内生菌Ilyonectria cyclaminicola固态发酵对淫羊藿药渣功效成分的影响

目的探究朝鲜淫羊藿内生菌Ilyonectria cyclaminicola对淫羊藿药渣的生物转化作用,为淫羊藿药渣的综合开发利用提供研究基础。方法培养朝鲜淫羊藿内生真菌Ilyonectria cyclaminicola,应用于固态发酵淫羊藿药渣,测定不同时期空白对照组和固态发酵组药渣中总黄酮及黄酮醇苷类成分含量,对比分析加入葡萄糖和营养素等对固体发酵物中有效成分转化积累的动态影响。结果淫羊藿药渣经Ilyonectria cyclaminicola固态发酵后,营养素药渣试验组发酵40 d时,总黄酮含量最高为16.923 mg/g,相比未发酵的药渣提高了15.32%;葡萄糖药渣试验组发酵40 d时,黄酮醇苷含量最高为7.639 mg/g,相比未发酵的药渣提高了167.19%。结论应用内生菌Ilyonectria cyclaminicola固态发酵淫羊藿药渣,可以提高其总黄酮及黄酮醇苷含量,如在发酵时加入葡萄糖和营养素可提供内生菌更充足的营养,生物转化的效果更佳。该研究成果为淫羊藿药渣的再利用,变废为宝和生态环境保护提供了科学依据。

朝鲜淫羊藿内生真菌对宿主生理特性及内在品质的影响

为研究朝鲜淫羊藿内生真菌对朝鲜淫羊藿生理特性及内在品质的影响,探索促进朝鲜淫羊藿生长发育和内在成分积累的菌株,采用盆栽土培试验,将从朝鲜淫羊藿植株中分离得到的3种内生真菌进行液体发酵后施加于其根部,考察分析内生真菌对宿主植物的生物量、叶绿素荧光参数、光合作用参数和POD、SOD、PAL、F3′H酶活性以及丙二醛、总黄酮醇苷含量等生长发育指标和内在品质的影响。结果表明,内生真菌能够显著增加朝鲜淫羊藿的生物量,加快其光合速率,提升植物酶活性,降低其丙二醛含量,提高朝鲜淫羊藿总黄酮醇苷及总黄酮含量。

淫羊藿内生真菌的分离及抑菌活性研究

从淫羊藿根、茎、叶分离出23株内生真菌,对分离出的真菌利用琼脂块法进行初选与滤纸片法进行复选,并以金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠埃希菌(Escherichia coli)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)4种微生物为指示菌对分离到的内生真菌进行抗菌活性检测。结果发现,分离得到的内生真菌中有10株菌株具较好的抑菌活性。对大肠埃希菌抑菌效果最好的为标号K7的菌株,抑菌圈直径为18.0 mm;对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌效果最好的均为标号B3的菌株,其抑菌圈直径分别为18.0、15.0 mm;而对灰霉病菌抑菌效果最好的为标号K6的菌株,其抑菌圈直径达到12.0 mm。

深绿木霉对宿主植物朝鲜淫羊藿生长及药效成分含量的影响

目的:探究内生菌深绿木霉对宿主植物朝鲜淫羊藿生长及药效成分含量的影响。方法:以朝鲜淫羊藿为试验材料,采用大田试验,设置对照组、商品菌组和S_(6)菌组,商品菌组和S_(6)菌组分别浇灌200 mL浓度1.0×10^(8)个/mL的菌悬液,对照组浇灌等量PDB培养基,15 d浇灌一次并测定植物生物量、光合作用参数、抗氧化酶活性、黄酮类化合物合成关键酶活性、总黄酮及总黄酮醇苷含量。结果:S_(6)菌组与对照组相比,在45、60 d时,鲜重分别显著高出20.36%、15.38%;15、30、60 d时,P_n分别显著高出49.20%、44.79%、345.33%;45、60 d时,G_s分别显著高出26.83%、33.47%;15 d时,C_i显著高出12.79%;15、30、60 d时,WUE分别显著高出49.27%、77.39%、514.03%;45、60 d时,SOD活性分别显著高出93.64%、155.03%;15~60 d期间,POD活性分别显著高出23.12%、110.79%、141.98%、174.84%;15、60 d时,PAL活性分别显著高出106.85%、35.21%;30、45 d时,F3H含量分别显著高出25.17%、66.67%;15 d时,FNS含量显著高出21.18%;15~60 d期间,总黄酮醇苷含量分别显著高出28.96%、28.37%、30.90%、66.56%。结论:深绿木霉能够促进朝鲜淫羊藿的生长及药效成分累积。

基于高通量测序技术的朝鲜淫羊藿内生真菌多样性分析

本研究采用llumina Mi Seq高通量测序技术结合高效液相色谱等方法,对朝鲜淫羊藿叶内生真菌群落多样性与药效成分进行分析,探寻二者相关性及其优势菌属。实验结果表明朝鲜淫羊藿叶中共存有686种真菌,归属于7门、32纲、97目、242科、451属,其中子囊菌门(Ascomycota)、担子菌门(Basidiomycota)占比分别为99.05%、99.22%;圆孢多臂菌属和短柄霉属为叶中核心菌属;在相对丰度高于1%的菌属中,横断孢属、念珠菌属、线黑粉酵母属、隐球菌属与黄酮类化学成分呈正相关,杯梗孢属、节枝孢属、外瓶柄霉属、炭疽菌属与黄酮类化学成分呈负相关。该研究为朝鲜淫羊藿质量提升提供科学依据。

朝鲜淫羊藿内生菌分离鉴定与次级代谢产物研究

目的:对朝鲜淫羊藿内生菌进行分离鉴定,建立朝鲜淫羊藿内生菌代谢产物中总黄酮含量测定方法及5种黄酮苷种类的方法。方法:根据朝鲜淫羊藿内生菌的菌落形态进行初步鉴定,进一步采用ITS测序进行分子生物学鉴定。采用紫外分光光度法测定朝鲜淫羊藿内生菌代谢产物中总黄酮的含量,LC-MS法测定内生菌代谢产物种类。结果:鉴定出6株内生真菌,分别为间座壳属Diaporthe cotoneastri、木霉属Trichoderma atroviride、炭疽菌属Colletotrichum capsici、炭疽菌属Colletotrichum jasminigenum、Ilyonectria属Ilyonectria cyclaminicola和Diaporthe(间座壳属,疑似新种);6株内生菌代谢产物均能产生黄酮类成分,含量范围0.09~0.22mg/mL;EkF08次级代谢产物中化合物种类为淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷Ⅰ。结论:本研究建立的朝鲜淫羊藿内生菌代谢产物分析方法稳定、重复性好、可靠性高,为解决朝鲜淫羊藿资源匮乏问题、新资源“生物药材”开发等提供了科学依据和基础。