤维细胞p44/42丝裂原活化蛋白激酶高于正常皮肤成纤维细胞(6048.7±1576.2,3006.3±174.4,P<0.05),瘢痕疙瘩成纤维细胞磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶与正常皮肤成纤维细胞无差异(4876.0±895.8,3966.5±533.1,P>0.05)。③p44/42丝裂原活化蛋白激酶和磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶活化率比较:瘢痕疙瘩成纤维细胞低于正常皮肤成纤维细胞(0.830±0.134,1.319±0.156,P<0.05)。结论:成纤维细胞在脱离生物体内环境后,其生物学特性发生改变。体外细胞培养中,磷酸化的p44/42丝裂原活化蛋白激酶的表达水平在瘢痕疙瘩和正常皮肤成纤维细胞间无明显差别,而p44/42丝裂原活化蛋白激酶的活化程度和活化强度在正常皮肤成纤维细胞明显高于瘢痕疙瘩成纤维细胞。

丝裂原活化蛋白激酶4、生存素基因在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其意义

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶4(MKK4)、生存素(Survivin)基因在喉鳞状细胞癌组织中的表达及其意义。方法:选择82例喉癌患为研究对象,取手术切除的喉癌组织及癌旁正常黏膜组织,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法、免疫组织化学法检测MKK4、Survivin基因表达,分析其与临床病理特征的关系,随访记录喉癌患者5年生存率,并用Cox回归模型对喉癌患者预后因素进行分析。结果:喉癌组织中MKK4mRNA表达较癌旁组织下降,喉癌组织中SurvivinmRNA表达较癌旁组织升高(均P<0.05)。癌旁组织和喉癌组织MKK4蛋白阳性表达率分别为71.95%(59/82)和40.24%(33/82),Survivin蛋白阳性表达率分别为23.17%(19/82)和71.95%(59/82)(χ^(2)=16.737,χ^(2)=39.117,均P<0.01)。不同肿瘤分化程度、TNM分期及有无淋巴结转移患者MKK4、Survivin蛋白阳性表达比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。喉癌组织中MKK4和Survivin表达呈负相关(r=-0.403,P<0.05)。MKK4阳性患者5年生存率81.82%(27/33)高于阴性患者65.31%(32/49),Survivin阳性患者5年生存率62.71%(37/59)低于阴性患者82.61%(19/23),影响喉癌患者预后的因素为TNM分期和MKK4、Survivin表达(均P<0.05)。结论:喉癌组织中MKK4表达下调,Survivin表达上调,两者可能是潜在的预后标记物以及治疗靶点。

低氧通过p38丝裂素激活蛋白激酶途径刺激人肾间质成纤维细胞表达结缔组织生长因子

目的:研究低氧条件下人肾间质成纤维细胞表达结缔组织生长因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF)及其可能的信号途径,从而探讨低氧导致肾间质纤维化的分子机制。方法:以人肾间质成纤维细胞TK173作为研究对象,应用Westernblot技术,检测低氧标记蛋白分子,低氧诱导因子-1α(hypoxiainducedfactor-1α,HIF-1α)蛋白作为低氧标记物;比较低氧(1%O2,体积分数)和正常氧(21%O2,体积分数)条件下TK173细胞培养12,24,48h后CTGF蛋白水平;低氧刺激TK173细胞30min,1h,6h和12h,运用抗磷酸化抗体检测丝裂素激活蛋白激酶(MAPKs)活化;在低氧刺激半小时前分别加入p38、细胞外信号调节激酶(ERK1/2)、c-Jun-N末端蛋白激酶(JNK)信号通路特异阻断剂SB203580,PD98059,SP600125,低氧培养24h后检测细胞CTGF蛋白水平。用RT-PCR技术分析CTGFmRNA水平变化。结果:TK173细胞正常氧组仅有HIF-1α蛋白微弱表达,低氧组有高水平HIF-1α蛋白表达。在低氧条件下培养12h后细胞CTGF蛋白增加,24h时CTGF蛋白表达最强,是正常氧组的(2.1±0·1)倍,至48h降至对正常氧组水平;同时低氧培养刺激CTGFmRNA表达,在1h时开始增加,6h时达高峰为正常氧组的(6.6±1·0)倍,24h后恢复基础水平。低氧可以活化MAPKs,JNK在30min达到高峰,ERK1/2、p38在刺激1h时达高峰,6h减弱,12h减至基础水平;应用ERK1/2抑制剂PD98059和JNK抑制剂SP00125不能减弱低氧刺激CTGF蛋白表达增加的效应,但应用P38活化抑制剂SB203580可以明显减少低氧刺激的CTGF蛋白和mRNA的增加。结论:低氧可刺激人肾间质成纤维细胞表达CTGF,并且该作用依赖p38通路的活化。

丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4在动脉粥样硬化易损斑块形成中的调节作用

目的 探讨丝裂原激活蛋白激酶激酶激酶激酶4(Map4k4)在血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的动脉粥样硬化(AS)易损斑块形成中的调节作用。方法 ApoE^(-/-)小鼠随机分为4组(每组8只):Control组、Ang Ⅱ组、Ang Ⅱ+shMap4k4组和Ang Ⅱ+Map4k4组。采用油红O染色(脂质)、Masson染色(胶原)、α-肌动蛋白免疫荧光染色(平滑肌细胞)和F4/80染色(巨噬细胞)检测主动脉窦斑块稳定性。通过免疫荧光和Western blot分析Map4k4表达。体外构建Map4k4敲低或过表达巨噬细胞,用于确认Map4k4在Ang Ⅱ诱导的细胞凋亡中的作用。结果 Ang Ⅱ促进了ApoE^(-/-)小鼠AS斑块易损性和巨噬细胞凋亡(P <0.05),伴随着Map4k4表达的上调(P <0.05)。与Ang Ⅱ组小鼠相比,Ang Ⅱ+shMap4k4组小鼠的AS斑块易损性[(1.22±0.06)vs.(0.49±0.04)]和巨噬细胞凋亡[(8.42±0.40)vs.(3.49±0.31)]明显减弱(P <0.05),而Ang Ⅱ+Map4k4组小鼠上述指标明显增强[(1.22±0.06)vs.(1.45±0.05),(8.42±0.40)vs.(14.11±0.78),P <0.05]。体外实验显示,Map4k4敲低有效减弱了Ang Ⅱ诱导的c-Caspase3、Bax蛋白表达增加(P <0.05),并增加了Bcl-2蛋白表达(P <0.05)。而Map4k4过表达进一步增强了Ang Ⅱ的诱导作用(P <0.05)。结论Ang Ⅱ通过上调Map4k4表达促进巨噬细胞凋亡,并进一步参与AS中易损斑块的形成。

G蛋白偶联受体激酶4对内皮素B型受体的异常调节在原发性高血压发生中的作用

目的探讨G蛋白偶联受体激酶4（G protein-coupled receptor kinase 4,GRK4）对内皮素B型受体（endothelin receptor B,ETB）的异常调节在原发性高血压中的作用及机制。方法选用12～14周龄,体质量300 g左右的雄性自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHRs）及其对照鼠（Wistar-Kyoto,WKY）各10只,通过无创鼠尾测压仪测定血压,采用右肾上腺静脉插管灌注ETB受体特异性激动剂BQ3020后观察尿流速及尿钠排泄率,荧光定量PCR检测大鼠肾脏GRK4 mRNA水平,Western blot测定大鼠肾脏GRK4及ETB受体的蛋白表达差异,免疫共沉淀法检测ETB受体磷酸化情况,在动物水平观察高血压状态下ETB受体的功能情况。结果 ETB受体激动剂BQ3020对WKY大鼠有明显利尿排钠作用,且这种利尿排钠作用可以被ETB受体抑制剂BQ788阻断,但在SHR大鼠BQ3020的利尿排钠作用受损[尿流速：（11.23±2.16）vs（3.49±1.32）,P〈0.05];尿钠排泄率：[（1 551.43±393.47）vs（601.16±128.15）,P〈0.05];在SHR大鼠肾皮质GRK4的蛋白水平及mRNA水平均较WKY大鼠高[蛋白：（1.38±0.10）vs（0.85±0.07）,P〈0.05];mRNA：[（2.23±0.15）vs（0.78±0.16）,P〈0.05],SHR大鼠ETB受体总蛋白水平与WKY大鼠相比差异无统计学意义（P〉0.05）,但ETB受体磷酸化水平增高。结论 GRK4可能通过对内皮素B型受体的异常调节,参与了原发性高血压发生与发病。

