野生大豆阳离子质子转运体CHX19.3与14-3-3蛋白的相互作用研究

植物14-3-3家族作为蛋白互作的桥梁,在逆境应答过程中发挥重要作用。前期获得了一个野生大豆阳离子质子转运体CHX19.3,其能显著提高耐盐碱性。为进一步揭示CHX19.3调控耐盐碱性的分子机制,研究利用分裂泛素的酵母双杂交系统鉴定了CHX19.3与14-3-3家族蛋白的相互作用。结果显示成功构建了诱饵载体pBT3-STE-GsCHX19.3,GsCHX19.3-Cub-LexAVP16融合蛋白对酵母菌没有毒性,且拓扑结构符合该酵母双杂交系统。Y2H结果发现在检测的10个14-3-3蛋白中,只有GF14f能够与CHX19.3蛋白互作,其余14-3-3蛋白均不存在相互作用。研究表明野生大豆CHX19.3与14-3-3家族蛋白互作具有特异性,为进一步深入研究CHX19.3通过与GF14f互作调控耐盐碱性的分子机理奠定了基础。

CircBACH1调节miR-101-3p/KPNA2轴对骨肉瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:探究环状RNA BACH1(circBACH1)靶向微小RNA-101-3p(miR-101-3p)/核转运蛋白α2(KPNA2)轴对骨肉瘤(OS)细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。方法:qRT-PCR法分析OS组织中circBACH1和miR-101-3p表达水平。双荧光素酶检测circBACH1和miR-101-3p及KPNA2和miR-101-3p的靶向关系。在OS细胞MG-63中转染相应质粒记为si-NC组、si-circBACH1组、si-circBACH1+anti-NC组、si-circBACH1+anti-miR-101-3p组、miR-NC组、miR-101-3p mimics组、miR-101-3p mimics+pcDNA组、miR-101-3p mimics+KPNA2组。平板克隆检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;Transwell实验检测细胞侵袭能力。Western blot法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、裂解的胱天蛋白酶-3(C-caspase-3)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏附蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达变化。小鼠移植瘤实验验证circBACH1对OS肿瘤生长及miR-101-3p/KPNA2的影响。结果:在OS组织中,circBACH1表达上调,miR-101-3p表达下调(P<0.05)。抑制circBACH1表达,可显著抑制OS细胞增殖与侵袭,诱导凋亡(P<0.05)。抑制miR-101-3p表达可促进OS细胞增殖与侵袭,抑制细胞凋亡(P<0.05)。miR-101-3p过表达可下调KPNA2表达,抑制OS细胞增殖与侵袭,诱导凋亡(P<0.05)。KPNA2过表达可以逆转过表达miR-101-3p对OS细胞增殖与侵袭的抑制作用(P<0.05)。小鼠移植瘤实验结果显示,抑制circBACH1表达,移植瘤体积及质量降低,miR-101-3p表达水平升高,KPNA2表达水平降低(P<0.05)。结论:circBACH1在OS组织中高表达,抑制circBACH1表达,可抑制OS细胞增殖与侵袭,诱导凋亡,其与调节miR-101-3p/KPNA2轴有关。

