作用于有机阳离子转运蛋白2以改善顺铂肾毒性的药物的研究进展

顺铂是一种广泛用于治疗乳腺癌、宫颈癌、食管癌、膀胱癌、小细胞肺癌和睾丸癌等多种实体瘤的化疗药物,但由于其严重的不良反应如肾毒性、耳毒性、骨髓抑制和周围神经病变等限制了其临床应用,其中肾毒性是其临床应用的剂量限制毒性。近年来有报道指出,肾组织基底外侧有机阳离子转运蛋白2是肾小管摄取顺铂的主要转运体,一些药物如西咪替丁、二甲双胍、小檗碱、质子泵抑制剂等均可能通过作用于该蛋白来抑制肾小管细胞对顺铂的摄取,从而减轻顺铂诱导的肾损伤。本文旨在对目前国内外报道的作用于有机阳离子转运蛋白2以改善顺铂肾毒性的药物的研究进展进行综述。

有机阳离子转运蛋白的药代动力学和药效学

有机阳离子转运蛋白在药物的胃肠道吸收,肝肾消除以及组织的分布中发挥了重要的作用。为了阐明药物转运蛋白在药代动力学、药效、药物毒性以及基因多态性的个体差异,本文从有机阳离子转运蛋白的分子功能、表达调控、基因多态性以及其对机阳离子药物的药代动力学和药效进行了回顾。

二甲双胍疗效与有机阳离子转运蛋白基因多态性关系的研究进展

二甲双胍作为治疗2型糖尿病的一线用药,广泛受到各临床治疗指南的推荐。但是,二甲双胍的临床治疗效果及不良反应存在着显著的个体差异。有机阳离子转运蛋白与二甲双胍在体内的转运和代谢密切相关,研究表明,有机阳离子转运蛋白的基因多态性是影响二甲双胍疗效的重要因素。本文通过总结分析相关文献,综述二甲双胍疗效与有机阳离子转运蛋白基因多态性关系的研究进展,为二甲双胍在临床中的个体化使用提供参考。

人类肾脏中有机阳离子转运体2及其遗传多态性研究进展

人类有机阳离子转运体2(OCT2,SLC22A2)是一种有机阳离子的多特异性转运体,其功能涉及临床上许多常用药物和重要的内源性物质在体内的代谢过程。OCT2主要分布在肾小管上皮细胞的外侧基底膜,是肾脏主动分泌有机阳离子的一个主要转运体。体内对于OCT2表达的调控在转录水平主要是受类固醇激素的调控,在蛋白水平则主要与多种蛋白激酶有关。研究发现了人类OCT2的多态性及其相应的功能特点,一部分突变对于OCT2功能的改变已经明确。

人源有机阴离子转运多肽1B1和多药耐药相关蛋白2双转MDCKⅡ细胞株的构建及其功能验证

目的构建人源有机阴离子转运多肽1B1(human organic anion transporting polypeptide 1B1,hOATP1B1)和多药耐药相关蛋白2(multidrug resistance-associated protein2,hMRP2)双转MDCKⅡ细胞株,验证其功能,并应用其考察创新药物2,3-双加氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)抑制剂1-甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)的转运特性。方法采用基因工程手段获得hOATP1B1和hMRP2表达真核载体pVITRO2-SLCO1B1-ABCC2,转染MDCKⅡ细胞,通过遗传霉素G418筛选得到稳定表达的细胞株;通过Realtime PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜确认目的蛋白特异性;利用该双转模型考察普伐他汀(不同pH环境和不同底物浓度)和1-MT的转运。结果经电泳分析、双酶切、DNA测序鉴定表明重组质粒构建成功;通过Real-time PCR、Western blot、免疫荧光共聚焦显微镜证明经遗传霉素筛选的MDCK-OATP1B1/MRP2细胞构建成功;pH=6.5时,普伐他汀在所构建双转细胞模型上转运最佳;在0~500μmol/L的浓度范围内,普伐他汀在该模型上的转运呈现浓度依赖性。1-MT在该细胞模型上无明显转运。结论成功构建人源MDCKOATP1B1/MRP2双转细胞株,发现1-MT既不是OATP1B1蛋白也不是MRP2蛋白的底物,该细胞株可用于OATP1B1/MRP2介导的外源性物质(如药物)和内源性物质(如胆红素)的转运研究。

