黄芪和三七的主要有效成分配伍对脑缺血/再灌注小鼠NF-κB信号通路及炎性因子表达的影响

目的从炎症反应探讨黄芪和三七主要有效成分配伍抗脑缺血/再灌注损伤的机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷(ASTⅣ)组、人参皂苷Rg1(Rg1)组、人参皂苷Rb1(Rb1)组、三七皂苷R1(R1)组、4种有效成分配伍组、ASTⅣ+Rg1组、ASTⅣ+Rb1组、ASTⅣ+R1组及阳性对照药依达拉奉组。预先给药3 d,末次给药1 h后,结扎双侧颈总动脉,造成脑缺血20 min,再灌注24h。RT-PCR法测定TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA表达,Western blot法测定脑组织p-IκBα蛋白及胞质、胞核NF-κB蛋白表达,计算NF-κB核转位率。结果 1脑缺血/再灌注后,脑组织TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA表达增加。ASTⅣ可降低TNF-αmRNA表达,Rg1可降低ICAM-1 mRNA的表达,R1能同时下调TNF-α、ICAM-1 mRNA的表达。ASTⅣ与Rg1、Rb1、R1配伍对TNF-α、IL-1β、ICAM-1 mRNA的表达均有不同程度的抑制作用,且以4种有效成分配伍组和ASTⅣ+R1组对炎性细胞因子表达的抑制效应更加明显。2脑缺血/再灌注后,脑组织p-IκBα蛋白表达明显增加,胞质NF-κB蛋白表达明显减少,而胞核NF-κB蛋白表达增加,NF-κB核转位率升高。ASTⅣ、Rg1、R1及各有效成分配伍均能抑制IκB磷酸化,减少NF-κB核转位的发生,且配伍组的效应大于各有效成分单用,4种有效成分配伍组的效应大于ASTⅣ+Rb1和ASTⅣ+Rg1组。结论黄芪和三七的主要有效成分配伍能通过抑制缺血/再灌注后脑组织NF-κB信号通路的激活,减少炎性细胞因子的生成,从而减轻脑缺血后脑组织的继发性炎症反应,发挥对脑组织的保护作用。

丹红有效成分配伍对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用

为研究丹红有效成分配伍对缺氧致原代培养的乳鼠脑微血管内皮细胞(r BMECs)损伤的保护作用。原代培养乳鼠脑微血管内皮细胞并对细胞进行缺氧4 h损伤模型的同时,丹红有效成分(原儿茶醛、丹酚酸B、羟基红花黄色素A、丹参素)配伍作用于r BMECs,MTT确定细胞非毒性剂量,采用比色法测定LDH,SOD活性和MDA水平,RT-PCR法检测ICAM-1,MMP-9,P53 mRNA表达,流式细胞术检测r BMECs细胞周期及早期凋亡的变化。丹红有效成分配伍1,2,3,7,8,9组方显著抑制缺氧细胞上清液中LDH的增加;1,2,4,6,7组方显著增强缺氧细胞内SOD活性;1,2,3,8,9组方显著降低MDA水平;1,2,6,7,9组方显著抑制缺氧诱导的r BMECs早期凋亡,缺氧后细胞P53 mRNA表达明显上调的后果是能引起G1期阻滞和促进细胞凋亡,证实P53基因的调节功能体现在G1期校正点的监测;1,2,5,6,7,8,9组方显著下调P53 mRNA表达;1,4,7,8,9组方显著下调ICAM-1 mRNA表达;1,3,6,9组方显著下调MMP-9 mRNA表达。丹红有效成分配伍对缺氧所致原代培养的r BMECs损伤具有明显的保护作用,其机制与增强细胞抗氧化能力,抑制炎症反应和细胞凋亡有关。为研究方剂配伍规律提供思路,指导临床用药。