米扎格列净通过抑制钠-葡萄糖共转运体1的功能抑制常染色体显性多囊肾细胞增殖和纤维化

目的探究钠-葡萄糖共转运体1(SGLT1)抑制剂米扎格列净(MIZA)在常染色体显性多囊肾病(ADPKD)中的作用。方法用蛋白质印迹法、qPCR、免疫荧光染色测定PKD1^(-/-)小鼠和PKD1^(+/+)小鼠肾脏组织、人肾癌旁组织和人ADPKD组织中SGLT1的表达和分布。用MIZA处理囊肿衬里上皮细胞OX161和肾小管上皮细胞UCL93,37℃孵育24、48和72 h后通过MTT实验和集落形成实验观察细胞增殖情况。以100μmol/L MIZA处理OX161细胞48 h后,通过qPCR测定细胞中α1-Ⅰ型胶原蛋白、α1-Ⅲ型胶原蛋白和纤连蛋白1的mRNA表达量。用犬肾细胞MDCK 3D囊肿形成实验验证MIZA对囊肿形成的作用。通过mRNA-seq数据分析筛选UCL93细胞和OX161细胞、OX161细胞和100μmol/L MIZA处理48 h后的OX161细胞的差异表达基因,利用京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库进行通路富集分析。结果SGLT1在ADPKD患者和PKD1^(-/-)小鼠多囊肾组织中的表达水平较正常肾脏组织升高(P<0.05,P<0.01),免疫荧光染色发现SGLT1主要表达在囊肿衬里上皮细胞。在体外实验中,MIZA呈浓度和时间依赖性地抑制多囊肾细胞的增殖和纤维化,3D形成实验表明MIZA抑制了囊肿的形成。mRNA-seq数据分析和KEGG富集分析结果显示,OX161细胞和100μmol/L MIZA处理48 h的OX161细胞的差异表达基因主要富集在PI3K-Akt、MAPK等信号通路,与OX161细胞和UCL93细胞的差异表达基因富集通路相同。结论SGLT1抑制剂MIZA可能通过PI3K-Akt、MAPK等通路抑制多囊肾细胞的增殖和纤维化,延缓多囊肾的生长,是ADPKD的一个潜在治疗靶点。

葡萄糖转运蛋白-1和-3在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑内表达的变化及意义

目的探讨缺氧缺血性脑损伤(H IBD)后脑内负责葡萄糖转运的两个重要蛋白质葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)与葡萄糖转运蛋白-3(GLUT-3)表达的变化,揭示H IBD后脑内能量衰竭的发病机制。方法将30只7日龄W istar大鼠随机分为正常对照组(n=5)、假手术对照组(n=5)和H IBD组(n=20)。H IBD组大鼠模型的制备参照R ice。方法结扎右侧颈总动脉后8%低氧暴露1 h。假手术对照组只分离右侧颈动脉,不予结扎和缺氧。缺氧缺血后1,3,5,10 d各处死5只H IBD大鼠,免疫组化方法检测大鼠脑内GLUT1及GLUT3表达,并与对照组和假手术组比较。结果正常新生大鼠脑内微血管即可见GLUT1表达。H IBD后1 d,缺血侧半球GLUT1表达略有增加,3 d达高峰,至5 d时仍高于正常,10 d基本恢复正常水平。H IBD后1 d,GLUT3表达无明显变化,3 d时GLUT3表达已明显减少,5 d时进一步减少,10 d时仍显著低于对照组。GLUT3表达减少最显著的部位为海马CA1区。结论H IBD后脑内GLUT1和GLUT3的表达异常可导致脑能量代谢途径改变,加重缺氧缺血后神经元的损伤及影响损伤神经元的修复。

人源有机阴离子转运多肽1B1和多药耐药相关蛋白2双转MDCKⅡ细胞株的构建及其功能验证

目的构建人源有机阴离子转运多肽1B1(human organic anion transporting polypeptide 1B1,hOATP1B1)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein2,hMRP2)双转MDCKⅡ细胞株,验证其功能,并应用其考察创新药物2,3-双加氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)的转运特性。方法采用基因工程手段获得hOATP1B1和hMRP2表达真核载体pVITRO2-SLCO1B1-ABCC2,转染MDCKⅡ细胞,通过遗传霉素G418筛选得到稳定表达的细胞株;通过Realtime PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜确认目的蛋白特异性;利用该双转模型考察普伐他汀(不同pH环境和不同底物浓度)和1-MT的转运。结果经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明重组质粒构建成功;通过Real-time PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜证明经遗传霉素筛选的MDCK-OATP1B1/MRP2细胞构建成功;pH=6.5时,普伐他汀在所构建双转细胞模型上转运最佳;在0~500μmol/L的浓度范围内,普伐他汀在该模型上的转运呈现浓度依赖性。1-MT在该细胞模型上无明显转运。结论成功构建人源MDCKOATP1B1/MRP2双转细胞株,发现1-MT既不是OATP1B1蛋白也不是MRP2蛋白的底物,该细胞株可用于OATP1B1/MRP2介导的外源性物质(如药物)和内源性物质(如胆红素)的转运研究。