有丝分裂原活化蛋白激酶信号通路介导大鼠星形胶质细胞氧糖剥夺后水通道蛋白4的表达

目的探讨有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPKs)是否介导缺血后大鼠星形胶质细胞水通道蛋白4(AQP4)的表达。方法分离培养新生Sprague-Dawley大鼠脑星形胶质细胞。第2代细胞分成对照组、氧糖剥夺(OGD)组和阻断组。后两组复制OGD 5 h后复氧模型,12 h后阻断组分别换入含U0126(1μmol/L和10μmol/L,U1组和U10组)、SP600125(1μmol/L和10μmol/L,SP1组和SP10组)和SB203580(1μmol/L和10μmol/L,SB1组和SB10组)的培养液。复氧后0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、3 h、4 h、8 h和12 h检测OGD组细胞体积,复氧后0.5 h、1 h、1.5 h、8 h和12 h Western blotting法检测OGD组AQP4表达;复氧后24 h,检测各组乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western blotting法检测各组AQP4,磷酸化细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)、c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)和p38MAPK(p-p38 MAPK)表达。结果复氧后1.5 h、2 h、3 h和4 h时,OGD组细胞体积较对照组显著增大(P<0.001),OGD组AQP4水平较对照组显著升高(P<0.001),并在复氧后1.5 h达到峰值。OGD组p-ERK、p-JNK和p-p38 MAPK、AQP4水平较对照组显著增加(P<0.001),阻断组p-ERK、p-JNK和p-p38 MAPK较OGD组显著下降(P<0.001),SB10组AQP4较OGD组显著下降(P<0.001)。除SP1组、SB1组外,各干预组LDH活性较OGD组显著下降(P<0.01),SB10组最低(P<0.001)。结论 MAPK信号通路,特别是p38MAPK可介导大鼠星形胶质细胞AQP4蛋白表达,加重细胞坏死。

三氯化镧对CBRH-7919细胞细胞周期素D_1和周期素依赖性激酶4蛋白表达的影响(英文)

背景:国内外多年的研究表明稀土化合物在体内、外均具有明显的抑瘤性能。目的:观察三氯化镧对大鼠肝癌细胞细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4蛋白表达的影响。设计:对照观察。单位:吉林大学第一临床医院肾病科。材料:实验于2002-06/2003-07吉林大学基础医学院组织胚胎教研室细胞培养室完成。CBRH-7919细胞按三氯化镧剂量不同分为4组,即空白对照组,0.01,0.1,1.0mmol/L三氯化镧组,每组分别培养1,3,5d,每组细胞各接种6复孔。方法:以体外培养大鼠肝癌细胞株CBRH-7919为研究对象,给予0.01,0.1,1.0mmol/L三氯化镧,培养后1,3,5d观察CBRH-7919细胞生长变化。①运用流式细胞术计算各期细胞所占比例。②四甲基偶氮唑蓝实验测定各孔吸光度值(A值)。③免疫细胞化学检测与G1期调控有关的细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4的变化情况。主要观察指标:CBRH-7919细胞在不同剂量和不同培养时间的细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4的表达情况。结果:①三氯化镧对CBRH-7919细胞生长的作用:0.1,1.0mmol/L三氯化镧组培养后3,5d吸光度值低于空白对照组(3d分别为1.140±0.070,0.706±0.092,1.461±0.087;5d分别为1.888±0.020,0.625±0.037,2.544±0.032),差异有显著性意义(P<0.05,0.001)。②三氯化镧对CBRH-7919细胞G0/G1期百分率的影响:1.0mmol/L三氯化镧组培养后1,3,5dG0/G1期细胞百分率高于空白对照组[分别为(60.70±0.20)%,(39.49±0.67)%;(61.66±0.97)%,(45.56±1.00)%;(69.92±0.18)%,(49.24±0.27)%],差异有显著性意义(P<0.01,0.001);0.1mmol/L三氯化镧组培养后5dG0/G1期细胞百分率高于空白对照组[分别为(58.88±0.73)%,(49.24±0.27)%],差异有显著性意义(P<0.05)。③三氯化镧对CBRH-7919细胞细胞周期素D1和细胞周期素依赖性激酶4阳性表达的影响:0.1,1.0mmol/L三氯化镧组培养后1d细胞周期素D1和细胞周期素依赖性激酶4表达(A)明显低于空白对照组(分别为562±35,453±22,860±82;705±84,680±28,762±16),差异有显著性意义(P<0.05,0.01,0.001)。结论:三氯化镧可通过下调细胞周期素D1和周期素依赖性激酶4,使肿瘤细胞从G1期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞的生长。

