去铁酮与人有机阳离子转运体及有机阴离子转运体1体外相互作用研究

目的：建立细胞裂解液中去铁酮测定的液相色谱-串联质谱（ LC-MS/MS）方法，体外考察去铁酮与人有机阳离子转运体（ hOCTs）及有机阴离子转运体1（hOAT1）的相互作用。方法：以Agilent Eclipse Plus C18柱（2．1 mm ×50 mm，3．5μm）为分析柱；0．1％甲酸-水（ v/v）和0．1％甲酸-乙腈（ v/v）为流动相，梯度洗脱；应用电喷雾离子源（ ESI源）、多反应监测（ MRM）模式进行检测；应用稳定表达hOCTs及hOAT1的细胞模型（ MDCK-hOCTs和MDCK-hOAT1）考察去铁酮对经典底物在细胞内积聚的影响；比较去铁酮在转空载体的mock细胞及MDCK-hOCTs中积聚的差异，以及经典抑制剂对其积聚的影响。结果：去铁酮在5～300 nmol/L的浓度范围内线性关系良好；准确度大于94％，日内相对标准偏差小于2％。300μmol/L去铁酮使hOCTs经典底物MPP＋在MDCK-hOCTs的积聚降低至阴性对照的70．4％～87．1％；去铁酮在MDCK-hOCTs细胞和mock细胞中的积聚无明显差别，且经典抑制剂对去铁酮的积聚无明显抑制作用；100μmol/L去铁酮对hOAT1经典底物6-CF在MDCK-hOAT1细胞中的积聚无显著影响。结论：本实验建立的方法适用于细胞裂解液中去铁酮的定量分析；去铁酮对hOCT1和hOCT3有一定的抑制作用，对hOCT2和hOAT1则无明显抑制作用；hOCTs在去铁酮跨膜转运中不起主导作用。

新疆地区维吾尔族和汉族冠心病合并血脂异常患者有机阴离子转运体家族1B1*5基因多态性分析

目的分析有机阴离子转运体家族1B1(SLCO1B1)~*5基因型和等位基因在新疆地区维吾尔族和汉族冠心病(冠状动脉粥样硬化性心脏病)合并血脂异常患者中的分布特征,为制定他汀类药物个体化用药方案、提高调脂疗效、降低不良反应发生率提供用药依据。方法选取2017年7月至2019年8月就诊于新疆维吾尔自治区人民医院的冠心病合并血脂异常维吾尔族和汉族患者。采用荧光原位杂交技术检测患者SLCO1B1*5基因多态性,采用Hardy-Weinberg平衡检验样本的群体代表性,分析新疆地区维吾尔族和汉族患者SLCO1B1*5基因型和等位基因频率的差异。结果本研究共纳入720例冠心病合并血脂异常患者,其中维吾尔族311例(43.2%)、汉族409例(56.8%)。维吾尔族和汉族患者SLCO1B1*5基因型和等位基因分布频率均符合Hardy-Weinberg平衡定律(均P> 0.05),研究对象具有群体代表性。维吾尔族患者SLCO1B1*5基因型CC、CT、TT的分布频率分别为0.6%(2/311)、19.9%(62/311)、79.4%(247/311),等位基因C、T频率分别为10.6%(66/622)、89.4%(556/622)。汉族患者SLCO1B1*5基因型CC、CT、TT的分布频率分别为1.5%(6/409)、20.8%(85/409)、77.8%(318/409),等位基因C、T频率分别为11.9%(97/818)、88.1%(721/818)。新疆地区维吾尔族和汉族冠心病合并血脂异常患者SLCO1B1*5基因型和等位基因频率差异均无统计学意义(χ^(2)=1.093,P=0.548;χ~2=0.621,P=0.459)。结论根据SLCO1B1*5基因多态性为维吾尔族、汉族冠心病合并血脂异常患者制定他汀类药物个体化用药方案时,无需考虑民族间差异性。

