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日本血吸虫P7抗原的克隆表达、虫期特异性分析以及早期诊断价值的研究 被引量:4
1
作者 徐斌 段新伟 +3 位作者 卢艳 陈绅波 冯正 胡薇 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期161-166,共6页
目的克隆表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum)P7抗原片段(GenBank登录号为EU121231),研究各虫期中该目的片段的转录和表达情况,初步评价其作为早期诊断抗原的潜力。方法将日本血吸虫童虫cDNA文库中免疫筛选出的阳性克隆P7进行体外扩... 目的克隆表达日本血吸虫(Schistosoma japonicum)P7抗原片段(GenBank登录号为EU121231),研究各虫期中该目的片段的转录和表达情况,初步评价其作为早期诊断抗原的潜力。方法将日本血吸虫童虫cDNA文库中免疫筛选出的阳性克隆P7进行体外扩增,将目的基因亚克隆至原核表达载体pET28a中。用双酶切的方法鉴定重组质粒,将阳性重组质粒转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)感受态细胞中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达并纯化。用蛋白质印迹(Western blotting)分析初步鉴定表达产物的免疫诊断价值。利用逆转录PCR和Westernblotting分析检测P7片段在日本血吸虫各个虫期中的转录和表达情况。以P7重组蛋白为抗原用间接ELISA检测感染日本血吸虫后14 d的兔血清(18份),日本血吸虫病(28份)、华支睾吸虫病(30份)和卫氏并殖吸虫病(20份)患者血清,以及健康人血清(30份),计算特异性和敏感性。结果成功构建了重组表达载体P7/pET28a,并在E.coli中表达。Western blotting分析结果显示P7重组蛋白能被感染日本血吸虫后14 d的小鼠血清和P7重组蛋白免疫的多抗兔血清识别,但不能被感染后42 d的小鼠血清识别,蛋白相对分子质量(Mr)约为20 100。采用逆转录PCR技术在尾蚴、童虫和成虫中均检测到了P7片段的mRNA。Western blotting分析结果显示,仅在童虫阶段检测到目的蛋白。间接ELISA检测感染早期兔血清的检出率为83.3%(15/18),检测日本血吸虫病患者血清的敏感性为75.0%(21/28),特异性为93.8%(75/80),与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清的交叉反应分别为6.7%(2/30)和5.0%(1/20)。结论日本血吸虫P7抗原可能为潜在的日本血吸虫病早期诊断的靶分子。 展开更多
关键词 日本血吸虫 P7抗原 期特异性分析 诊断
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旋毛虫新生幼虫期特异性T668 cDNA在大肠埃希菌中的表达及鉴定 被引量:1
2
作者 牛廷献 刘明远 +2 位作者 卢强 付宝权 Pascal Boireau 《中国寄生虫病防治杂志》 CSCD 2005年第2期111-113,共3页
目的对旋毛虫新生幼虫期特异性T668cDNA进行表达及鉴定,以获得基因工程抗原。方法应用PCR技术,从pBK CMV T668重组质粒中扩增到不含信号肽序列的T668cDNA片段,将目的基因克隆于原核表达载体pET28a(+),构建pETT668重组质粒,再将其转化到E... 目的对旋毛虫新生幼虫期特异性T668cDNA进行表达及鉴定,以获得基因工程抗原。方法应用PCR技术,从pBK CMV T668重组质粒中扩增到不含信号肽序列的T668cDNA片段,将目的基因克隆于原核表达载体pET28a(+),构建pETT668重组质粒,再将其转化到E.coli表达菌株DE3感受态细胞中,经IPTG诱导表达,以SDS PAGE鉴定表达产物。结果pETT668表达蛋白的分子质量单位为49ku,且随诱导时间的延长蛋白表达量逐渐增加,诱导5h时表达量达到高峰;薄层扫描结果显示,目的蛋白占菌体总蛋白的34.6%。Western blotting检测显示,表达蛋白可被感染旋毛虫家猪血清所识别。结论旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在大肠埃希菌中获得高效表达,且表达蛋白具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 旋毛虫 新生幼虫期特异性基因(T668 cDNA) 原核表达 鉴定
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寄生线虫期特异性发育相关基因的研究进展 被引量:1
