有机溶剂沉淀法初步提纯谷胱甘肽抽提液的研究

还原型谷胱甘肽(GSH)是生物体内一种具有重要生理功能的活性三肽,其生产多采用发酵法。采用有机溶剂沉淀法对GSH抽提液进行了初步分离提纯。分别采用四氧嘧啶法和高效液相色谱法测定GSH的浓度和纯度,考察了不同有机溶剂和用量、溶液pH、温度和GSH初始质量浓度等对提纯效果的影响,确定了适宜工艺如下:有机溶剂选用乙醇,V R=5,pH的适宜范围为3.0～3.4,低温(5℃),较高的初始质量浓度。在上述工艺条件下,GSH纯度可从18.0%提高到41.0%,表明乙醇沉淀法提纯GSH抽提液是有效的,有利于后续分离。

应用在食品工业中的沉淀分离技术

概述了沉淀分离技术的基本概念、基本应用、常用的沉淀分离方法及其基本原理,提供了应用实例的基本工艺流程。

甲醇-乙醇分步沉淀法提取γ-聚谷氨酸

采用非单一有机溶剂即甲醇-乙醇分步沉淀法从发酵液中提取聚谷氨酸(γ-PGA),通过响应面法对聚谷氨酸(γ-PGA)提取条件进行优化。在初步考察单因素影响的基础上,以BBD(Box-Behnken design)法设计考察有机溶剂沉淀倍数、沉淀pH、沉淀时间3个因素对γ-PGA提取纯度的交互影响,用Design-Expert v8.0.6.1软件对BBD实验数据进行分析处理。试验得到的最佳提取条件为:有机溶剂沉淀倍数为3.48、沉淀pH为8.13、沉淀7.30 h,γ-PGA提取纯度为75.16%,提取率83.77%,预测精准度达99.02%。

一种新型蛋白质沉淀体系——加压CO_2乙醇-水体系

将有机溶剂抗溶剂与高压气体等电沉淀技术结合起来 ,提出了一种新的蛋白质纯化方法 .实验以加压CO2为挥发性酸 ,乙醇为助沉淀剂 ,对BSA的等电沉淀进行了研究 .由实验结果可知 ,本方法可使BSA处理浓度提高 ,CO2 操作压力降低 ,其中乙醇既具有促进沉淀的作用又具有降低BSA缓冲能力的作用 .蛋白质稳定性测试结果表明 ,在实验操作条件下 ,BSA未发生不可逆的构象变化 ,能保持稳定 .这些结果对该方法的进一步完善及其在蛋白质等生物活性成分分离纯化领域的应用具有借鉴作用 .

菠萝蛋白酶的提取纯化工艺研究

为降低环境污染,提高菠萝蛋白酶的附加值以及延长菠萝的产业链,以菠萝废弃物为原料,采用盐析浓缩-透析提纯-乙醇有机溶剂沉淀相结合的方法提取菠萝蛋白酶。实验考察料液比、缓冲液温度、搅拌时间、缓冲液pH值、盐析浓度以及透析时间对菠萝蛋白酶酶活性和酶活回收率的影响。结果表明,菠萝蛋白酶的最佳工艺条件为料液比1.0∶1.5(m∶v)、缓冲液温度30℃、搅拌时间40 min、缓冲液pH值7、盐析浓度30%和透析时间28h,该条件下菠萝蛋白酶酶活回收率为68.45%。

γ-聚谷氨酸提取条件的优化

目的:通过实验对γ-聚谷氨酸提取条件进行优化得到一组产量高的最优条件。方法:利用枯草芽孢杆菌通过发酵生产得到含有γ-聚谷氨酸的发酵液,再以异丙醇作为沉淀剂提取发酵液中的产物。通过响应曲面分析方法设计三因素三水平Box-Behnken实验优化提取条件。最后利用薄层色谱和红外光谱对产物进行结构鉴定。结果:利用Design-Expert软件处理数据并优化得到一组最佳提取条件:异丙醇的添加倍数为4.5,沉淀温度为-5℃,沉淀时间为23h。在最优条件下得到γ-聚谷氨酸的产量为0.1796g/10mL,预测精确度达99%。结论:在低温下用异丙醇沉淀发酵液中的产物是一种有效可行的提取γ-聚谷氨酸的方法。

牛初乳中乳铁蛋白的分离及纯化

乳铁蛋白(Lactoferrin,简称Lf)作为一种糖蛋白,主要存在于哺乳动物的各种外分泌物中,如乳汁、眼泪、唾液等,乳汁尤其是初乳中Lf的含量很高犤1犦。本文通过盐析法和有机溶剂沉淀法从牛初乳中分离出乳铁蛋白,并应用酶联免疫法鉴定各步骤中分离的乳铁蛋白,获得的乳铁蛋白的相对分子量为75,000Da。

γ-聚谷氨酸的提取方法改进

目的:通过实验研究获得一种生产成本较低、生产工艺相对简单的γ-聚谷氨酸提取方法。方法:利用枯草芽孢杆菌通过发酵生产得到含有γ-聚谷氨酸的发酵液,再以异丙醇作为沉淀剂提取发酵液中的产物。用浓盐酸对产物进行水解,水解产物用四氯对苯醌进行衍生后利用高效液相色谱法测定产物的纯度和产量。最后利用薄层色谱和红外光谱对产物进行结构鉴定。结果:利用该提取方法得到γ-聚谷氨酸的产量为17.70 g·L-1,其纯度为95%。结论:在低温下用异丙醇沉淀发酵液中的产物是提取γ-聚谷氨酸的一种有效可行的方法。