有机阴离子转运体1B1与载脂蛋白E基因多态性分布及对服用瑞舒伐他汀的风险评估

目的:分析有机阴离子转运体1B1(SLCO1B1)与载脂蛋白E(ApoE)基因多态性分布及其对瑞舒伐他汀使用风险的评估价值。方法:选取2017年4月至2020年2月,我院心血管内科收治的高脂血症患者108例,均口服瑞舒伐他汀钙片10 mg/次,1次/d,睡前服用。采用纳米磁珠法提取全血基因组DNA,应用聚合酶链反应(PCR)-焦磷酸测序法测定SLCO1B1与ApoE基因多态性,比较不同SL-CO1B1基因型、不同ApoE基因型患者服药前后TC、TG、HDL-C、LDL-C水平和不良反应发生率。结果:SLCO1B1(521T>C)基因型分布为TT 73.15%、TC 23.15%、CC 3.70%;ApoE基因型分布为ε3/ε364.81%、ε2/ε312.96%、ε3/ε417.59%、ε4/ε44.64%,未见ε2/ε2、ε2/ε4基因型;服药6周后,TC型、CC型TC、LDL-C水平低于TT型,TC型、CC型HDL-C高于TT型(P<0.05),三种基因型患者TG比较,差异无统计学意义(P>0.05);ApoE基因型中,ε3/ε3型服药后TC、LDL-C高于其他基因型(P<0.05),四种基因型TG、HDL-C比较,差异无统计学意义(P>0.05);TC型、CC型肌痛发生率高于TT型,ε2/ε3型头痛、恶心、腹痛、瘙痒发生率高于其他基因型(P<0.05)。结论:SLCO1B1、ApoE基因多态性分布与瑞舒伐他汀疗效和安全性有一定关联,检测SLCO1B1与ApoE基因型有助于进行疗效预测和风险评估,实现个体化给药。

肉毒碱/有机阳离子转运体基因多态性与克罗恩病相关性的研究进展

克罗恩病(CD)是肠道慢性、节段性、透壁性、肉芽肿性炎症性疾病,其发病机制尚未明确,但遗传因素在CD的发病中起重要作用。近年研究将位于5号染色体上的肉毒碱/有机阳离子转运体(OCTN)1和OCTN2确认为CD易感基因,本文就OCTN基因多态性与CD相关性的研究进展作一综述。

有机阳离子转运体3(OCT3)的生物学特点及其在相关神经精神疾病中的作用

有机阳离子转运体3(organic cation transporter 3,OCT3)是一种广泛分布于脑内的低亲和力单胺类递质转运体,也可以转运各类有机阳离子物质,最重要的特点是多在高亲和力单胺类递质转运体(即经典单胺类递质转运体)饱和或功能障碍时发挥代偿性的转运作用。OCT3可以在经典单胺类转运体功能障碍或数量减少时改变细胞内外单胺递质的水平,调节多种药物的代谢、疗效、不良反应,影响多种神经毒物的致病性和毒品的成瘾效应。该转运体的相关基因突变也影响了宿主对某些神经精神性疾病的易感性。本文先概述OCT3的蛋白分子结构、在脑内的分布、编码该分子的基因结构及翻译后调节的方式,再分别阐述该转运体底物的类型及转运机制,进而围绕OCT3的转运机制阐述其在抑郁症、应激相关性成瘾以及帕金森病(Parkinson’s disease,PD)中的作用。

胆管结扎对大鼠血脑屏障上OCT1/2功能和表达的影响及其机制

探讨胆管结扎(BDL)诱导的肝损伤对血脑屏障(BBB)上有机阳离子转运体1/2(OCT1/2)功能和表达的影响及其可能机制。构建BDL大鼠模型,通过试剂盒、Western blot和LC-MS考察BDL大鼠生理生化指标、BBB完整性、皮层OCT1/2蛋白表达和功能以及血浆鹅去氧胆酸(CDCA)浓度。连续14 d灌胃CDCA后测定大鼠生理生化指标、血浆各胆汁酸浓度和皮层OCT1/2蛋白表达。结果显示,BDL大鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)等浓度升高,血浆CDCA浓度升高,金刚烷胺脑血浓度比值(K_(p))降低,皮层Claudin-5和Occludin无明显变化,OCT1表达下调,OCT2无明显变化。大鼠灌胃CDCA后,血清AST、ALT和ALP无明显变化,血浆CDCA浓度升高,皮层OCT1表达下调,OCT2无明显变化。本研究表明,BDL大鼠BBB上OCT1功能与表达下调与血液中升高的CDCA有关。