单羧酸转运蛋白1增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸的敏感性

目的探究单羧酸转运蛋白1(MCT1)在增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸(3-Br PA)敏感性中的作用,为乳腺癌治疗提供新思路。方法 MTT法检测3-Br PA对乳腺癌细胞的增殖抑制作用,溴化丙啶单染法流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA试剂盒检测细胞内己糖激酶Ⅱ、乳酸脱氢酶、乳酸、三磷酸腺苷水平,Western blot检测MCT1蛋白的表达,瞬时转染c DNA上调MCT1的表达后,检测3-Br PA对MDA-MB-231细胞的增殖和三磷酸腺苷水平的影响。结果 3-Br PA对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响不明显,200μmol/L作用24 h后增殖抑制率和凋亡率仅为8.72%和7.8%;但200μmol/L 3-Br PA作用MCF-7细胞24 h后其增殖抑制率和凋亡率为84.6%和82.3%。MDA-MB-231细胞的MCT1过表达后,200μmol/L 3-Br PA对细胞的增殖抑制率为72.44%,明显高于对照组(P<0.05);25、50、100、200μmol/L 3-Br PA作用细胞6 h后,细胞内三磷酸腺苷水平和对照组相比分别为96.98%、88.44%、43.3%、27.56%。结论 MCT1能增强乳腺癌细胞对3-Br PA的敏感性,其机制可能是将3-Br PA转运到细胞内,从而抑制细胞糖酵解来发挥抗肿瘤作用。

1, 25-二羟基维生素D_(3)通过下调葡萄糖转运蛋白-1表达抑制膀胱癌细胞增殖

目的:研究1,25-二羟基维生素D_(3)(1,25-(OH)_(2)-VitD_(3))对膀胱癌细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养膀胱癌细胞T24,MTT法检测不同浓度1,25-(OH)_(2)-VitD_(3)对细胞活力的影响,并筛选1,25-(OH)_(2)-VitD_(3)干预细胞的最佳时间及半数抑制浓度。将细胞分为4组:对照组、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT1)抑制组、1,25-(OH)_(2)-VitD_(3)组、1,25-(OH)_(2)-VitD_(3)+GLUT1抑制组。采用Hoechst 33258染色观察各组细胞形态变化;试剂盒检测细胞内葡萄糖摄取、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)产生及乳酸形成水平;Real-time PCR及Western blot检测GLUT1、己糖激酶2(hexokinase 2,HK2)、6-磷酸果糖-2-激酶/果糖-2,6-二磷酸酶3(6-phosphofructo-2-kinase/fructose-2,6-biphosphatase 3,PFKFP3)、丙酮酸激酶同工酶2(pyruvate kinase isozyme type M2,PKM2)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase A,LDHA)和低氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)mRNA和蛋白表达水平。结果:1,25-(OH)_(2)-VitD_(3)可降低T24细胞增殖能力,且呈剂量依赖性。1,25-(OH)_(2)-VitD_(3)组、GLUT1抑制组及1,25-(OH)_(2)-VitD_(3)+GLUT1抑制组细胞凋亡水平高于对照组,而GLUT1、HK2、PFKFP3、PKM2、LDHA和HIF-1αmRNA及蛋白表达水平明显低于对照组。与GLUT1抑制组比较,1,25-(OH)_(2)-VitD_(3)+GLUT1抑制组GLUT1、HK2、PFKFP3、PKM2、LDHA和HIF-1αmRNA(均P=0.000)和蛋白(均P=0.000)表达水平明显降低。结论:1,25-(OH)_(2)-VitD_(3)可抑制膀胱癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其作用机制可能与下调GLUT1表达抑制细胞糖酵解过程有关。