有机阳离子转运体2、微小RNA-21的表达水平与前列腺癌患者临床病理特征及预后的相关性

目的探讨有机阳离子转运体2(OCT2)、微小RNA-21(miR-21)的表达水平与前列腺癌患者临床病理特征及预后的相关性。方法选取105例前列腺癌患者作为观察组,89例良性前列腺增生患者作为对照组。通过免疫组化法检测两组患者病灶组织中OCT2及miR-21的表达情况,并分析OCT2及miR-21的表达情况与前列腺癌患者临床病理特征及预后的关系。结果免疫组化结果显示,OCT2主要分布于细胞质中,miR-21主要分布于细胞膜中,阳性细胞呈棕黄色;观察组患者的OCT2高表达率低于对照组,而miR-21高表达率高于对照组(均P<0.05)。临床分期为T 1~T 2期、无淋巴结转移、无远处转移、前列腺特异性抗原(PSA)水平在5~15 ng/mL之间、Gleason评分<7分、低中危前列腺癌患者的OCT2高表达率更高,miR-21高表达率更低(均P<0.05);而不同年龄、吸烟情况的前列腺癌患者病灶组织中的OCT2及miR-21高表达率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析结果显示,OCT2高表达患者的总生存率(93.3%)高于低表达率患者(75.4%),而miR-21高表达患者的总生存率(73.2%)低于低表达患者(95.0%)(均P<0.05)。多因素Cox回归分析结果显示,前列腺癌组织中的OCT2和miR-21表达情况、临床分期、淋巴结转移情况、远处转移情况、PSA水平、Gleason评分、危险分级均为前列腺癌患者预后的独立影响因素(均P<0.05)。结论在前列腺癌组织中OCT2呈低表达,而miR-21呈高表达,其与前列腺癌患者的临床分期、淋巴结转移情况、远处转移情况、PSA水平、Gleason评分和危险分级相关,且均为前列腺患者预后的独立影响因子。

泄化浊瘀方总皂苷对痛风及高尿酸血症HK-2细胞有机阴离子转运蛋白基因表达的影响

泄化浊瘀方临床主要用于痛风及高尿酸血症（痰瘀痹阻证）的治疗，临床疗效确切。前期实验及临床研究表明，其具有抑制黄嘌呤氧化酶的活性，抑制尿酸生成，

药物转运蛋白在药物吸收、分布和排泄中的作用及对新药研发的意义

介绍了药物转运蛋白 (drugtransporter)在药物处置过程中的作用 ,探讨了其在新药开发中应用的可能性。通过对药物转运蛋白功能的了解和利用 ,可以增加口服药物的生物利用度 ,开发出对某些器官有靶向性的药物 ,或避免药物分布到某些器官中 ,从而提高药物的疗效 ,降低其的毒副作用 ;也可以控制药物的消除速度。在药物研发过程中可以通过两种手段达到上述目的 ,一是根据需要选择与某些转运蛋白有作用或没有作用的先导化合物 ,另一个则是使用转运蛋白抑制剂。在药物研发的初始阶段 ,就开始重视其药动学特性 ,这一观念近年来已被很多人所接受。对转运蛋白的深入认识和利用 ,建立研究药物转运特性的有效方法 。

大鼠脑微血管内皮细胞培养及其药物转运体Oatp2和P-gp的表达

贴块法培养脑微血管内皮细胞(BMECs),倒置显微镜动态观察细胞生长及形态,Ⅷ因子相关抗原、CD34免疫细胞化学联合鉴定细胞并确定纯度。免疫细胞化学和Western印迹法检测药物转运体有机阴离子转运多肽亚型2(Oatp2)及P-糖蛋白(P-gp)在培养内皮细胞上的表达。结果显示,获得的BMECs呈多角形或铺路石形,单层贴壁生长;培养细胞Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学、CD34免疫荧光染色均为阳性,细胞纯度90%;培养细胞有Oatp2及P-gp表达,且二者均主要表达于BMECs细胞膜。提示贴块法可获得原代培养BMECs,方法简便易行,细胞纯度较高。原代培养的BMECs上有药物转运体Oatp2及P-gp的表达,为血脑屏障上药物转运体的体外研究提供了可能途径。

尿酸转运蛋白与血清尿酸平衡

尿酸在肝生成到肾和肠道的排泄、重吸收这一过程有多种尿酸转运蛋白参与。现有研究表明葡萄糖转运体9在肝、肾和肠道的尿酸跨膜转运中起着重要作用,参与尿酸的重吸收;三磷酸腺苷结合盒转运蛋白G2主要表达在肾近端小管上皮细胞顶膜,参与尿酸的分泌作用;多药耐药蛋白4表达于肾小管上皮细胞顶端膜,可将尿酸从肾小管上皮细胞转运到肾小管腔内;尿酸盐阴离子转运体1、有机阴离子转运体1和3均属于有机阴离子转运蛋白,是SLC22A家族跨膜转运蛋白的成员,参与肾的尿酸转运,尤其是尿酸的分泌和排泄。本文综述了这些尿酸转运蛋白参与调控血清尿酸平衡相关的研究进展。