3
作者 黄翠琴 邹丰才 +1 位作者 陈宁 朱兴全 《国际医学寄生虫病杂志》 CAS 2006年第1期48-52,共5页
寄生线虫严重危害着人类及畜禽的健康,给养殖业造成严重经济损失。从分子水平研究寄生线虫的生长、发育、繁殖等调控机制,可望找到防制寄生线虫病的新途径。该文从与寄生线虫发育调控相关的表面分子、入侵宿主时的触发基因、在宿主体内... 寄生线虫严重危害着人类及畜禽的健康,给养殖业造成严重经济损失。从分子水平研究寄生线虫的生长、发育、繁殖等调控机制,可望找到防制寄生线虫病的新途径。该文从与寄生线虫发育调控相关的表面分子、入侵宿主时的触发基因、在宿主体内与摄食相关的基因以及引起宿主免疫应答和逃避宿主免疫应答的基因等方面对寄生线虫期特异性发育相关基因的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 寄生线虫 期特异性基因 发育调控
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旋毛虫新生幼虫期特异性基因糖蛋白表达载体的构建 被引量:3
4
作者 徐晓立 刘明远 +1 位作者 卢强 任瑞文 《塔里木农垦大学学报》 2002年第3期1-4,共4页
根据旋毛虫新生幼虫 (NBL)期特异性全长cDNASSC1基因序列 ,PCR扩增目的基因 ,克隆入pMD18T后 ,根据其读码框架 ,克隆入表达载体pET2 8b ,构建其原核表达载体pET2 8b -SSC1。分别用SalI和XhoI、SmaI和HindIII双酶切 ;XbaI单酶切鉴定重组... 根据旋毛虫新生幼虫 (NBL)期特异性全长cDNASSC1基因序列 ,PCR扩增目的基因 ,克隆入pMD18T后 ,根据其读码框架 ,克隆入表达载体pET2 8b ,构建其原核表达载体pET2 8b -SSC1。分别用SalI和XhoI、SmaI和HindIII双酶切 ;XbaI单酶切鉴定重组子 ,结果均与预期相符 ,进一步测序结果也表明重组载体读码框架正确 。 展开更多
关键词 糖蛋白表达载体 旋毛虫新生幼虫 期特异性基因 旋毛虫病
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卫氏并殖吸虫期特异性抗原的鉴定
5
作者 章子豪 沈一平 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 1994年第4期509-514,共6页
为了建立检测卫氏并殖吸虫抗原的血清学诊断方法,我们制备了针对卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫的单克隆抗体,部分鉴定了为单克隆抗体所识别的抗原表位,其中,囊蚴期特异性抗原表位对高碘酸敏感而对蛋白酶具有抵抗力,系碳水化会物;反之,... 为了建立检测卫氏并殖吸虫抗原的血清学诊断方法,我们制备了针对卫氏并殖吸虫囊蚴和成虫的单克隆抗体,部分鉴定了为单克隆抗体所识别的抗原表位,其中,囊蚴期特异性抗原表位对高碘酸敏感而对蛋白酶具有抵抗力,系碳水化会物;反之,成虫期特异性抗原表位对高碘酸具有抵抗力而对蛋白酶敏感,系多肽。应用Dot-ELISA,以并殖吸虫的期特异性单克隆抗体能够检测人血清中0.3~75ng/ml相应的并殖吸虫抗原。 展开更多
关键词 卫氏并殖吸虫 期特异性抗原 表位 单克隆抗体
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旋毛虫期特异性基因的筛选与鉴定
6
作者 姚春雨 汪明 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第10期68-70,共3页
对旋毛虫新生幼虫期特异性基因进行筛选与鉴定,结果表明:对新生幼虫cDNA文库进行核酸杂交筛选,获得7个阳性克隆,其大小在1.4 kb左右;用放射性同位素α-32P标记cDNA探针后,与旋毛虫成虫、肌幼虫、新生幼虫、成虫/新生幼虫cDNA文库质粒DN... 对旋毛虫新生幼虫期特异性基因进行筛选与鉴定,结果表明:对新生幼虫cDNA文库进行核酸杂交筛选,获得7个阳性克隆,其大小在1.4 kb左右;用放射性同位素α-32P标记cDNA探针后,与旋毛虫成虫、肌幼虫、新生幼虫、成虫/新生幼虫cDNA文库质粒DNA进行Southern印迹杂交,结果与成虫/新生幼虫、新生幼虫cDNA文库质粒DNA有杂交而与成虫、肌幼虫cDNA文库质粒DNA不杂交,因此该探针是新生幼虫期所特有的cDNA片段。 展开更多
关键词 旋毛虫 期特异性基因 筛选 鉴定
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日本血吸虫肌球蛋白调节轻链的原核克隆表达及虫期转录特异性
7
作者 钱门宝 徐斌 +3 位作者 孔娟 鞠川 冯正 胡薇 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期17-20,共4页