PGE_(2)通过EP4/PKA信号通路调控滑膜细胞OAT1的表达及CP-25的作用

目的明确前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE_(2))对滑膜细胞有机阴离子转运体1(organic anion transporter 1,OAT1)膜表达的调控机制及芍药苷-6'-O-苯磺酸酯(CP-25)的作用。方法免疫荧光法检测不同浓度CP-25对PGE_(2)处理后滑膜细胞OAT1和前列腺素E受体4(prostaglandin E receptor 4,EP4)表达的影响;使用EP4激动剂(TCS2510)与拮抗剂(GW627368X),探究EP4在OAT1调节中的作用;使用CP-25和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)抑制剂H-89,探究CP-25和PKA对滑膜细胞OAT1表达的影响。结果PGE_(2)在0~10 min内明显下调EP4与OAT1的膜表达,20~60 min后明显上调(P<0.05);CP-25明显上调PGE_(2)处理后细胞膜OAT1和EP4的表达(P<0.05);EP4激动剂TCS2510明显上调细胞膜OAT1的表达(P<0.01);CP-25上调PGE_(2)处理的细胞中OAT1的表达,GW627368X和H-89均能下调PGE_(2)和CP-25处理的滑膜细胞中OAT1的表达(P<0.01)。结论PGE_(2)介导的EP4/PKA信号通路可以调控OAT1在滑膜细胞膜上的表达,CP-25可以通过活化EP4/PKA信号通路明显上调滑膜细胞中OAT1的膜表达。

CP-25对大鼠胶原性关节炎OAT1的调控作用及机制

目的 明确胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)大鼠滑膜有机阴离子转运蛋白1(organic anion transporter^(-1),OAT1)的表达变化及芍药苷-6'-O-苯磺酸酯(paeoniflorin-6'-O-benzenesulfonate,CP-25)的作用,并初步探讨其可能的调控机制。方法 建立大鼠CIA模型,给予CP-25、帕罗西汀、前列腺素E受体4 (prostaglandin E receptor 4,EP4)拮抗剂或CP-25+EP4拮抗剂联用治疗,甲氨蝶呤为阳性对照药。测量足爪容积,进行全身及关节炎指数评分,计算关节肿胀数,进行足爪X线摄片、踝关节病理检查及评分。ELISA测定血清前列腺素E_(2) (prostaglandin E_(2),PGE_(2))水平;Western blot测定CP-25用药后大鼠滑膜组织膜蛋白及总蛋白表达水平。结果 CP-25可减轻CIA大鼠足爪肿胀情况,降低CIA大鼠全身评分、关节炎指数、足爪容积和肿胀关节数,能明显缓解CIA大鼠组织病理学改变及骨侵蚀程度。此外,CP-25能降低CIA大鼠血清PGE_(2)浓度。CIA大鼠滑膜组织OAT1和EP4膜表达均下调,CP-25或帕罗西汀处理增加了OAT1和EP4的表达水平,而EP4拮抗剂可抑制CP-25对OAT1的影响。此外,CIA模型大鼠滑膜组织p-GRK2表达上调;CP-25或帕罗西汀干预后p-GRK2表达均降低;PKA的表达趋势与OAT1相似。结论 OAT1在CIA大鼠滑膜组织中膜表达降低,CP-25治疗可上调OAT1的表达。PGE_(2)-EP4-PKA信号通路可能参与了CP-25对OAT1的调控。

