有害疣孢霉与不同食用菌的培养关系

【目的】研究有害疣孢霉与不同食用菌的培养关系,为蘑菇疣孢霉病害诊断及其致病机理研究提供参考依据。【方法】采用形态观察及PCR方法,对供试的疑似有害疣孢霉菌株进行鉴定。采用接种法,研究有害疣孢霉对食用菌的致病力及其发酵滤液对食用菌菌丝体生长的影响,并分析食用菌菌丝体发酵滤液及其子实体煎汁对有害疣孢霉生长的影响。【结果】鉴定结果表明,本研究供试的病原菌为有害疣孢霉。有害疣孢霉能侵染金针菇、糙皮侧耳、双孢蘑菇、金顶侧耳、刺芹侧耳,不能侵染香菇;其中有害疣孢霉对糙皮侧耳、金顶侧耳、双孢蘑菇及金针菇的致病力强,对刺芹侧耳的致病力弱。糙皮侧耳、双孢蘑菇、刺芹侧耳、灵芝、香菇子实体煎汁和菌丝体发酵液均能促进有害疣孢霉菌丝体的生长;灵芝的子实体浸汁和发酵液均能抑制有害疣孢霉厚垣孢子的产生。有害疣孢霉发酵滤液能够促进供试食用菌菌丝的生长。【结论】有害疣孢霉对不同食用菌的致病力有一定差异,灵芝对有害疣孢霉厚垣孢子的产生具有较强的抑制作用。

不同地区有害疣孢霉菌株对一些杀菌剂的敏感性测定

从上海、浙江、江苏、福建的蘑菇菇房中采集了有害疣孢霉(Mycogone Perniciosa)19株,并从国外收集了7株,其中一株为红丝菌疣孢霉(M.rosea),进行室内杀菌剂敏感性测定,结果表明,江、浙、沪一带分离的有害疣孢霉菌株对苯并咪唑类杀菌剂已产生一定的耐药性,而对施保功仍敏感。其它地区有害疣孢霉菌株对所试杀菌剂均敏感。

不同地区有害疣孢霉菌株生物学特性研究

本文于同一条件下对收集于不同地区的18株有害疣孢霉（Mycogone perniciosa）菌株进行生物学特性研究、比较。结果表明,江、浙、沪分离得到的有害疣孢霉菌株在菌落形态。菌丝生长速度、产孢量和致病症状上都与其它地区的有害疣孢霉菌株存在差异。

杀菌剂对有害疣孢霉药效的评价

从福建蘑菇老产区分离到一株疣孢霉。测定了 13种杀菌剂对该株疣孢霉和蘑菇菌丝生长的影响 ,选出其中 4种做出菇防效试验。结果表明 ,施保功、NHF对该病原菌有很好的防治效果。

有害疣孢霉厚垣孢子萌发特性研究

【目的】研究影响有害疣孢霉厚垣孢子萌发的因素,为进一步开展有害疣孢霉生物学特性研究以及筛选可有效抑制其萌发的杀菌剂提供依据。【方法】在-80℃、-20℃、0℃、4℃、10℃、15℃、20℃和25℃处理有害疣孢霉厚垣孢子,然后25℃培养,测定温度对破除有害疣孢霉厚垣孢子休眠的影响;测定不同培养基、pH值、碳源和氮源对有害疣孢霉厚垣孢子萌发的影响。【结果】0℃、4℃处理12 h、24 h和48 h可破除有害疣孢霉厚垣孢子休眠,促进萌发;适合有害疣孢霉厚垣孢子萌发的pH值为6、7和8,其萌发率分别为8.66%、9.79%和8.40%;有害疣孢霉厚垣孢子在水琼脂培养基(WA)、双孢蘑菇浸出液培养基(MuEA)、双孢蘑菇煎汁培养基(MuDA)、马铃薯葡萄糖培养基(PDA)和V8培养基上的萌发率分别为0.00%、6.38%、8.43%、1.33%和6.23%,在MuDA培养基上萌发率最好,显著优于其他供试培养基;葡萄糖、蔗糖和山梨糖有利于有害疣孢霉厚垣孢子萌发,其萌发率分别为10.77%、9.96%和9.85%;在MuDA培养基中加入脯氨酸、丝氨酸、丙氨酸和鸟氨酸后有害疣孢霉厚垣孢子的萌发率分别为12.32%、13.45%、13.74%和11.64%,显著优于不加氮源的萌发率。【结论】0℃、4℃处理12 h以上可破除有害疣孢霉厚垣孢子的休眠;适合有害疣孢霉厚垣孢子萌发的pH值为6、7和8;MuDA培养基是适宜有害疣孢霉厚垣孢子萌发的培养基;葡萄糖、蔗糖、D-乳糖、山梨糖和D-棉子糖是适宜有害疣孢霉厚垣孢子萌发的碳源;脯氨酸、丝氨酸、丙氨酸和鸟氨酸是适宜有害疣孢霉厚垣孢子萌发的氮源。

