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有限酶切拟康氏木霉纤维素酶分子研究其结构域的结构与功能 被引量:12
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作者 阎伯旭 孙迎庆 高培基 《纤维素科学与技术》 CAS CSCD 1998年第3期1-9,共9页
从拟康氏木霉Trichoderma pseudokoningiiS-38菌株发酵液中分离纯化了一个外切葡聚糖纤维二糖水解酶(CBHI,CE3.2.1.91)和一个内切葡聚糖酶(EGI,EC3.2.1.4)。经木瓜蛋白... 从拟康氏木霉Trichoderma pseudokoningiiS-38菌株发酵液中分离纯化了一个外切葡聚糖纤维二糖水解酶(CBHI,CE3.2.1.91)和一个内切葡聚糖酶(EGI,EC3.2.1.4)。经木瓜蛋白酶有限酶切,分别都得到了一个对可溶性底物具有与天然酶相近活力的催化结构域位于天然酶分子的C端,圆二色谱测定表明其催人域具有与天然酶相似的结构特征。由有限酶切内。 展开更多
关键词 纤维素 葡聚糖 有限酶切 结构域 水解
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用有限酶切法分析蛋白质的氨基酸序列
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作者 王台 门仓宏 +1 位作者 依田幸司 山崎真狩 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第1期68-71,共4页
报道了一个通过有限酶切蛋白质产生多肽片段的方法 .蛋白质经单向SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分离和用考马斯亮蓝短暂染色后 ,切下所需的蛋白质带 ,将其放入另一个SDS PAGE凝胶的样品槽内 ,在电泳过程中该蛋白质被蛋白酶如蛋白... 报道了一个通过有限酶切蛋白质产生多肽片段的方法 .蛋白质经单向SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)分离和用考马斯亮蓝短暂染色后 ,切下所需的蛋白质带 ,将其放入另一个SDS PAGE凝胶的样品槽内 ,在电泳过程中该蛋白质被蛋白酶如蛋白酶V8降解 ,所产生的多肽片段随之被分离 .电泳结束后 ,将多肽片段电印迹至聚偏二氟乙烯 ( polyvinylidenedifluoride,PVDF)膜上 .这些多肽片段从PVDF膜上切下后可以直接被用于分析氨基酸序列 . 展开更多
关键词 蛋白 有限酶切 氨基酸序列
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白术内酯Ⅲ介导的肌动蛋白相关蛋白2/3抑制肠上皮间质转化以缓解溃疡性结肠炎的研究
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作者 肖贵梅 蔡向志 +2 位作者 龙海洮 田丽霞 任燕 《世界中医药》 CAS 北大核心 2024年第15期2237-2245,共9页
目的:探寻白术内酯Ⅲ(AT-Ⅲ)的关键靶点,探究肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)抑制溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:采用有限酶切-质谱法(lip-SMap)筛选大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)特征蛋白,进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(... 目的:探寻白术内酯Ⅲ(AT-Ⅲ)的关键靶点,探究肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)抑制溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:采用有限酶切-质谱法(lip-SMap)筛选大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)特征蛋白,进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,确定AT-Ⅲ的关键靶点。脂多糖(LPS)与IEC-6共孵育模拟UC模型,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;划痕实验测定IEC-6迁移速率;蛋白质印迹法测定上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Arp2/3含量;分子对接评估AT-Ⅲ与关键靶点的结合能力。结果:基于lip-SMap获得的特征蛋白参与调控磷脂酰肌醇3激酶-丝苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号通路和紧密连接(TJ)信号通路;与对照组比较,LPS组中IL-6和TNF-α释放量升高(均P<0.05),迁移速率变快(P<0.05),E-cadherin和Vimentin的表达都有不同程度的影响(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+CK666+AT-Ⅲ组显著降低IL-6和TNF-α含量(均P<0.01),有效逆转LPS诱导的细胞迁移变化及E-cadherin和Vimentin表达(均P<0.05);分子对接显示,Arp2/3与AT-Ⅲ有较好的结合活性。结论:Arp2/3作为AT-Ⅲ的关键靶点,可通过上皮细胞-间充质转化(EMT)缓解LPS诱导的UC。 展开更多
关键词 白术内酯Ⅲ 大鼠小肠隐窝上皮细胞 溃疡性结肠炎 肌动蛋白相关蛋白2/3 有限酶切-质谱法 上皮细胞-间充质转化 紧密连接通路 脂多糖
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