熊果苷调节PI3K/Akt/GLUT1信号通路对胃癌细胞恶性进展的影响

目的 探讨熊果苷(Arb)调节磷脂酰肌醇-3激酶B/蛋白激酶B/葡萄糖转运蛋白1(PI3K/Akt/GLUT1)信号通路对胃癌细胞恶性进展的影响。方法 使用不同浓度(12.5、25、50、100、200、400 mol/L)Arb处理SNU-601细胞,检测细胞活性,筛选最佳浓度;将细胞分为对照组(Control组)、熊果苷低、中、高浓度组(L-Arb组、M-Arb组、H-Arb组)、熊果苷高浓度+PI3K/Akt激活剂组(H-Arb+740 Y-P组),分别检测细胞凋亡率、细胞周期、葡萄糖摄取、乳酸生成、ATP生成、细胞迁移数和细胞侵袭数;Western blot检测Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、p-PI3K、PI3K、p-Akt、Akt、GLUT1、HKⅡ蛋白表达。结果 12.5~400 mol/L的Arb可显著抑制SNU-601细胞增殖,选择50、100、200 mol/L的Arb进行后续实验。与Control组比较,L-Arb组、M-Arb组、H-Arb组细胞活性、葡萄糖摄取、乳酸生成、ATP生成、细胞迁移数、细胞侵袭数及Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、GLUT1、HKⅡ蛋白表达降低,细胞凋亡率和Bax、cleaved-caspase3蛋白表达增加(P<0.05);与H-Arb组比较,H-Arb+740 Y-P组细胞活性、葡萄糖摄取、乳酸生成、ATP生成、细胞迁移数、细胞侵袭数及Bcl-2、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、GLUT1、HKⅡ蛋白表达增加,细胞凋亡率和Bax、cleaved-caspase3蛋白表达降低(P<0.05)。结论 Arb通过抑制PI3K/Akt/GLUT1信号通路抑制胃癌细胞恶性进展。

鸡OATP1B3互作蛋白筛选及其相关基因的转录表达分析

【目的】筛选鉴定鸡有机阴离子转运多肽1B3(OATP1B3)的互作蛋白,并探究其对鸡蛋绿壳颜色形成的影响,为提高绿壳蛋鸡群体选育准确性提供参考依据。【方法】以真核表达载体p EGFP-SLCO1B3和空载体pEGFP-C1分别转染绿壳型赤水乌骨母鸡蛋壳腺上皮细胞,通过免疫共沉淀(Co-IP)结合液相色谱与串联质谱联用技术(LC-MS/MS)筛选鸡OATP1B3互作蛋白,经GO功能注释分析、KEGG信号通路富集分析及蛋白相互作用网络分析鉴定出与鸡蛋绿壳性状形成相关的OATP1B3互作蛋白。同时,通过构建SLCO1B3基因沉默及过表达载体分别转染蛋壳腺上皮细胞,检测SLCO1B3基因过表达或沉默时部分OATP1B3互作蛋白基因(FXR1、CTTN、RPL12和RPS17)在蛋壳腺上皮细胞中的表达情况,并根据鸡蛋壳颜色分为白壳、浅绿和深绿3种类型,分析蛋壳颜色△a*值与FXR1、CTTN、RPL12和RPS17基因表达的相关性。【结果】共筛选鉴定出37个与鸡OATP1B3相互作用的蛋白,其中FXR1、CTTN、RPL12和RPS17与鸡蛋的绿壳性状有密切关系。SLCO1B3基因过表达能极显著下调蛋壳腺上皮细胞内FXR1基因的表达(P<0.01,下同),显著上调RPL12基因表达(P<0.05,下同),极显著上调RPS17基因表达;当SLCO1B3基因沉默后,蛋壳腺上皮细胞内FXR1和CTTN基因的表达极显著上调,而RPL12基因的表达显著下调。白壳类型赤水乌骨母鸡下丘脑中的FXR1基因相对表达量极显著高于绿壳类型赤水乌骨母鸡,肝脏中的RPL12和RPS17基因相对表达量极显著或显著高于绿壳类型赤水乌骨母鸡;此外,FXR1基因在下丘脑中的相对表达量与蛋壳颜色△a*值极显著正相关,RPL12基因在蛋壳腺和肝脏中的相对表达量与蛋壳颜色△a*值极显著正相关。【结论】筛选鉴定出的37个鸡OATP1B3互作蛋白主要定位于细胞质和细胞核,具有蛋白结合能力及结构分子活性,主要参与细胞过程、生物调节和能量代谢。在鸡壳腺上皮细胞内SLCO1B3基因与FXR1、CTTN、RPL12和RPS17基因间存在调控关系,其中,FXR1和RPL12基因在鸡蛋绿壳性状的形成过程中发挥着重要作用。