牛眼透明质酸分级制备

采用分级分离并结合有机溶剂沉淀法，从牛眼中纯化出高纯度透明质酸。较其它方法简便，易形成规模，对提高资源利用率和经济效益有积极意义。

氨基酸微量元素螯合物的制备方法研究

以氨基酸和金属硫酸盐为原料,通过调节pH值并加热使金属离子与氨基酸螯合,利用有机溶剂沉淀分离法制备了甘氨酸铜、甘氨酸锌、赖氨酸锌螯合物,以螯合率为指标考察了影响制备工艺的主要因素,试验确定的工艺条件为:投料摩尔比2∶1、pH值6.5、反应温度70～80℃和反应时间1h。并用化学分析和红外光谱对螯合物进行了研究,确证了氨基酸螯合物的形成。

牛眼透明质酸分级制备

透明质酸是临床手术时应用的重要生化药品,也是日用化妆品的原料。本文报道采用分级分离并结合有机溶剂沉淀法,从牛眼中纯化出高纯度透明质酸,较其他方法简便,易形成规模。对提高资源利用率和经济效益有积极意义。

氨基酸微量元素螯合物的合成方法研究

以甘氨酸和金属硫酸盐为原料，通过调节pH值并加热使金属离子与氨基酸螯合，利用有机溶剂沉淀分离法制备了甘氨酸钢和甘氨酸锌螯合物，以螯合率为指标考察了影响合成工艺的主要因素，确定了最佳的投料摩尔比、pH值、反应时间和温度。用化学分析和红外光谱对螯合物进行了研究，确证了氨基酸螯合物的形成。

谷氨酸螯合锌的合成与表征

研究以L-谷氨酸(L-Glu)和硫酸锌(ZnSO_4·7H_2O)为原料,使用改进的有机溶剂沉淀法制备谷氨酸螯合锌,探究不同原料摩尔比、pH值、温度和时间对谷氨酸螯合锌制备工艺的影响,结果发现,在原料摩尔比n(L-Glu)∶n(ZnSO_4·7H_2O)=2.0∶1、p H值为4、温度为80℃和时间为30 min的条件下,产品的螯合率最高,达到83.42%。通过X射线衍射仪(XRD)、红外光谱仪(IR)分析样品,确定所制备的样品为谷氨酸螯合锌。

一种适用于HPLC去除血清中干扰峰的方法

通过比较和优化血清样品制备方法,建立一种适用于HPLC去除血清中干扰峰的方法。运用盐析法、加热法、萃取法和有机溶剂法去除血清中干扰峰,经HPLC分析,比较4种方法对血清中干扰峰的去除效果。结果表明乙腈沉淀法能去除血清中大部分的蛋白质,留下很少的杂质峰;而加热法、萃取法和有机溶剂法均能去除血清中的杂质峰,但是留下的干扰峰较多,不适用于血清中HPLC的其他物质的检测。乙腈沉淀法去除血清中的杂质峰效果最好,干扰最小,为HPLC血清中杂质峰的排除提供了一种优化的方法。

主要业务部门 主要研究方向——食品研究组

乳铁蛋白是一种多功能蛋白质，具有广谱的抗菌作用，增强机体的免疫力。通过盐析法和有机溶剂沉淀法，从牛初乳中分离出乳铁蛋白，此过程中还可得到球蛋白及酪蛋白两种副产品。

主要业务部门 主要研究方向——食品研究组

一．乳铁叠自的提取工艺 乳铁蛋白是一种多功能蛋白质．具有广谱的抗菌作用．增强机体的免疫力。通过盐析法和有机溶剂沉淀法．从牛初乳中分离出乳铁蛋白．此过程中还可得到球蛋白及酪蛋白两种副产品。

从硼废水中提取硼（Ⅰ）

简要叙述了从硼废水中提取硼的意义，详细介绍了提取硼的实验方法。

丙酮沉淀法提取中性β-甘露聚糖酶的条件研究

利用丙酮沉淀提取枯草芽孢杆菌 (Bacillussubtilis)K3- 14发酵产生的中性 β -甘露聚糖酶 ,- 2 0℃时V(发酵液 )∶V(丙酮 )用量为 1∶1.0时 ,提取率为 82 .5 7% ,固体酶制剂酶活力为 19.43万U/g ,1∶2 .0时提取率为 95 .40 % ,所得固体酶净重增加 ,酶活力下降为 8.6 2万U/g ;在 - 2 0℃低温下丙酮对酶的提取影响较小 ,12h内提取率从 97.34 %下降到 87.89% ,下降 9.71% ,而 30℃丙酮对 β -甘露聚糖酶提取影响大 ,从 90 .31%下降到 41.89% ,下降 5 3.6 2 % ,但在 4h以内酶提取率仍能保持在 78.93%以上 ,此工艺在工业上是可行的 .

丙酮沉淀法富集尿液蛋白的影响因素分析

尿液蛋白质组学是体液蛋白质组学的重要组成部分。有机溶剂沉淀法是常用的尿蛋白富集方法，综合富集效率、富集蛋白种类及重复性等因素，丙酮沉淀法效果最佳。但丙酮沉淀法尚缺少共识性的标准流程，本文从防腐剂、尿液解冻方法、丙酮沉淀时间和尿液与丙酮体积比4个方面，探讨丙酮沉淀法富集尿蛋白的影响因素，以优化尿蛋白质组学研究中样本收集及蛋白富集的标准流程。