目的在原核系统中克隆表达日本血吸虫肌球蛋白调节轻链(SjMRLC)并分析其基因的虫期转录特异性。方法根据SjMRLC的核苷酸序列(GenBank登录号为AY815219)设计特异性引物,PCR扩增目的基因,并克隆入原核表达载体pGEX4T-3;转至大肠埃希菌BL21... 目的在原核系统中克隆表达日本血吸虫肌球蛋白调节轻链(SjMRLC)并分析其基因的虫期转录特异性。方法根据SjMRLC的核苷酸序列(GenBank登录号为AY815219)设计特异性引物,PCR扩增目的基因,并克隆入原核表达载体pGEX4T-3;转至大肠埃希菌BL21株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达;蛋白质印迹分析(Western blotting)鉴定表达产物;提取日本血吸虫各虫期总RNA,反转录成cDNA,PCR扩增分析SjMRLC基因的虫期转录特异性。结果构建pGEX 4T-3/SjMRLC重组质粒,测序表明插入的外源基因片段正确,诱导表达获得带有GST标签的可溶性蛋白(Mr49000);虫期转录特异性分析显示该基因在日本血吸虫各个虫期均有转录,且水平一致。结论成功获得可溶性的带有GST标签的SjMRLC;SjMRLC是管家基因。 展开更多
关键词 日本血吸虫 肌球蛋白调节轻链 克隆 表达 转录异性
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旋毛虫新生幼虫cDNA文库构建及其特异性基因的筛选与鉴定
8
作者 姚春雨 汪明 孙国权 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第8期5-7,共3页
构建旋毛虫新生幼虫cDNA文库并对旋毛虫新生幼虫期特异性基因进行筛选与鉴定,筛选出期特异性的基因片段。用λZAPⅡ Express载体成功地构建了旋毛虫新生幼虫的cDNA文库,并用放射性同位素α-33P标记cDNA探针对筛选出的阳性克隆进行鉴... 构建旋毛虫新生幼虫cDNA文库并对旋毛虫新生幼虫期特异性基因进行筛选与鉴定,筛选出期特异性的基因片段。用λZAPⅡ Express载体成功地构建了旋毛虫新生幼虫的cDNA文库,并用放射性同位素α-33P标记cDNA探针对筛选出的阳性克隆进行鉴定。所构建的cDNA文库容量为1.92×10^6,重组效率为98.6%,所有的克隆片段都在0.5~2.0kb之间,筛选获得7个阳性克隆,其大小在1.4kb左右;用放射性同位素α-32P标记cDNA探针后,与旋毛虫成虫、肌幼虫、新生幼虫及成虫/新生幼虫cDNA文库质粒DNA进行Southern印迹杂交,结果与新生幼虫和成虫、新生幼虫cDNA文库质粒DNA有杂交而与成虫、肌幼虫cDNA文库质粒DNA不杂交。该基因是新生幼虫期所特有的cDNA片段。 展开更多
关键词 旋毛虫 CDNA文库 期特异性基因 筛选 鉴定
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四种药物对鼠疟红内期不同发育阶段的影响
9
作者 陈晓红 胡友梅 《四川生理科学杂志》 1991年第3期131-132,共2页
近年来人们日益重视药物抗疟作用的期特异性研究,以帮助探明药物作用机制。本实验用[8-~3H]腺苷参入观察硝喹(NQ)、乙胺嘧啶(Pyr)、甲硝唑(Met)、奋乃静(Per)对红内期早期疟原虫和晚期疟原虫的影响,并用氯喹(CQ)作对照。 1.早、晚期原... 近年来人们日益重视药物抗疟作用的期特异性研究,以帮助探明药物作用机制。本实验用[8-~3H]腺苷参入观察硝喹(NQ)、乙胺嘧啶(Pyr)、甲硝唑(Met)、奋乃静(Per)对红内期早期疟原虫和晚期疟原虫的影响,并用氯喹(CQ)作对照。 1.早、晚期原虫的分离:内径1.1cm的试管内加19%泛影葡胺(d=1.109) 展开更多
关键词 抗疟作用 红内 药物作用机制 硝喹 期特异性 奋乃静 乙胺嘧啶 发育阶段 原虫感染 二氢叶酸还原酶
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旋毛虫新生幼虫差减cDNA文库的构建及其初步筛选 被引量:14
10
作者 刘明远 黎诚耀 +6 位作者 吴秀萍 JFFabien 付宝权 CTrap 卢强 张西臣 PBoireau 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期355-358,共4页