^(99)Tc^m-TRODAT-1多巴胺转运蛋白SPECT脑显像在帕金森病早期诊断中的价值

目的探讨 99Tcm 2 β [N ,N’ 双 (2 巯乙基 )乙撑二胺基 ]甲基 ,3β (4 氯苯基 )托烷 (99Tcm TRODAT 1)多巴胺转运蛋白SPECT脑显像在帕金森病早期诊断中的临床应用价值。方法对 14例早期帕金森病患者(Hoehn YahrⅠ、Ⅱ级各 7例 )和 7例年龄匹配的健康对照者分别进行 99Tcm TRODAT 1SPECT脑显像 ,应用计算机感兴趣区技术半定量分别计算早期帕金森病患者和健康对照者的双侧纹状体 /小脑、尾核 /小脑和壳核 /小脑放射性计数比值 ,分别代表相应部位的多巴胺转运蛋白功能水平。结果早期帕金森病患者双侧纹状体和双侧壳核的多巴胺转运蛋白功能均低于健康对照者 ,并以患侧肢体或最先受累肢体对侧纹状体和对侧壳核多巴胺转运蛋白功能降低明显。结论 99Tcm TRODAT

miR-1-3p/206/613对LXRα和OATP1B1蛋白表达的影响及其机制研究

目的:探究miR-1-3p、miR-206和miR-613对肝X受体α(LXRα)和有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1)蛋白表达及OATP1B1转运能力的影响及其机制研究。方法:通过生物信息学数据库预测可靶向作用于LXRα和OATP1B1 mRNA 3'-UTR的miRNAs;采用RT-q PCR、Western blot方法检测miR-1-3p/206/613及LXRα和OATP1B1蛋白水平;采用LC-MS/MS方法检测Hep G2细胞中瑞舒伐他汀(RSV)的含量;应用双荧光素酶报告基因法,研究miR-1-3p/206/613影响LXRα和OATP1B1表达的分子机制。结果:预测结果表明miR-1-3p/206/613与LXRα和OATP1B1 mRNA 3'-UTR互补配对,且具有较高的特异性、保守性及结合稳定性。与对照组相比,miR-1-3p/206/613 mimics能明显下调Hep G2细胞中LXRα蛋白表达水平16.5%、16.0%、25.1%,OATP1B1蛋白30.4%、30.5%、44.4%;相反,miR-1-3p/206/613 inhibitors明显上调LXRα蛋白表达水平13.3%、13.3%、16.0%,OATP1B1蛋白25.0%、25.6%、30.4%。当RSV浓度为5、60、125μmol/L时,miR-1-3p/206/613mimics显著减少Hep G2细胞对RSV的摄取至对照组的0.50、0.19、0.30倍,0.49、0.24、0.23倍和0.64、0.48、0.31倍;与之相反,miR-1-3p/206/613inhibitors上调1.26、1.59、2.07倍,1.97、2.44、2.63倍,2.22、2.86、2.93倍。与对照组相比,miR-1-3p/206/613 mimics或miR-1-3p/206/613 inhibitors,p GL/LXRα-WT报告基因荧光素酶活性分别下降38.5%、32.5%、32.8%或升高137.0%、75.8%、55.7%,而p GL/LXRα-Mut报告基因荧光素酶活性未见明显改变;同上,p GL/OATP1B1-WT报告基因荧光素酶活性下降24.3%、28.9%、32.1%或升高33.5%、48.3%、61.6%,而p GL/OATP1B1-Mut报告基因荧光素酶活性也未见明显改变。结论:miR-1-3p/206/613既可通过直接靶向作用于OATP1B1 mRNA 3'-UTR而调控OATP1B1的蛋白表达和转运功能,也可通过靶向作用于LXRαmRNA 3'-UTR而发挥间接调控作用。