有机阳离子转运体基因多态性与奥沙利铂毒性及疗效的相关性研究

目的:探讨有机阳离子转运体1的编码基因SLC22A1的SNP位点rs628031、rs650284、rs683369基因多态性与奥沙利铂毒性及临床疗效之间的相关性。方法:选取2018年1月至6月在北京大学深圳医院肿瘤科住院的72例结直肠癌患者,收集患者外周静脉血并提取DNA样本,利用SNaPshot SNP分型技术确定研究位点的基因型并分析。根据常见不良事件评价标准(CTCAE5.0版)评估奥沙利铂的胃肠道毒性、血液毒性以及神经毒性;根据实体瘤的疗效评价标准(RECIST 1.1)评估患者的化疗疗效,结合患者其他临床资料进行统计分析。结果:卡方检验结果显示SLC22A1基因位点rs628031和rs683369的多态性可能与奥沙利铂的化疗毒性及疗效相关。与rs628031 GG基因型相比,携带GA或AA基因型的患者3级恶心呕吐发生率更低(P=0.017),同时疗效反应性也可能更差(P=0.008);与rs683369 CC基因型相比,携带GC或GG基因型的患者3级恶心呕吐发生率更低(P=0.002),同时疗效反应性也可能更差(P=0.014)。结论:SLC22A1的基因多态性与奥沙利铂的毒性及疗效之间存在相关性,可能为接受奥沙利铂治疗的结直肠癌患者的个体化方案调整及预后判断带来帮助。

有机阴离子转运多肽OATP1A2介导芬太尼的转运

目的:建立稳定表达有机阴离子转运多肽1A2(organic anion-transporting polypeptide 1A2,OATP1A2)的HEK293细胞株,体外研究OATP1A2是否转运芬太尼(Fentanyl)。方法:用脂质体转染法将pIRES2-Zs Green1-OATP1A2质粒转染至HEK293细胞中,G418(600 mg/ml)筛选单克隆阳性细胞,采用Western blot、RT-PCR证实HEK293-OATP1A2构建成功;用不同浓度的探针药物非索非那定(Fexofenadine,FEX)验证HEK293-OATP1A2的转运功能;运用不同浓度的芬太尼孵育细胞,另取两组用相同浓度的芬太尼孵育的细胞,分别加或不加抑制剂柚皮素(Naringenin,100μg/m L)进行HEK293-OATP1A2转运实验。结果:FEX浓度为1、10、100 nM时HEK293-OATP1A2实验组与HEK293-VC对照组,FEX的吸收值均有显著的统计学差异(P<0.05),且FEX浓度为100 nM时,实验组对FEX的吸收值是对照组的2.8倍;加入抑制剂柚皮素组FEX吸收值较不加抑制剂时减少了66.8±0.6%。芬太尼转运结果显示,芬太尼浓度为1、10、100、1000 nM时实验组与对照组比较,芬太尼的吸收值均有显著的统计学差异(P<0.05),且芬太尼浓度为1000 nM时,实验组对芬太尼的吸收值是对照组的2.2倍;加入抑制剂组芬太尼的吸收值较未加抑制剂组减少了86.5±0.5%(P<0.05)。结论:成功建立了稳定表达OATP1A2的HEK293细胞株,体外研究发现OATP1A2能介导芬太尼的转运。

