有机磷抗性致倦库蚊种群中酯酶基因扩增的定量分析

致倦库蚊Culexqinquefasciatus是丝虫病的主要传染媒介。通过生物测定、单个蚊虫酯酶α2和 β2基因拷贝数分析和酯酶 β基因序列比较 ,分析了抗性水平、抗性相关基因在种群中的分布及其基因拷贝数等的抗性分子特征。应用快速PCR仪(real timequantitativePCRs)直接检测库蚊中酯酶基因和mRNA拷贝数。结果显示 :上海致倦库蚊对对硫磷的抗性LC50 为8 12 ,酯酶活性升高是上海致倦库蚊种群对有机磷杀虫药剂产生抗性的主要机理。编码致倦库蚊酯酶 β的氨基酸序列同编码尖音库蚊酯酶B1的氨基酸序列相比同源性为 98% ;同致倦库蚊酯酶B2氨基酸序列相比同源性为 10 0 % ,同环蹶库蚊酯酶B3氨基酸序列相比同源性为 90 % ,上海致倦库蚊中酯酶α和 β基因均扩增。有机磷抗性的上海和PellRR蚊虫种群中单个蚊虫酯酶α2和β2定量基因拷贝数均不同 ,其同一蚊虫个体的酯酶α2比酯酶 β2基因的拷贝数高 ,但没有明显的规律性 ,酯酶结构基因的扩增是上海致倦库蚊种群对有机磷杀虫药剂抗性的主要机理 ,估计在野外种群的杂合个体中存在多种调控机制。

小菜蛾有机磷抗性季节性变化及毒理机制研究

1998～ 2 0 0 3年期间的田间监测结果显示 ,福州地区小菜蛾 Plutella xylostella对甲胺磷和敌敌畏的抗性水平呈季节性变化 ,每年春秋季的抗性水平显著高于夏季 7月期间的抗性水平。与 2 5℃ 2 d的饲养条件相比 ,35℃ 2 d和 5℃ 30 d可使小菜蛾羧酸酯酶 (Car E)和谷胱甘肽 - S-转移酶 (GST)活力显著抑制 ,35℃ 2 d还可使小菜蛾乙酰胆碱酯酶 (ACh E)活力显著抑制 ,但 5℃4 d对小菜蛾 ACh E、Car E和 GST活力影响差异不显著。当反应温度均为 2 5℃时 ,在 35℃ 2 d、2 5℃ 2 d和 5℃ 30 d下饲养的小菜蛾 ACh E对甲胺磷和克百威的敏感性 (K i值 )没有明显变化 ,但酶与杀虫剂在 37℃的反应温度下 ,甲胺磷、敌敌畏和克百威对在 2 5℃下饲养的小菜蛾 ACh E的抑制作用显著增高。上述结果表明环境温度会影响小菜蛾的解毒代谢及杀虫剂对 ACh E的抑制作用。探讨了环境温度的季节性变化对田间小菜蛾有机磷抗性水平影响的毒理学机制。

淡色库蚊三种有机磷抗性品系的相对适合度分析

本文在淡色库蚊的敌百虫、双硫磷和毒死蜱三种抗性品系筛选的基础上，通过抗性品系和敏感品系的吸血、繁殖、存活和发育等生物学特性的测定和比较，组建实验种群生命表，分析抗性品系的适合度。结果表明：三种抗性品系的吸血率、产卵率和发育速率与敏感品系相比都有所降低，抗敌百虫品系、抗双硫磷品系和抗毒死蜱品系相对敏感品系分别具有：０．５４２、０．６３１和０．６１８的适合度。

淡色库蚊有机磷抗性品系在生物学特性方面的不相适应性研究

本文在淡色库蚊的敌百虫、双硫磷和毒死蜱三种抗性品系筛选的基础上，通过抗性品系和敏感品系的吸血、繁殖、存活和发育等生物学特性的测定和比较，组建实验种群生命表、分析抗品系的适合度，结果表明：三种抗性品系的吸血率。产卵率和发育速率和敏感品系相比都有所降低；抗敌百虫品系，抗双硫磷品系和抗毒死蜱品系相对敏感品系分别具有０．５４２、０．６３１和０．６１８的适合度。

有机磷抗性库蚊的羧酸酯酶研究进展

蚊虫是重要的医学昆虫之一，传播多种蚊媒疾病。库蚊是丝虫病、乙型脑炎和西尼罗河病毒的主要传播媒介。蚊虫在世界范围内分布，有较高的繁殖能力和对环境的适应能力，由于化学杀虫剂的频繁大量使用，蚊虫的抗药性普遍增加，给蚊虫防制工作带来了困难，蚊虫的抗药性已成为全球性的问题。世界卫生组织（WHO）和各国政府都十分重视蚊虫的防制工作，在控制非洲蚊虫的运动中，WHO仅允许使用拟除虫菊酯类杀虫剂。

