脑心通胶囊肠吸收液保护过氧化氢致H9c2心肌细胞损伤的作用机制及有效药味筛选

目的:以肠吸收液为药物载体,利用拆方重组法筛选脑心通胶囊组方中发挥体外心肌保护作用的单味或多味中药,并丰富脑心通胶囊心肌保护作用的分子机制。方法:应用外翻肠囊法制备肠吸收液,体外构建过氧化氢(H2O2)损伤大鼠胚胎心肌细胞株(H9c2)模型,分为正常组、模型组、脑心通胶囊肠吸收液低、中、高剂量组(15.63,31.25,62.50 mg·L-1),每组3个复孔,实验重复3次。噻唑蓝(MTT)比色法检测心肌细胞的存活率,AnnexinⅤ-FITC/PI双染结合流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测水通道蛋白1(AQP1)蛋白的表达;同时拆方或构建重组方,MTT比色法定位脑心通胶囊组方中发挥心肌保护作用的单味或多味中药。结果:与正常组比较,模型组AQP1的表达升高(P<0.01),心肌细胞凋亡数量增多(P<0.05)。与模型组比较,脑心通胶囊肠吸收液中、高剂量组均可下调AQP1的表达(P<0.05),脑心通胶囊肠吸收液高剂量组可抑制心肌细胞凋亡(P<0.05)。与脑心通全方组比较,丹参、地龙和全蝎这3种单味药心肌保护作用与脑心通全方组相当,此3味药重组方高剂量组心肌保护作用强于脑心通全方组(P<0.05),去3味药重组方心肌保护作用弱于脑心通全方组(P<0.05)。结论:脑心通胶囊通过抑制AQP1表达和细胞凋亡,发挥心肌保护作用;丹参、地龙和全蝎是组方中发挥心肌保护作用的主要药味。