台儿庄地区心脑血管疾病患者ApoE和SLCO1B1基因多态性分析

目的:分析台儿庄地区心脑血管疾病患者他汀类药物代谢相关基因ApoE和SLCO1B1的基因多态性分布情况,评估患者对服用他汀类药物的疗效和风险,指导临床进行个体化精准用药。方法:以2022年3月-2023年1月与台儿庄人民医院神经内科及心内科就诊的268例心脑血管病患者为研究对象,应用DNA连接酶测序法对患者外周血基因组中ApoE和SLCO1B1基因进行检测,分析基因多态性分布情况,并比较不同性别,不同年龄段,不同地域间的基因型分布差异。结果:观察268例台儿庄地区心脑血管病患者的ApoE及SLCO1B1基因位点多态性突变频率符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律。ApoE基因型共检出5种,其中E3/E3型占比最大,为76.9%,其他基因型E2/E2型,E2/E3型,E3/E4型,E4/E4型占比依次为0.37%,10.4%,11.9%,0.37%,未检出E2/E4型。疗效正常基因型E3型(E2/E4+E3/E3)占比最高,为76.87%,疗效较好基因型E2型(E2/E2+E2/E3)与疗效较差基因型E4型(E3/E4+E4/E4)占比分别为10.82%,12.31%。不同性别,不同年龄患者间ApoE不同疗效基因型分布差异无统计学意义(P>0.05),但不同地区间比较,ApoE不同疗效基因型分布差异有统计学意义(P<0.05)。SLCO1B1基因共检出6种基因型,其中*1b/*1b,*1b/*15,*1a/*1b占比较高,分别为28.73%,20.15%,41.79%,其他基因型*1a/*1a,*1a/*15or*1b/*5,*15/*15频率分别为5.6%,3.36%,0.37%,未检测到*1a/*5、*5/*5和*5/*15基因型。基因型组合中,肌病低风险基因型(*1a/*1a+*1a/*1b+*1b/*1b)占比最高为76.12%,肌病中风险基因型(*1a/*5+*1a/*15or*1b/*5+*1b/*15)和肌病高风险基因型(*5/*5+*5/*15+*15/*15)占比分别为23.51%,0.37%。不同性别,不同年龄,不同地区间患者比较,SLCO1B1不同肌病风险基因型频率分布差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:台儿庄地区心脑血管病患者ApoE基因以疗效正常型E3型为主,SLCO1B1基因以肌病低风险基因型为主,且两种基因型各组合与年龄,性别无关,ApoE基因存在地区差异。通过基因检测可筛选出12.31%疗效较差的患者以及23.88%的肌病中高风险患者,可辅助临床制定合理的用药方案。

茯苓水提物对高尿酸血症大鼠rURAT1 rOAT1和rOCT2表达的影响

目的考察茯苓水提物对高尿酸血症大鼠肾脏组织中尿酸转运体1(rURAT1)、有机阴离子转运体1(rOAT1)和有机阳离子转运体2(rOCT2)表达的影响,探讨茯苓降低血尿酸水平的机制。方法将右侧肾脏摘除的48只大鼠随机分为6组:手术对照组、模型组、别嘌呤醇阳性对照组,茯苓水提物高、中、低剂量组。药物干预28d,实验期间定期检测血尿酸和血清肌酐水平,采用免疫印迹法检测各组大鼠肾脏组织中rURAT1、rOAT1和rOCT2的表达。结果茯苓水提物高、中、低剂量组的血尿酸水平均较模型组大鼠明显降低;肾脏组织中rOAT1和rOCT2的表达均较模型组大鼠明显升高,而其rURAT较模型组大鼠显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论茯苓水提物通过调节肾脏组织中rURAT1、rOAT1和rOCT2的表达,从而发挥促进高尿酸血症大鼠尿酸的排泄作用。

稳定表达人有机阳离子转运体1的细胞模型构建

目的建立能稳定表达人有机阳离子转运体1(human organic cation transporter1,hOCT1)野生型及两个突变体的马丁达比狗肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞模型。方法从人肝组织中提取hOCT1野生型基因,经定点突变获得hOCT1P341L,hOCT1M420del两个突变型基因,构建表达质粒pcDNA3.1(+)-hOCT1,pcDNA3.1(+)-hOCT1P341L,pcDNA3.1(+)-hOCT1M420del。将质粒转染MDCK细胞,通过G418筛选获得抗性克隆,并通过hOCT1的荧光底物(4-二甲氨基苯乙烯基)-N-甲基吡啶(ASP+)筛选得到具有较高活性的MDCK-hOCT1细胞。经反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及经典底物N-甲基-4-苯基吡啶(MPP+)的摄取实验,鉴定筛选得到的单克隆细胞株hOCT1 mRNA的表达及功能。结果本实验获得的hOCT1野生型及2个突变体细胞模型与转染空载体的MDCK细胞相比,其hOCT1 mRNA表达量显著增高,对经典底物MPP+的摄取为转染空载体细胞的12.5,13.7,12.0倍,hOCT1抑制剂可显著抑制细胞对MPP+的摄取。结论建立的细胞模型可用于hOCT1抑制剂及底物的筛选。