核因子-κB对TNF-α诱导的脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响

【目的】观察TNF-α对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRNA与蛋白表达的作用,并探讨核因子-κB(NF-κB)对上述作用的影响。【方法】成熟的3T3-L1脂肪细胞分成3组:A组正常对照组,B组肿瘤坏死因子α(TNF-α)组,C组吡咯烷二硫基甲酸酯(NF-κB活性抑制剂)+TNF-α组。各组干预48h后检测phospho-NF-κBp65(Ser536)的蛋白水平、GLUT4mRNA及蛋白水平。蛋白检测采用Western法,mRNA检测采用RT-PCR法。【结果】B组phospho-NF-κBp65蛋白水平(71.1±5.9)高于A组(41.3±1.7,P<0.001)和C组(25.4±4.7,P<0.001)。B组GLUT4的mRNA水平(0.86±0.14,P<0.001)与蛋白水平(31.6±7.2,P<0.001)低于A组(2.01±0.65;60.7±8.4),C组mRNA水平(0.46±0.12)与B组比较有下降趋势但无统计学意义(P=0.100),C组蛋白水平(9.5±3.0)低于B组(P=0.001)。【结论】TNF-α下调3T3-L1脂肪细胞的GLUT4表达,抑制NF-κB活性后GLUT4表达进一步下调。这提示了TNF-α可能不是通过激活NF-κB而使GLUT4的表达下调。

3-硝基丙酸预处理对脑缺血耐受模型GLUT1和GLUT3表达的影响

目的:探讨3-硝基丙酸(3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带区不同再灌注时点GLUT1和GLUT3mRNA及蛋白水平表达的影响。方法:雄性SD大鼠40只,随机分为假手术组(sham组,n=4)、预处理对照组(3-NPA组,n=4)、大脑中动脉缺血组(M组,n=16)、3-NPA预处理组(IPC组,n=16)。M组和IPC组按再灌注时间(4h、12h、24h及48h)不同又分为4个亚组,每组动物4只。将大鼠在相应时点断头取脑,取缺血侧(左侧)冠状面中间1/3皮质,分别采用RT-PCR和Western blotting方法检测GLUT1、GLUT3 mRNA和蛋白水平表达情况。结果:IPC组GLUT1 mRNA表达在缺血再灌注后4h开始升高,48h最大,显著高于sham组和M组相应时点。IPC组GLUT3 mRNA表达在24h增高,48h最高,与M组相应时点24h、48h及sham组比较显著增高。IPC组比M组的GLUT1蛋白、GLUT3蛋白表达增高,有显著差异(F=5.848,P<0.05;F=6.295,P<0.05),尤以缺血再灌注后48h两者差异最明显。结论:3-NPA预处理能诱导脑缺血耐受,其机制可能是上调GLUT1和GLUT3 mRNA及蛋白表达水平,维持脑组织的能量供给。

低氧状态下芹黄素通过抑制HIF-1α下调卵巢癌SKOV3细胞GluT-1表达的实验研究

目的研究在低氧状态下芹黄素能否通过抑制HIF-1α下调卵巢癌SKOV3细胞GluT-1表达。方法将卵巢癌SKOV3细胞分为常氧组、低氧组和低氧+芹黄素组。在低氧状态下对卵巢癌SKOV3细胞使用终浓度为50μM的芹黄素进行干预,在不同时间点(0h、24h和72h)使用MTT法对SKOV3细胞活性进行检测;同时在干预24h后,分别使用qPCR法和western blot法对卵巢癌SKOV3细胞GluT-1和HIF-1αmRNA和蛋白表达水平进行检测。结果低氧环境下SKOV3细胞活性呈时间依赖性下降,差异均有显著统计学意义(P均<0.05);且在各时间点低氧+芹黄素组活性较低氧组下降更加明显,差异均有显著统计学意义(P均<0.05)。同时,在干预24h后卵巢癌SKOV3细胞GluT-1和HIF-1αmRNA和蛋白的表达水平较非干预组细胞明显降低,差异均有显著统计学意义(P均<0.05)。结论在低氧状态下,芹黄素可以通过抑制HIF-1α的合成下调卵巢癌SKOV3细胞GluT-1的表达,从而抑制肿瘤细胞的增殖。该基础研究为芹黄素应用于卵巢癌等恶性肿瘤的治疗奠定了一定的理论基础。