丹皮酚对HepG2细胞药物转运体BCRP及SLCO1B1表达及功能的影响

目的：分析丹皮酚对肝细胞株HepG2细胞药物转运体乳腺癌耐药蛋白（ breast cancer－resistance protein，BCRP）及有机阴离子转运多肽1B1（organic anion－transporting polypeptide 1Bl，SLCO1B1）表达及部分转运功能的影响。方法采用CCK8法检测丹皮酚对HepG2细胞存活率的影响，以确定适当的用药浓度；qPCR法测定丹皮酚对HepG2细胞BCRP及SLCO1B1 mRNA表达水平的影响；流式细胞术测定丹皮酚对BCRP及SLCO1B1转运特异性底物脱镁叶绿酸盐和二氯荧光素功能的影响。结果丹皮酚在2～8μg／mL浓度范围内对HepG2细胞存活率影响较小，丹皮酚浓度高于16μg／mL时，HepG2细胞存活率明显降低（P＜0．05）。与对照组相比，丹皮酚组BCRP及SLCO1B1药物转运体的mRNA水平均明显上调，对特异性底物的转运效率明显增加（P＜0．05）。结论丹皮酚能够诱导肝细胞药物转运体BCRP及SLCO1B1基因表达，从而促进其底物的跨膜转运。提示当丹皮酚与BCRP及SLCO1B1转运体所转运的药物联合应用时，可能存在药物相互作用风险。

基于OCT2、MRP2探讨加味生脉饮对Lewis肺癌小鼠顺铂化疗的增效减毒机制

【目的】观察加味生脉饮对顺铂化疗Lewis肺癌小鼠有机阳离子转运体2(OCT2)、多药耐药相关蛋白2(MRP2)的影响,探讨其对Lewis肺癌小鼠顺铂化疗的增效减毒机制。【方法】采用腋窝皮下接种Lewis肺癌细胞(LLC)构建肺癌移植瘤小鼠模型,造模成功后随机分为对照组、顺铂组、联合组(顺铂联合加味生脉饮)和生脉饮组,每组7只小鼠,给药14 d。观察4组小鼠一般状态、肿瘤生长情况,肿瘤、肾脏组织病理学以及血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)浓度。通过免疫组织化学染色(IHC)和Western Blot的方法检测OCT2、MRP2蛋白表达情况,并使用高效液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定肾脏和肿瘤组织中顺铂含量。【结果】(1)给药结束后,各组小鼠体质量均有下降,顺铂组下降幅度最大,顺铂组体质量变化显著高于联合组、生脉饮组(P<0.05),生脉饮组和联合组小鼠一般状态均优于对照组和顺铂组。(2)干预结束时,顺铂组肿瘤体积和质量小于生脉饮组和对照组,联合组肿瘤体积和质量显著小于顺铂组(P<0.05)。(3)组织病理学结果显示:生脉饮组、对照组肿瘤细胞结构清晰,细胞形态正常;顺铂组与联合组可见肿瘤细胞坏死,肿瘤细胞边缘模糊,联合组肿瘤细胞坏死面积更大。生脉饮组、对照组肾脏细胞形态正常;联合组肾脏细胞损伤较轻,无明显病变;顺铂组肾组织明显病变,肾小管上皮细胞边缘模糊。(4)顺铂组小鼠血清BUN、Cr水平显著高于其他3组(P<0.05)。(5)顺铂组肾脏组织OCT2表达相比对照组显著增加,联合组OCT2表达相比顺铂组显著降低(均P<0.05);顺铂组肿瘤组织MRP2表达相比对照组显著增加,联合组MRP2表达相比顺铂组显著降低(均P<0.05)。(6)联合组肿瘤组织中顺铂含量显著高于顺铂组,联合组肾脏组织中顺铂含量显著低于顺铂组(均P<0.05)。【结论】OCT2、MRP2在顺铂肾脏毒性与耐药性中起重要的调控作用,加味生脉饮可能通过抑制肾脏中OCT2与肿瘤细胞中MRP2的蛋白表达,降低了顺铂治疗的肾脏毒性,提高了顺铂的抗肿瘤效果。