OCT1基因rs2282143 rs628031和rs36056065多态性对二甲双胍药代动力学的影响

目的探讨有机阳离子转运体1(OCT1)基因中rs2282143(P341L,1022C>T)、rs628031(M408V,1222A>G)和rs36056065(ins/del GTAAGTTG)多态性对二甲双胍药代动力学的影响。方法 65例男性健康自愿者空腹口服盐酸二甲双胍片500mg,采用液相色谱-串联质谱法测定血浆中二甲双胍的浓度,并根据rs2282143、rs628031和rs36056065多态性进行分组。结果 rs2282143多态性中CC、CT和TT分别为45例(69.2%)、19例(29.2%)和1例(1.5%),CC和CT组间的Cmax、Tmax、AUC0-t、AUC0-∞和T1/2差异无统计学意义(P>0.05)。rs628031与rs36056065等位基因完全连锁,其中AA/ins、AG/ins-del和GG/del分别为8例(12.3%)、24例(36.9%)和33例(50.8%)。AG/ins-del的Cmax、AUC0-t、AUC0-∞显著高于AA/ins和GG/del,差异有统计学意义(P<0.05),AA/ins和GG/del之间差异无统计学意义(P>0.05);Tmax、T1/2在3种基因型间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rs2282143多态性与二甲双胍药代动力学无相关性,完全连锁的rs628031和rs36056065与二甲双胍药代动力学密切相关。

糖尿病肾病大鼠肾脏MATE1和OCT2表达及体内二甲双胍排泄变化研究

目的:研究糖尿病肾病状态下大鼠体内二甲双胍排泄的变化和肾脏中多药及毒性化合物外排转运体1(MATE1)和有机阳离子转运体2(OCT2)表达的变化,并探讨两者之间的关系。方法:雄性SD大鼠随机分为对照组(n=12)和造模组(n=12),链脲佐菌素腹腔注射诱导大鼠糖尿病肾病模型;大鼠尾静脉注射二甲双胍(10 mg/kg),考察其在大鼠体内的药物代谢动力学参数,膀胱插管实验考察大鼠体内各时间段的累积尿药排泄分数及肾清除率,测定大鼠肝脏和肾脏药物浓度;RT-qPCR和Western blot检测大鼠肾脏组织MATE1和OCT2的mRNA及蛋白表达水平。结果:与对照组相比,糖尿病肾病大鼠体内的二甲双胍血浆暴露量显著降低(P<0.01),二甲双胍清除率显著升高(P<0.01),二甲双胍在大鼠体内的稳态表观分布容积显著降低(P<0.01),平均滞留时间显著降低(P<0.01),半衰期显著缩短(P<0.05);糖尿病肾病大鼠2 h内二甲双胍的累积尿药排泄分数显著升高(P<0.05),肾清除率显著升高(P<0.01);糖尿病肾病大鼠肾脏中二甲双胍的药物浓度显著降低(P<0.05),肝脏中药物浓度无显著性差异;糖尿病肾病大鼠肾脏MATE1的mRNA表达水平显著升高(P<0.05),OCT2的mRNA水平显著降低(P<0.05),MATE1的蛋白表达水平显著升高(P<0.01),OCT2的蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:糖尿病肾病状态下大鼠肾脏MATE1表达升高,而OCT2表达下降;糖尿病肾病大鼠二甲双胍肾脏排泄的加快,可能主要与肾脏MATE1转运体表达升高相关。

Oatp1和Oct1在大鼠下颌骨来源成骨细胞中的表达

目的:通过检测大鼠下颌骨成骨细胞中Oatp1和Oct1蛋白的表达,观察其在成骨细胞中的分布,探讨Oatp1和Oct1在成骨细胞跨膜转运中的作用及意义。方法:分离培养大鼠下颌骨成骨细胞并鉴定,应用免疫细胞化学及Western-Blot的方法检测大鼠下颌骨来源成骨细胞中Oatp1和Oct1蛋白的表达。结果:组织块法可成功培养大鼠下颌骨成骨细胞,Oatp1和Oct1在成骨细胞中有广泛表达,且主要分布在胞膜和胞质中。结论:大鼠下颌骨来源的成骨细胞可广泛表达Oatp1和Oct1,为研究药物在成骨细胞中的跨膜转运提供了基础。