多种有机磷剂抗性品系淡色库蚊羧酸酯酶的提纯及其对14C—马拉硫磷的降介作用

DEAE——纤维素柱层析及其连续梯度洗脱法用于分离纯化淡色库蚊有机磷剂品系的特征性羧酸酯酶(E),分离纯度达150倍;经聚丙烯酰胺凝胶园盘电泳鉴测确系一条单一的E带,不存在其它酯酶。 纯化的E能降介[C—甲基]马拉硫磷,所生成的羧酸衍生物量与加入的E量成线性关系。此直接证明了抗性品系体内E合成量的增加是其产生有机磷抗性的主要机理之一。

湖州地区桑螟对有机磷农药抗性调查

2013年秋,调查了桑螟对有机磷农药的耐药性,结果表明,湖州地区桑螟对有机磷农药已经产生了抗性,不同地区抗性存在差异,抗性最强地区为吴兴区湖东蚕桑园,其他依次为南浔区菱湖镇>千金镇>湖州市农科院>和孚镇>善琏镇>练市镇。但湖州地区桑螟整体对有机磷农药抗性还处在较低水平。

马拉硫磷抗性致倦库蚊酯酶单克隆抗体的制备及鉴定

用马拉硫磷抗性致倦库蚊酯酶免疫经ＰＰＤ刺激的小鼠制备了５株单克隆抗体，经鉴定均为ＩｇＧ１，各株单抗两两相加的相加指数（Ａ．Ｉ．）均未超过５０％。酯酶与１∶１０００稀释的腹水孵育１ｈ后即失去分解底物活性。免疫印迹结果显示，单克隆抗体识别的抗原在８个群体（或品系）均有一６４ｋＤａ蛋白带，反应强度及蛋白带数量与抗性程度有关。单抗对幼虫及苄呋菊酯抗性品系酯酶基本无反应。

尖音库蚊复组蚊类抗性酯酶遗传变异性分析

目的 将建立的不同酯酶类型的库蚊有机磷抗性品系杂交，分析抗性酯酶基因之间遗传关系。方法 通过单卵块传代和杀虫剂筛选建立酯酶类型分别为B1、B2的品系JH1、JH2，并将两种酯品系进行杂交，杂种子代与敏感品系杂交，根据子代酯酶类型分析两种酯酶之间的遗传关系。结果 杂种队工与敏感品系杂交后，128个子代库蚊个体中，有121个（95．3％）表现出与亲代一致的表型，其余7个（4．7％）为重组个体。结论 抗性酯酶原因B1、B2是分别独立进行遗传的。

反义核酸抑制抗敌百虫淡色库蚊扩增酯酶mRNA体外翻译的研究

目的 用反义核酸抑制抗敌百虫淡色库蚊扩增酯酶mRNA体外翻译。 方法 人工合成互补于抗性库蚊酯酶mRNA翻译起始点 18碱基 ,与淡色库蚊mRNA退火后加入无细胞翻译体系 ,进行体外翻译 ,翻译产物用SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。 结果 6 μmol/LODNs可抑制 5 0 %特异性酯酶翻译量 ,2 0 μmol/LODNs抑制 80 %特异性酯酶翻译量。电泳结果显示条带浓度接近敏感蚊虫所表达的酯酶量。

不同地区致倦库蚊种群相关酯酶基因的特征分析

分别从广州、沙市、武汉近郊采集到致倦库蚊Culexpipiensquinquefasciatus,对单只蚊虫进行淀粉凝胶电泳和Southern杂交方法的分析结果表明 :3个实验种群中均分布有与抗性有关的高活性酯酶β11,酯酶α2 / β2分布于广州实验种群中 ;广泛分布于地中海地区尖音库蚊Culexpipi ens种群中的酯酶α4/ β4、α5 / β5在以上 3个种群中均不存在。但是 ,在 3个实验种群中均发现存在有一对新的高活性酯酶α8/ β8,其电泳迁移率和限制性酶切片段均与目前已报道的几种高活性酯酶不同。含这两对新酯酶的蚊虫将应进一步从种群中纯化 。

库蚊野生种群扩增等位基因重组现象分析

羧酸酯酶 (carboxylesterases)的过量产生是库蚊Culexpipiens对有机磷杀虫剂 (OP)产生抗性的主要机制。由est 3和est 2组成的酯酶超级基因座 (estersuper locus)的基因扩增是引起酯酶基因扩增的主要遗传学基础。通过淀粉电泳研究了采自广州、佛山、郑州的库蚊野生蚊虫种群 ,发现在这些种群中存在着扩增等位基因重组现象。该现象可能是蚊虫受到杀虫药剂的选择压力、等位基因多样性和等位基因型频率的影响。这将提供一个研究抗性进化的自然模型。