Ussing chamber技术评价P-糖蛋白及有机阳离子转运体对左氧氟沙星跨胃黏膜转运的影响

目的评价P-糖蛋白及有机阳离子转运体对左氧氟沙星跨胃黏膜转运的影响。方法用大鼠胃黏膜与Ussing chamber技术建立胃黏膜体外模型,分为空白组及加入P-糖蛋白抑制剂(环孢素A)或有机阳离子转运体抑制剂(西咪替丁)的抑制剂组并进行双向转运实验,用高效液相色谱法对左氧氟沙星进行定量分析,计算其表观渗透系数(Papp)。结果加入环孢素A后,50μg·m L-1左氧氟沙星Papp(S-M)/Papp(M-S)由2.20变为1.06(P<0.05);加入西咪替丁后,50μg·m L-1左氧氟沙星Papp(S-M)/Papp(M-S)与空白组比较,差异无统计学意义。结论 P-糖蛋白参与左氧氟沙星跨胃黏膜转运过程,而有机阳离子转运体不参与左氧氟沙星跨胃黏膜转运过程。

阳离子转运蛋白2基因A270S位点多态性与万古霉素致急性肾损伤的相关性研究

目的探讨阳离子转运蛋白2(OCT2)基因位点A270S(rs316019)不同基因型与成年人使用万古霉素造成急性肾损伤(AKI)的关系。方法选择114例使用万古霉素的中国汉族患者,根据疗程中是否出现AKI,将其分为AKI组(35例)和无AKI组(79例)。抽取患者外周静脉血,选用限制性片段长度多态性方法检测OCT2A270S基因多态性,用Logistic回归分析考察AKI的风险因素。结果 A270S基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。AKI组A270S GG、GT和TT基因型患者分别为26例(74.29%),8例(22.89%)和1例(2.82%),无AKI组A270S GG、GT和TT基因型患者分别为72例(91.94%),6例(7.59%)和1例(0.47%),差异均有统计学意义(均P<0.05)。Logistic回归结果显示,年龄、体重指数和A270S基因多态性均为万古霉素导致AKI的风险因素(均P<0.05)。结论患者年龄、体重指数和A270S基因多态性可能与万古霉素导致的AKI有关。

新型有机阳离子转运体-2调控研究进展

新型有机阳离子转运体-2(OCTN2)是有机阳离子转运体家族成员,可转运肉毒碱及多种有机阳离子类药物,具有重要的生理学和药理学研究价值。大量研究表明,多种因素可通过不同的机制对转运体表达及功能产生一定的作用,从而可能对机体内环境的稳定和药物的处置产生影响。本文综述了OCTN2调控研究的最新进展。

有机阳离子转运体2(808G>T)基因多态性对健康受试者体内盐酸二甲双胍药动学影响的Meta分析

目的:系统评价有机阳离子转运体2[(OCT2)808G>T]基因多态性对健康受试者体内盐酸二甲双胍药动学的影响,以为临床用药提供循证参考。方法:计算机检索Pub Med、EMBase、西文生物医学期刊文献数据库、中国期刊全文数据库、中文科技期刊数据库、万方数据库,收集(OCT2)808G>T基因多态性对健康受试者体内盐酸二甲双胍药动学影响的相关研究,采用Rev Man 5.1统计软件进行Meta分析。结果:共纳入5项回顾性研究,合计172例受试者,基因检测结果为GT型、TT型、GG型。Meta分析结果表明,与GT型基因相比较,TT型会延长盐酸二甲双胍的半衰期;与TT型基因相比较,GG型会增大盐酸二甲双胍的峰浓度。而(OCT2)808G>T基因多态性不会对肾脏清除率、肌酐清除率和药-时曲线下面积造成影响。结论:(OCT2)808G>T基因多态性对健康受试者体内盐酸二甲双胍半衰期和峰浓度有一定影响,对肾脏清除率、肌酐清除率和药-时曲线下面积没有影响。受纳入研究方法学的限制,该结论尚需大样本、高质量的研究进一步验证。

有机阳离子转运体1/2在人角、结膜上皮细胞的表达及极性分布

目的观察有机阳离子转运体1/2(OCTN1/2)在人角、结膜上皮细胞的表达及极性分布。方法分别采用RT-PCR和Western blot法检测OCTN1/2的mRNA在人角膜边缘上皮(HCLE)细胞和人结膜上皮(HCj E)细胞的表达及其蛋白的极性分布。结果在HCLE细胞和HCj E细胞中均检测到了OCTN1和OCTN2的mRNA扩增产物。测序结果证实,PCR扩增产物与目的基因具有同一性。在HCLE细胞中,OCTN1的mRNA相对表达水平明显高于OCTN2,但在HCj E细胞中,OCTN1的mRNA相对表达水平则明显低于OCTN2,差异均具有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,OCTN1和OCTN2 2种转运蛋白均在细胞顶端出现明显强于基底端的条带。结论人角膜和结膜上皮细胞均存在OCTN1和OCTN2 2种转运蛋白的表达,且OCTN1和OCTN2主要位于HCLE细胞和HCj E细胞的顶端。