几种高等真菌菌丝及发酵产物对有害疣孢霉菌丝作用研究

通过金凤2-1,云芝,融平1号和裂褶菌等4种高等真菌与疣孢霉的相互作用分析,结果显示,不同的大型真菌对疣孢霉的拮抗存在明显的差异,金凤2-1和融平1号表现出较强的抑制效果和明显的竞争优势。裂褶菌对疣孢霉的抑制率达到48.96%。

蘑菇疣孢霉病发生及防治技术

蘑菇疣孢霉病国外多称湿泡病，其病原菌为疣孢霉，主要危害蘑菇、平菇等子实体。危害蘑菇的种是有害疣孢霉寄生引起的。该菌近年来在许多蘑菇主产区迅速蔓延扩散，危害逐年加重，是目前蘑菇栽培最普遍、最严重的病害，成为制约蘑菇生产发展的主要障碍。

有害疣孢霉Hypomyces perniciosus遗传转化体系的建立及其突变体库的构建

有害疣孢霉Hypomyces perniciosus是引起双孢蘑菇Agaricus bisporus湿泡病的病原真菌,目前其致病分子机理尚不清楚,而高效稳定的遗传转化体系和突变体库构建是挖掘和研究病原菌致病基因的基础和有效手段。因此,本实验以高致病力的有害疣孢霉菌株WH001为研究对象,采用冻融法将双元载体p BHt1转入农杆菌AGL-1中,建立并优化根癌农杆菌介导的遗传转化体系,并利用其构建T-DNA插入突变体库。结果表明有害疣孢霉菌株WH001的潮霉素(Hygromycin,Hyg)耐受浓度为250ng/L,当农杆菌侵染液浓度OD600=1,侵染时间为30min,乙酰丁香酮(Acetosyringone,AS)浓度为1.5mg/mL,共培养时间为3d时,转化体系效率最高。然后利用该优化体系构建有害疣孢霉的突变体库,通过PCR检测和形态学鉴定获得若干表型发生改变、稳定遗传的T-DNA插入突变体,与原菌种WH001相比,突变体在菌丝形态、生长速率、色素分泌和致病力等方面发生改变。本研究为进一步挖掘有害疣孢霉未知基因功能、解析生物学性状、探讨致病分子机制奠定基础。

双孢蘑菇不同品种感染有害疣孢霉后防御酶活性变化

通过测定同一时期不同品种双孢蘑菇子实体接种和未接种情况下,子实体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和多酚氧化酶(PPO)等4种防御酶活性变化,为研究双孢蘑菇品种对有害疣孢霉Mycogone perniciosa的抗病性差异提供科学数据。结果表明:以双孢蘑菇As258、As2796和W192为材料,在接种处理后,各品种双孢蘑菇子实体内苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和多酚氧化酶(PPO)活性变化不同。双孢蘑菇W192品种4种酶活峰值最高,其次是As2796和As258。说明这4种酶与双孢蘑菇抗有害疣孢霉有一定的关联。

有害疣孢霉菌与双孢蘑菇的互作关系

通过菌丝对峙、双重培养,以及对发病双孢蘑菇子实体的显微观察,探讨有害疣孢霉菌Mycogone perniciosa(MP0012)与双孢蘑菇Agaricus bisporus(As2796)之间的互作关系。结果表明,在菌丝对峙生长阶段有害疣孢霉菌菌丝不侵入双孢蘑菇菌丝体内,两者可交叉生长,对双孢蘑菇生长影响不显著;对峙与双重培养均显示有害疣孢霉菌菌丝会产生对双孢蘑菇菌丝生长有抑制作用的挥发性物质,造成双孢蘑菇菌丝扭结断裂。同时试验证实了双孢蘑菇菌丝会促进有害疣孢霉菌厚垣孢子的产生和萌发、菌丝生长和发育。侵染实验结果表明,有害疣孢霉菌可直接侵染双孢蘑菇子实体,引起双孢蘑菇子实体病害;对罹病子实体显微观察结果发现,发病前期双孢蘑菇子实体表面长出绒毛状病原菌丝,菌柄中空,菌褶褐变腐烂并长出病原菌丝;发病中期双孢蘑菇子实体内菌丝组织会出现萎缩裂解现象,在近有害疣孢霉菌菌丝一侧的双孢蘑菇子实体菌丝细胞壁被降解;发病后期双孢蘑菇子实体菌丝组织基本消失。由此初步判断有害疣孢霉菌对双孢蘑菇的寄生类型偏向于死体营养型。