四物汤有效成分配伍组方对电离辐射所致氧化损伤的防护作用

目的观察四物汤有效成分配伍组方对电离辐射所致人淋巴母细胞AHH-1细胞氧化损伤的辐射防护作用，并初步探讨其作用机制。方法4．0Gy 60Coγ射线单次照射AHH-1细胞，造成电离辐射损伤。观察不同浓度的四物汤有效成分配伍组方（果糖、阿魏酸、芍药苷、川芎嗪质量比为9008：53：721：267）对于电离辐射损伤的AHH-1细胞活力、凋亡情况、活性氧（ROS）水平的影响，以及对pGL4-ARE报告基因载体的激活作用。结果四物汤有效成分配伍组方在10mg／L的浓度下抗辐射效果最为显著，可以减缓受照AHH-1细胞活力下降（t=-8．152，P〈0．05），缓解早期细胞凋亡（t=12．777，P〈0．05），降低ROS水平（t=3．465，P〈0．05），诱导报告基因pGIA．ARE荧光表达倍数提高（t=-19．752，P〈0．05）。结论四物汤有效成分配伍组方具有体外抗辐射活性，可能通过激活Nrf2-Keap1—ARE抗氧化通路、降低辐射所致氧化损伤，从而发挥辐射防护作用。

薏苡附子败酱散方抗肝癌细胞SMMC-7721有效组分配伍研究

目的通过均匀设计方法筛选出薏苡附子败酱散方有效组分抗肝癌细胞最佳配伍比例,并对其各有效组分及最佳配伍进行体外初步作用机制研究。方法采用MTT法测定各有效组分对肝癌细胞SMMC-7721的IC_(50)值,通过U_8(8~5)均匀设计对有效组分配伍进行优化,确定最佳配伍比例;同时测定最佳配伍作用于人正常肝细胞L-02和肝癌细胞SMMC-7721的IC_(50)值;运用流式细胞仪将最佳配伍组及有效组分单用组分别作用于肝癌细胞SMMC-7721,测定细胞周期与凋亡,并用Flowjo及Modifit软件进行分析。结果薏苡附子败酱散方有效组分最佳配伍比例为:败酱草总皂苷-薏苡仁挥发油-败酱草总黄酮-附子总生物碱=0.40∶2.06∶1.06∶1.70。最佳配伍对肝癌细胞SMMC-7721的IC_(50)值比对人正常肝细胞L-02显著降低;与空白对照组比较,各组分单用组及最佳配伍组作用于肝癌细胞SMMC-7721后,细胞凋亡率均增加;细胞分裂周期G_0/G_1期、S期比例升高,G_2/M期比例降低。最佳配伍组作用优于各有效组分单用组。结论通过本实验筛选出的薏苡附子败酱散方有效成分最佳配伍对肝癌细胞SMMC-7721有明显的增殖抑制作用,为该方的进一步研发奠定了基础。

采用正交t值法优选治疗急性痛风性关节炎的中药有效成分复方配伍

目的针对大鼠急性痛风性关节炎（AGA）模型筛选最优抗炎配伍植物中药有效成分组合复方。方法将SD雄性大鼠65只随机分成12组,并设置空白对照组,每组5只。按照正交t值表分配白芍总苷（TGP）、三七总皂苷（PNS）、青藤碱（SN）、雷公藤多苷（TG）及人参皂苷（GS）5种中药有效成分配伍组合,各组每只1.5 ml/d等体积灌胃给药。给药第6天第1~12组大鼠左踝关节腔注射PBS配制的微晶尿酸钠结晶（25 mg/ml）100μl进行造模,造模前及造模后8 h测量踝关节周径计算其肿胀度。结果模型组与对照组相比造模8 h后肿胀度均有显著增加（P〈0.01）。经正交t值法肿胀度筛选,TGP、PNS、SN在复方组合中药效突出,其中SN最有意义（P〈0.01）;而TGP和PNS在复方中也具有统计学意义（P〈0.05）。结论 SN、TGP、PNS在5种有效成分组成的复方中发挥主导抗炎效应。