OCTN2与前列腺癌细胞对奥沙利铂化疗敏感性的相关性

目的研究新型有机阳离子转运体2(OCTN2)与前列腺癌细胞对奥沙利铂化疗敏感性的相关性。方法收集行前列腺癌根治术患者的前列腺癌组织标本,采用免疫组化法检查组织中的OCTN2蛋白表达;培养标本原代细胞得到前列腺癌细胞株。采用电感耦合等离子体质谱法检测癌细胞对低浓度(0.1μmol/L)奥沙利铂的摄取量,采用Real time PCR及Western blot法检测癌细胞中OCTN2 mRNA及蛋白的表达水平;选择OCTN2蛋白表达最高及最低的前列腺癌细胞株,采用三磷酸腺苷肿瘤药物敏感性检测法(ATP-TCA)计算奥沙利铂对癌细胞的半数抑制浓度(IC50);采用MTT法检测血药峰浓度奥沙利铂(50μmol/L)对前列腺癌细胞的抑制率。采用Spearman法分析前列腺癌细胞对奥沙利铂摄取量与奥沙利铂对前列腺癌细胞抑制率及OCTN2 mRNA表达的相关性。结果OCTN2定位于癌细胞膜;癌细胞对奥沙利铂的摄取量为0.283±0.264(n=12);不同癌细胞中OCTN2 mRNA和蛋白表达差异明显;OCTN2高表达的癌细胞对奥沙利铂的敏感性(IC50为4.61μmol/L)高于OCTN2低表达的癌细胞(IC50为26.23μmol/L)。奥沙利铂对癌细胞的抑制率为(25.4±10.8)%(n=12)。前列腺癌细胞对奥沙利铂的摄取量与奥沙利铂对前列腺癌细胞的增殖抑制率及前列腺癌细胞中OCTN2 mRNA表达水平三者间存在相关性(P<0.05)。结论OCTN2高表达可能促进前列腺癌细胞对奥沙利铂的摄取,其表达水平可作为预测前列腺癌细胞对奥沙利铂化疗敏感性的参考依据之一。

籼稻低亲和阳离子转运蛋白基因OsLCT2的克隆与生物信息学分析

OsLCT1是目前在水稻中唯一鉴定出来的参与韧皮部镉离子运输的关键转运蛋白,与水稻籽粒镉积累密切相关。本研究根据Gene Bank已发表的小麦Ta LCT1基因序列信息设计引物,利用RT-PCR方法从籼稻93-11和华占中克隆了低亲和阳离子转运蛋白基因(LCT),并命名为OsLCT2。生物信息学分析结果表明,该基因定位在5号染色体上,全长2 699 bp,包含3个外显子和2个内含子,其CDS全长1 437 bp,编码478个氨基酸,包含2个PEST序列和11个跨膜结构域。OsLCT2蛋白二级结构预测显示,α-螺旋占57.11%、β-折叠占7.74%,无规则卷曲占35.15%。序列比对和系统进化树分析结果表明,OsLCT2与小麦的亲缘关系最近达65%,其次为高粱64%,而与水稻OsLCT1的同源性并不高,推测OsLCT2的功能可能与Ta LCT1相类似。

肾脏有机阳离子转运体2在急性肾损伤中病理生理调控的研究进展

有机阳离子转运体2(organic cation transporter 2,OCT2)是溶质转运体(solute carriers,SLC)超家族中SLC22A家族的重要成员之一。肾小管上皮细胞基底膜侧表达的OCT2在维持机体内环境平衡方面起着重要作用,是肾脏主动分泌众多内、外源性有机阳离子型化合物(包括环境毒素、药物以及内源性代谢产物等)的主要转运体。在急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)期间,OCT2功能与表达的改变对其底物的清除具有巨大的影响,可导致药物的药代动力学过程发生改变,从而影响药物的安全性和有效性。现就OCT2的结构与分布、生理作用与调控机制以及在各种因素诱导的AKI中的功能与表达变化和病理生理调控等方面进行综述,旨在为临床合理用药提供参考。