金合欢素对丝裂原蛋白激酶p38α活性抑制作用的研究

目的探讨金合欢素对丝裂原蛋白激酶p38α(p38αMAPK)的抑制作用。方法应用分子对接软件Autodock Vina将金合欢素与靶酶三维晶体结构1KV2的活性位点进行分子对接,而后利用脂多糖诱导的小鼠RAW 264.7细胞炎症模型验证金合欢素对p38αMAPK的抑制作用。结果金合欢素可结合于1KV2的活性位点处而阻碍底物三磷腺苷的进入,对p38αMAPK的生物学功能产生抑制作用。与模型组相比,阳性对照药地塞米松和金合欢素不同浓度干预后可明显下调小鼠RAW 264.7细胞炎症模型细胞上清液中一氧化氮和肿瘤坏死因子-α水平(P<0.05)。结论金合欢素可能是通过作用于p38αMAPK活性位点而发挥抗炎的药理活性。

帕妥珠单抗与曲妥珠单抗治疗人表皮生长因子受体阳性2乳腺癌的效果及对血清胸苷激酶1与结合素-4的影响

目的:分析帕妥珠单抗与曲妥珠单抗治疗人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌的效果及对血清胸苷激酶1(TK-1)与结合素-4(nectin-4)的影响。方法:选取2021年10月至2022年9月期间本院收治的HER2阳性乳腺癌患者92例,使用随机数字表分为研究组(46例)与对照组(46例)。两组均接受常规化疗治疗,对照组应用曲妥珠单抗治疗,研究组在其基础上应用帕妥珠单抗治疗。针对两组临床疗效、癌胚抗原(CEA)与糖类抗原153(CA153)水平、血清TK-1与nectin-4水平、不良反应,以及乳腺癌生命质量测定量表(FACT-B)评分进行比较。结果:关于治疗的客观缓解率比较,研究组结果较对照组高(P<0.05)。治疗后,研究组血清CA153、CEA水平低于对照组(P<0.05)。治疗后,研究组血清TK-1、nectin-4水平低于对照组(P<0.05)。不良反应发生率比较中,两组结果未见差异性(P>0.05)。治疗后,研究组FACT-B分值低于对照组(P<0.05)。结论:帕妥珠单抗与曲妥珠单抗在HER2阳性乳腺癌患者中具有较为理想的效果,可以下调血清肿瘤标志物与血清TK-1与nectin-4水平,改善生存质量。