四种农药对有害疣孢霉及食用菌菌丝的抑制效果分析

有害疣孢霉可引起多种食用菌的病害,本研究通过比较4种化学农药在不同浓度下对有害疣孢霉的抑制作用及其对几种食用菌本身的毒性反应,研究有害疣孢霉的化学防治方法以及合理的施药浓度。通过有害疣孢霉在不同含药培养基中培养结果显示,0.01 g/L浓度的百菌清、0.005 g/L和0.01 g/L的菌核净对有害疣孢霉的抑制效果最好。多菌灵的几个试验浓度对有害疣孢霉的抑制效果都很差。甲基托布津在48 h后对有害疣孢霉抑制效果较好。百菌清、甲基托布津、菌核净对双孢菇的生长完全抑制,平菇的耐药性最强。杏鲍菇和双孢菇在相同的药剂的处理下表现出类似的性状。且杏鲍菇中‘XS1-1’的耐药性强于‘X1#’,双孢菇中‘2796’的耐药性强于‘农双T’。多菌灵对有害疣孢霉、双孢菇、平菇、杏鲍菇的抑制效果不是特别明显。综合所述,0.01 g/L的甲基托布津即对有害疣孢霉有抑制作用又对食用菌菌丝生长抑制效果较小。

双孢蘑菇疣孢霉病的发病过程及病原菌的核相研究

【目的】确定有害疣孢霉的传播途径,明确双孢蘑菇受有害疣孢霉侵染后发病症状和微观形态变化,以及有害疣孢霉的核相。【方法】将有害疣孢霉喷施于培养料及覆土材料的不同深度,观察记录双孢蘑菇的发病情况;将有害疣孢霉接种于不同生长阶段的双孢蘑菇子实体,观察记录其发病情况;使用光学显微镜及扫描电镜观察双孢蘑菇子实体受有害疣孢霉侵染前后的形态变化;通过DAPI(4′,6-二脒基-2-苯基吲哚)染色的方法对有害疣孢霉核相进行观察。【结果】将有害疣孢霉接种于培养料及覆土层的不同深度得到双孢蘑菇发病率如下:覆土层表面>覆土层中间>覆土与培养料交界处>培养料中间层;有害疣孢霉可以侵染双孢蘑菇的任意阶段,将其接种于原基直径小于3 mm子实体表面时,得到不能正常分化的"马勃状"组织;对有害疣孢霉的侵染过程进行观察得到:其孢子可粘附于双孢蘑菇表面,并萌发长出芽管,接种处双孢蘑菇表面产生褐色病斑,双孢蘑菇菌丝体发生质壁分离,最后菌丝体膨大,细胞壁变薄甚至溢裂,菌丝体内部中空;有害疣孢霉产生两种类型的分生孢子,Ⅰ类无隔膜含1个细胞核;Ⅱ类具1隔膜含2个细胞核,2个细胞核被隔膜分开;细胞核的第1次有丝分裂发生于分生孢子母细胞中;厚垣孢子由上下2个细胞构成,上胞中含有2个细胞核。下胞含1–2个细胞核。有害疣孢霉的厚垣孢子萌发可产生1–2个芽管,芽管中细胞核的数目不断变化,一般0–2个细胞核。【结论】双孢蘑菇受其侵染后发生显著的细胞学变化;我们对有害疣孢霉做遗传分析时,进行单孢分离需挑取无隔膜的分生孢子为实验材料进行遗传分析。

蘑菇褐腐病菌的研究初报

经鉴定，上海蘑菇褐腐病，其病原菌为ＭｙｃｏｇｏｎｅｐｅｒｎｉｃｉｏｓａＭａｇｎｕｓ与萨卡杜（Ｐ．Ａ．Ｓａｃｃａｒｄｏ）和魏景超等的报道相符。用该菌的孢子悬浮液或菌丝块进行接种试验，证明了此菌的致病性。厚垣孢子在一般人工培养条件下不萌发，只有通入由蘑菇菌丝体代谢所产生的气体特定条件下才能个别萌发。在我市人工栽培条件下已知可危害蘑菇和草菇。

蘑菇褐腐病菌生物学特性和防治

蘑菇褐腐病菌菌丝生长和分生孢子萌发适宜温度为24～25℃,低至10℃,高达35℃,孢子停止萌发,在35℃和40℃恒温中,分别经5天和1天,菌丝均失去生活力;高湿有利于菌丝生长和孢子萌发,100％相对湿度下分生孢子萌发率最高;菌丝生长和分生孢子萌发最适宜pH值分别为6和6.4,幼嫩蘑菇煮出液最能刺激孢子萌发,该病菌在菇床初侵染源是覆盖了带有病菌的覆盖土,在夏季对覆盖土壤进行日光曝晒4～5天,覆土前7天,用36％～38％化学纯甲醛3.5kg,兑水20～30kg,喷洒于种植111m^2蘑菇的覆盖土中熏蒸48h以上,防病效果均理想;发病后及时挖除病菇,能防止病菌再侵染,减轻褐腐病的为害。