胶质瘤中GLUT-1与GLUT-3表达的实验研究

目的探讨葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)和葡萄糖转运蛋白-3(GLUT-3)在人脑胶质瘤中的表达及与病理分级的关系。方法用W estern b lot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测80例胶质瘤中GLUT-1和GLUT-3的表达情况。结果 GLUT-1蛋白在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中的表达分别为0.09±0.02、0.20±0.02、0.41±0.09和0.63±0.07;GLUT-3蛋白在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中的表达分别为0.10±0.02、0.23±0.07、0.62±0.05和0.88±0.06。各组间有显著差异(P<0.01)。GLUT-1mRNA在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中的表达分别为0.08±0.03、0.19±0.02、0.41±0.06和0.66±0.08;GLUT-3 mRNA在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤中的表达分别为0.17±0.01、0.36±0.09、0.64±0.09和0.89±0.11。各组间有显著差异(P<0.01)。结论胶质瘤中GLUT-1和GLUT-3表达随病理级别增高而增加,提示GLUT-1和GLUT-3在胶质瘤的发生过程中起重要作用。

补中益气汤含药血清对caco-2细胞SGLT1、P38MAPK通路及NHE3表达影响的研究

目的探讨补中益气汤含药血清对人结肠腺癌细胞(caco-2细胞)钠葡萄糖共转运体蛋白1(SGLT1)、P38MAPK通路及钠-氢交换体3(NHE3)蛋白及基因表达的影响。方法根据血清药理学方法制备补中益气汤含药血清,将caco-2细胞分为正常组、根皮苷组、根皮苷+补中益气汤含药血清组和根皮苷+空白大鼠血清组。检测各组SGLT1蛋白和基因、P38MAPK/Ezrin通路蛋白和NHE3蛋白的表达。结果与根皮苷组比较,根皮苷+补中益气汤含药血清组caco-2细胞SGLT1蛋白表达有所上调(P <0.05),且呈浓度依赖关系;根皮苷+15%补中益气汤含药血清组caco-2细胞SGLT1mRNA,NHE3蛋白及P38MAPK/Ezrin通路磷酸化蛋白表达均有所增加,与根皮苷组比较差异有显著性(P <0.05);根皮苷+补中益气汤含药血清组的SGLT1mRNA及NHE3、P-P38MAPK、P-Ezrin蛋白表达均高于根皮苷+15%空白血清组,差异有统计学意义(P <0.05)。结论补中益气汤含药血清可上调caco-2细胞SGLT1的基因和蛋白表达、增加NHE3蛋白表达,这可能与其促进P38MAPK和Ezrin磷酸化有关。

Glut-1、Glut-3在NSCLC和肺良性病变中的表达及其与FDG摄取的关系

背景与目的葡萄糖转运蛋白是介导细胞葡萄糖摄取的主要载体。Glut-1、Glut-3的表达与组织的18F-2-脱氧葡萄糖(FDG)摄取有密切关系。本研究探讨NSCLC和肺良性病变中葡萄糖转运蛋白-1、3(Glut-1、Glut-3)的表达及其与FDG摄取之间的关系。方法84例非小细胞肺癌(NSCLC)患者及24例肺良性病变患者术前行PET/CT检查,检测Glut-1、Glut-3的表达,并作相关分析。结果84例NSCLC患者PET/CT检查平均SUV(SUVave)值为3.6-13.2,平均7.8±3.0。24例肺良性病变患者PET/CT检查SUVave值为1.2-9.2,平均3.2±1.9。84例NSCLC患者Glut-1、Glut-3染色总分平均值分别为4.4±1.3和2.6±1.9。24例肺良性病变患者Glut-1、Glut-3染色总分平均值分别为0.9±0.9和1.2±1.4。NSCLC Glut-1、Glut-3的表达均较肺良性病变高(P<0.01)。NSCLC中Glut-1的表达与FDG摄取呈正相关(r=0.78,P<0.01)。肺良性病变中Glut-3的表达与FDG摄取呈正相关(r=0.45,P=0.03)。结论NSCLC和肺良性病变中均有Glut-1、Glut-3的过度表达。Glut-1表达可能与NSCLC中FDG摄取有关;Glut-3表达可能与肺良性病变FDG摄取有关。