中国牛朊病毒基因的克隆和序列分析

从中国牛外周血中分离淋巴细胞,提取基因组DNA.用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出不致病的朊病毒蛋白(PrP^c)基因,并克隆到pGEM-TEasy Vector.序列分析表明所克隆的牛PrP^c的片段大小为795bp,包含了牛朊病毒基因的完整编码区序列.该基因无内含子,同国外报道的已知序列完全相同.

东北虎朊病毒基因的克隆与序列分析

根据已报道的哺乳动物朊病毒基因序列设计引物,采用PCR方法扩增了25只东北虎的朊病毒基因,克隆、测序及序列分析表明,所得到的东北虎朊病毒基因片段为402bp,编码134个氨基酸的前体蛋白,核苷酸序列同源性为99.67%。共发现了4个核苷酸多态性(T423C,A501G,C511A,A610G),其中C511A和A610G的碱基突变导致K171Q和A204T氨基酸的变异。与已报道的猫、貂、绵羊、鼠和犬等哺乳动物的氨基酸序列比较,结果与猫(AF003087,97.3%)和绵羊(97.3%)的氨基酸同源性最高。

德州驴朊病毒基因克隆与序列分析

根据已报道正常哺乳动物朊蛋白(PrP)基因序列设计引物,采用PCR法扩增了德州驴的PrP基因,将其克隆到T-Vector。序列测定及分析表明所克隆的德州驴PrP基因片段为767 bp,该基因内无内含子,包含了驴PRNP完整编码区序列,编码256个氨基酸的前体蛋白,推测其分子量约34 ku。通过对德州驴朊病毒核苷酸和氨基酸序列与其他7种动物的比较,我们发现有3个区域变异较大,分别与种属屏障和潜伏期有关。经推测驴的PrP基因型是ARQ型,对羊痒病中度敏感,但是至今没有马属动物感染羊痒病的报道。这为TSE种间传播的突破提供了基础数据。

朊病毒研究新进展

朊病毒的重大发现在生物学和医学上有极其重要的理论价值和实际价值。文章综述了朊病毒蛋白 (PrP)、朊病毒蛋白基因、朊病毒生物学特征等方面的最新研究进展 ,重点介绍了PrPSC形成的“种子”模式和“重折叠”模式以及引起朊病毒病的“唯蛋白”学说和“类病毒”学说 ,对朊病毒引起的疾病及其预防、朊病毒的命名争议做了简单介绍。

辽宁绒山羊朊蛋白基因克隆与原核表达

为了构建辽宁绒山羊朊蛋白(PrP)基因原核表达质粒,试验根据已报道的哺乳动物朊病毒基因序列及pEASY-E1载体多克隆位点设计引物,采用PCR方法扩增了辽宁绒山羊的朊病毒基因,将基因克隆到pEASY-E1载体中构建重组原核表达质粒,用重组质粒转化E.coli BL21(DE-3)感受态细胞,并用IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE电泳鉴定表达的重组蛋白。结果表明:所得到的辽宁绒山羊朊病毒基因完整开放阅读框(ORF)全长为771个核苷酸,编码256个氨基酸的前体蛋白,核苷酸序列同源性为99.6%;共发现了5个碱基突变,即G126A、C414T、A428G、A652C和T718C,其中G126A、C414T为同义突变,A428G、A652C和T718C为异义突变;在pEASY-E1载体中成功克隆了PrP基因,并在E.coli中成功表达了重组的蛋白。说明辽宁绒山羊PrP基因可以在E.coli中表达。

中国奶牛PrP基因型分析

根据已报道奶牛朊蛋白(PrP)基因序列设计引物,采用PCR法扩增了28头黑白花奶牛的PrP基因。序列测定及分析结果表明,所克隆的奶牛PrP基因片段为677bp,编码225个氨基酸的前体蛋白。对其136、154、171位点氨基酸多态性分析结果发现,对TSE中度易感的ARQ型占检测奶牛的82.9%,对TSE抗性的ARR型占7.1%,对TSE高度易感的VRQ型占10%。这说明中国奶牛的基因型对TSE中度易感,为防制TSE的发生提供基础数据。

2011-2015年陕西省克雅氏病监测病例特征分析

目的了解陕西省克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease,CJD)的发病情况、临床表现及流行病学特征,为科学防控CJD提供依据。方法采集了2011-2015年陕西省7家医院报告的49例可疑CJD病例的临床及流行病学信息,收集了患者的血液及脑脊液样本。对脑脊液样本,通过免疫印迹法检测14-3-3蛋白。对血液样本,提取核酸,通过聚合酶链反应,扩增朊蛋白基因;利用测序技术,测定其突变情况,同时对129位和219位氨基酸进行多态性分析。结果确定散发型CJD临床诊断病例16例,散发型CJD疑似诊断病例4例,遗传型CJD 1例。病例的地理分布和职业无明显聚集性;散发型CJD临床诊断病例发病年龄中位数为62岁,男女比例1.29∶1;快速进行性痴呆为最常见的首发症状,占全部诊断病例的47.62%。结论陕西监测到的CJD病例主要为散发型CJD,收集到的病例的年龄、性别比例、职业情况及住址分布等均符合散发型CJD的分布特点。