褐藻多糖硫酸酯对尿酸性肾病大鼠相关肾脏转运体的影响

目的:探讨褐藻多糖硫酸酯(FPS)对尿酸性肾病(UAN)大鼠肾组织相关肾脏转运体的影响。方法:60只雄性SD大鼠随机分成6组:正常对照组、模型组、苯溴马隆阳性对照组及FPS低、中、高剂量组。采用10%高酵母饲料联合腺嘌呤100 mg/(kg·d)灌胃,制造UAN模型。造模开始后第22天,药物治疗组分别给予苯溴马隆片20 mg/(kg·d)及FPS 100、200、400 mg/(kg·d),共28 d。实验第49天,处死大鼠,测定血清UA、BUN、Cr水平;HE染色观察肾脏组织病理变化;免疫组化法观察肾脏组织尿酸盐阴离子交换器1(URAT1)、有机阴离子转运子1(OAT1)、有机阳离子转运体2(OCT2)的表达。结果:FPS能显著降低UAN大鼠血清UA、BUN、Cr水平,具有保护肾功能作用;并显著下调UAN大鼠肾脏URAT1的表达,同时上调OAT1、OCT2的表达。结论:FPS可能通过下调URAT1的表达,同时上调OAT1、OCT2的表达而达到促进UAN大鼠尿酸排泄以降低血清尿酸水平,改善肾功能。

基于高尿酸血症小鼠OCT1表达的萆薢渗湿汤降尿酸机制研究

目的:探讨萆薢渗湿汤对高尿酸血症小鼠的影响及机制。方法:昆明小鼠随机分为空白组、模型组和中药低、高剂量组,检测各组小鼠血清尿酸水平和肾、小肠和大肠各组织中OCT1表达水平。结果:与模型组比较,中药低、高剂量组小鼠血清尿酸水平明显降低,小鼠肾、小肠和大肠各组织OCT1表达量明显升高。结论:萆薢渗湿汤能明显降低小鼠血清尿酸水平,其机制可能是上调小鼠肾、小肠和大肠组织OCT1表达水平。

WNK-SPAK/OSR1-CCCs信号通路与缺血性脑卒中关系的研究进展

WNK-SPAK/OSR1-CCCs信号通路与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(WNK)和下游Ste20相关的富含脯氨酸-丙氨酸激酶(SPAK)或SPAK同源物氧化应激反应激酶1(OSR1)以及阳离子-氯离子共转运体(CCCs)有关。大量证据表明WNK-SPAK/OSR1-CCCs信号通路是缺血性脑卒中期间细胞水肿、氯离子稳态失衡和缺血性脑卒中后痉挛发生发展的重要病理生理因素,遂提出WNK-SPAK/OSR1-CCCs信号通路可能与缺血性脑卒中的发病机制有关这一理念。该文将以CCCs家族中的钠钾氯共转运体亚型1(NKCC1)、钾氯共转运体亚型2(KCC2)、钾氯共转运体亚型3(KCC3)为切入点综述WNK-SPAK/OSR1-CCCs信号通路与缺血性脑卒中的关系,为明确WNK-SPAK/OSR1-CCCs信号通路在缺血性脑卒中治疗过程中的具体机制以及临床治疗脑卒中提供理论依据。

有机阴离子转运体1抑制剂筛选模型的构建及应用

目的建立能稳定表达有机阴离子转运体1(organic anion transporter,OAT1)的马丁达比狗肾上皮(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞转基因细胞模型,利用该模型初步筛选OAT1的抑制剂。方法采用脂质体转染法将质粒pcDNA3.1(+)通过Lipofectamine^(TM)2000转染试剂转染MDCK细胞,并经G418筛选获得阳性克隆。通过OAT1的经典底物6-羧基荧光素(6-carboxyfluorescein,6-CFL)在单克隆细胞内的积聚量以及中药单体存在时细胞内的积聚量来检测OAT1的活性。实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-tinle PCR)检测OAT1的mRNA的表达量。利用稳定细胞株,研究了6-CFL在MDCK-mock和MDCK-OAT1细胞中的摄取、中药单体对6-CFL摄取的抑制特性。结果 qRT-PCR结果表明,所建立的MDCK-OAT1细胞与mock细胞相比,OAT1 mRNA相对表达量为后者的4 862倍,摄取6-CFL的能力为后者的14.9倍。6-CFL在细胞株中摄取的K_m值为42.36μmol·L^(-1),部分中药单体能显著抑制MDCK-OAT1转运6-CFL的能力。结论 OAT1抑制剂筛选模型构建成功,并能快速有效地筛选出对OAT1有潜在抑制作用的中药单体,为后期的基于OAT1的植物-药物相互作用提供实验基础。