L6大鼠成肌细胞胰岛素信号传导通路中磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4的表达

背景:血管紧张素Ⅱ可损伤胰岛素信号中的下游信号分子引起胰岛素抵抗,但其机制不清。目的:观察血管紧张素Ⅱ对L6大鼠成肌细胞胰岛素信号传导通路中磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B和葡萄糖转运蛋白4的影响。方法:L6细胞培养及诱导分化肌管,根据干预措施不同实验分为对照组、胰岛素组、胰岛素+血管紧张素Ⅱ组及胰岛素+血管紧张素Ⅱ+H89组。采用RT-PCR检测4组磷脂酰肌醇3激酶、蛋白激酶B mRNA表达,免疫荧光检测胰岛素受体底物1、酪氨酸磷酸化胰岛素受体底物1、葡萄糖转运蛋白4表达。结果与结论:胰岛素组、胰岛素+血管紧张素Ⅱ组及胰岛素+血管紧张素Ⅱ+H89组的磷脂酰肌醇3激酶mRNA表达均较对照组显著升高(P<0.05)。各组间蛋白激酶B mRNA表达差异无显著性意义(P>0.05)。相比对照组,其余3组间胰岛素受体底物1、酪氨酸磷酸化胰岛素受体底物1和葡萄糖转运蛋白4(膜蛋白)表达均升高(P<0.05);胰岛素+血管紧张素Ⅱ+H89组酪氨酸磷酸化胰岛素受体底物1和葡萄糖转运蛋白4表达低于胰岛素组但高于胰岛素+血管紧张素Ⅱ组(P<0.05)。结果显示,血管紧张素Ⅱ在骨骼肌细胞中通过JAK2-PKA通路引起胰岛素下游信号传导受阻,葡萄糖转运蛋白4表达减少,葡萄糖转运障碍,进而导致胰岛素抵抗。

丝裂原活化蛋白激酶p38的激活在四逆汤预处理诱导大鼠心肌延迟预适应中的作用

目的 :探讨四逆汤能否诱导心肌延迟预适应及其机制。方法 :SD大鼠分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注 (I/R)组、延迟缺血预处理组、四逆汤预处理组。延迟缺血预处理组采用经典大鼠冠脉结扎 ,缺血 5min ,再灌 5min ,反复循环 3次 ,2 4h后缺血 1h ,再灌 1h。四逆汤预处理组给予四逆汤灌胃 (5mL·kg-1·d-1)连续 3d ,末次灌药 2 4h后缺血 1h ,再灌 1h。以心肌梗死面积、心肌酶为评价指标 ,测定心肌中NO2 -/NO3 -的含量并通过免疫组化检测大鼠心肌p38MAPK及PKC的表达。结果 :延迟缺血预处理组及四逆汤预处理组心肌梗死面积、血清CK、LDH的值明显少于I/R组 ,NO2 -/NO3 -含量显著高于I/R组 ,p38MAPK和PKC发生转位且蛋白表达明显高于I/R组。结论 :四逆汤能诱导心肌延迟预适应 ,其机制与p38MAPK的激活可能有关。

布洛芬对淀粉样β蛋白片段1~40引起的大鼠海马p38 MAP激酶信号传导通路及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶级联的影响(英文)

目的研究布洛芬对淀粉样β蛋白片段1-40 (Aβ1-40)所致大鼠海马损伤的保护作用及作用机制。方法大鼠ig给予布洛芬15 mg.kg-1,连续应用3周,脑室内一次性注射Aβ1-40(5μL,1 mmol.L-1),注射后6h快速取海马CA1区,Western免疫印迹法观察磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶的激酶3/6(MKK3/MKK6)、磷酸化丝裂原激活的蛋白激酶p38(p38 MAP激酶)、磷酸化MAPK活化的蛋白激酶2(MAPKAPK2)、磷酸化热休克蛋白p27(Hsp27)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)9, 3,7以及ADP-核糖聚合酶(PARP)的蛋白表达水平的改变。结果脑室内注射Aβ1-40可引起海马CA1区磷酸化的MKK3/MKK6和磷酸化p38 MAP激酶表达明显增加,但可使磷酸化MAPKAPK2和磷酸化的Hsp27表达降低,这些改变伴随有caspase级联的激活。此外,也发现Aβ1-40可使海马CA1区完整的PARP蛋白表达明显减少,而劈切PARP(分子量为89 ku)表达明显增加。布洛芬可明显对抗Aβ1-40引起的磷酸化的MKK3/MKK6和磷酸化p38 MAP激酶表达增加,上调磷酸化MAPKAPK2和磷酸化的Hsp27表达水平,同时抑制Aβ1-40引起的caspase级联激活和PARP的劈切。结论布洛芬通过抑制Aβ1-40引起的磷酸化的MKK3/MKK6和磷酸化p38 MAP激酶表达,明显增加以及上调磷酸化的Hsp27表达水平,对抗Aβ1-40引起的海马的神经细胞损伤。