基于肾脏类器官研究镁离子减轻顺铂诱导的急性肾损伤的作用和机制

目的利用肾脏类器官和HK-2细胞研究镁离子(Mg2+)对顺铂诱导的急性肾损伤(cisplatin-induced acute kidney injury,Cis-AKI)的作用,并探究可能的机制。方法首先利用人源性诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs)构建肾脏类器官,在此基础上构建Cis-AKI模型,利用HE染色观察肾脏类器官结构,通过免疫荧光染色观察标志物定位及cleaved caspase-3表达,通过qRT-PCR检测肾小管和肾小球标志物及炎症因子mRNA水平。随后将肾脏类器官及HK-2细胞随机分为对照组、顺铂组(Cis组)和Mg2+预处理组(Cis+Mg2+组)。通过CCK-8和ATP含量评估肾小管上皮细胞的活力;利用TUNEL染色检测肾小管上皮细胞凋亡情况;通过Western blot检测细胞凋亡通路的关键蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3及有机阳离子转运体2(organic cation transporter 2,OCT2)表达;通过免疫荧光检测OCT2的定位与表达。结果肾脏类器官培养第10天的肾小管结构清晰,肾脏标志物大量表达;10μmol/L顺铂导致肾脏类器官结构破坏,cleaved caspase-3表达量和炎症因子mRNA水平显著升高,ATP含量显著下降。与Cis组相比,Cis+Mg2+组肾脏类器官ATP含量升高,TUNEL阳性细胞数减少,细胞凋亡相关蛋白表达显著下降,OCT2表达显著下降;而Cis+Mg2+组HK-2细胞活力、TUNEL阳性细胞数及凋亡相关蛋白均无明显改善,且几乎不表达OCT2。结论肾脏类器官是研究Cis-AKI发病与治疗的理想体外模型;Mg2+预处理可显著减轻顺铂所致肾脏类器官的损伤,其机制可能与OCT2的下调有关。

阳离子-氯离子共转运体KCC2、NKCC1在对氯苯丙氨酸致急性失眠大鼠模型脑干中的表达

目的探讨阳离子-氯离子共转运体KCC2、NKCC1在大鼠急性失眠发生机制中的作用。方法SD大鼠腹腔注射对氯苯丙氨酸（PCPA）制作急性失眠大鼠模型，同步设立生理盐水对照组和地西泮干预组，每组6只；用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫印迹（Western blot）检测各组大鼠脑干KCC2、NKCC1的表达；用氯离子荧光探针（MQAE），结合激光共聚焦显微镜观察脑干组织细胞内氯离子浓度（[C1-]i）。结果（1）模型组和干预组的KCC2 mRNA及蛋白表达均低于对照组（mRNA丰度值：0．196±0．021比0．939±0．109，P〈0．05；0．485±0．026比0．939±0．109，P〈0．05；蛋白相对值：0．363±0．058比0．967±0．155，P〈0．05；0．663±0．106比0．967±0．155，P〈0．05）；干预组高于模型组（mRNA丰度值：0．485±0．026比0．196±0．021，P〈0．05；蛋白相对值：0．663±0．106比0．363±0．058，P〈0．05）。（2）模型组的NKCC1 mRNA及蛋白表达稍高于对照组，但差异无统计学意义（mRNA丰度值：0．344±0．026比0．320±0．019，P〉0．05；蛋白相对值：0．244±0．010比0．230±0．021，P〉0．05）；干预组较对照组和模型组降低（mRNA丰度值：0．066±0．031比0．320±0．019，P〈0．05；0．066±0．031比0．344±0．026，P〈0．05；蛋白相对值：0．131±0．012比0．230±0．021，P〈0．05；0．131±0．012比0．244±0．010，P〈0．05）。（3）模型组的[Cl-]i高于对照组和干预组（相对值：0．0315±0．0039比0．0164±0．0019，P〈0．05；0．0315±0．0039比0．0182±0．0013，P〈0．05）；干预组稍高于对照组，但差异无统计学意义（相对值：0．0182±0．0013比0．0164±0．0019，P〉0．05）。结论（1）脑干KCC2表达下调及[Cl-]i的升高可能参与大鼠急性失眠的病理机制；（2）地西泮可能通过上调KCC2和下调NKCC1的表达，进而降低[Cl-]i而发挥镇静催眠作用。