利用差减杂交 (减法杂交 ,subtractive hybridization)技术 ,以旋毛虫新生幼虫 ( newborn larvae,NBL)的 c DNA作为试验方 ( tester) ,以肌幼虫 +成虫的 c DNA作为驱动方 ( driver) ,制备新生幼虫差减 c DNA;利用 T载体构建 NBL差减 c ... 利用差减杂交 (减法杂交 ,subtractive hybridization)技术 ,以旋毛虫新生幼虫 ( newborn larvae,NBL)的 c DNA作为试验方 ( tester) ,以肌幼虫 +成虫的 c DNA作为驱动方 ( driver) ,制备新生幼虫差减 c DNA;利用 T载体构建 NBL差减 c DNA文库 ,获克隆株 90个。以试验方的差减 c DNA第 2次 PCR产物 +未差减c DNA为试验方探针 ,以驱动方的差减 c DNA第 2次 PCR产物 +未差减 c DNA为驱动方探针 ,在 NBL差减c DNA文库中初筛 NBL的期特异性克隆 ,获初筛克隆 2 4个。这些初筛期特异性克隆进一步用 Southern blot确认鉴定 ,获真阳性期特异性克隆 2个 ( NBL SSC1 ,NBL SSC2 )。DNASIS以及 Blaster的分析结果显示 ,这2个克隆为旋毛虫的 2个新基因 ,其中 NBL SSC1编码糖蛋白 ,NBL SSC2编码丝氨酸蛋白酶。本试验为旋毛虫期特异性基因全长序列的调取、分析。 展开更多
关键词 旋毛虫 新生幼虫 期特异性基因 差减文库 CDNA文库
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日本血吸虫硫氧还蛋白-1的克隆、表达和功能分析 被引量:4
11
作者 刘建 徐斌 +3 位作者 张晓 刘璐 胡薇 王小宁 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期335-340,共6页
目的克隆、表达日本血吸虫硫氧还蛋白-1(SjTrx-1)编码基因,测定重组SjTrx-1蛋白的酶催化活性,分析SjTrx-1基因在血吸虫不同发育阶段的转录本差异,观察其在日本血吸虫成虫体内的组织分布情况。方法从日本血吸虫cDNA文库中挑选SjTrx-1的... 目的克隆、表达日本血吸虫硫氧还蛋白-1(SjTrx-1)编码基因,测定重组SjTrx-1蛋白的酶催化活性,分析SjTrx-1基因在血吸虫不同发育阶段的转录本差异,观察其在日本血吸虫成虫体内的组织分布情况。方法从日本血吸虫cDNA文库中挑选SjTrx-1的基因序列,应用PCR技术对目的片段进行体外扩增,并克隆入原核表达载体pET28a,重组质粒转化E.coli BL21(DE3)细胞,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,二硫苏糖醇(DTT)/胰岛素还原法测定重组SjTrx-1蛋白的酶催化活性。纯化的重组SjTrx-1蛋白免疫新西兰白兔,以制备的免疫兔血清作为抗体,应用免疫荧光定位技术检测SjTrx-1在日本血吸虫成虫体内的分布情况。制备日本血吸虫各虫期的总RNA样品,利用RT-PCR方法扩增目的片段,分析SjTrx-1基因在各发育阶段的转录本丰度。结果构建了重组表达载体SjTrx-1/pET28a,在E.coli中实现了重组SjTrx-1蛋白的可溶表达,其相对分子质量(Mr)约为38 000,与预测的融合蛋白大小相符。经组氨酸标签亲和层析法获得纯化重组蛋白SjTrx-1,并测定了其体外的酶催化活性。虫期转录特异性分析显示,该基因在各个虫期均存在转录,其中胞蚴、童虫和成虫阶段的丰度较高,毛蚴和尾蚴中含量相对较低。荧光定位结果显示,SjTrx-1蛋白在虫体内分布广泛,且无组织特异性。结论 SjTrx-1在日本血吸虫虫体内分布广泛,在胞蚴、童虫和成虫阶段的丰度较高。 展开更多
关键词 日本血吸虫 硫氧还蛋白-1 期特异性 免疫定位 抗氧化防御
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以重组蛋白为抗原的ELISA法检测旋毛虫抗体 被引量:2
12
作者 牛廷献 潘菲菲 +3 位作者 刘明远 卢强 付宝权 Pascal Boireau 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期143-145,共3页
目的寻求特异性强、敏感性高的旋毛虫病诊断抗原。方法以旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在E.coli高效表达的重组蛋白为抗原,分别以兔、猪和健康者血清及旋毛虫病阳性血清为一抗,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG、山羊抗猪IgG... 目的寻求特异性强、敏感性高的旋毛虫病诊断抗原。方法以旋毛虫新生幼虫期特异性T668基因在E.coli高效表达的重组蛋白为抗原,分别以兔、猪和健康者血清及旋毛虫病阳性血清为一抗,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗兔IgG、山羊抗猪IgG和山羊抗人IgG为二抗,建立检测旋毛虫抗体的间接ELISA方法,并以旋毛虫肌幼虫排泄-分泌(ES)抗原作为检测对照。结果以T668重组蛋白为抗原,对兔、猪和人旋毛虫病血清进行检测,阳性检出率为100%,且敏感性高(0.016μg/孔),与ES抗原检测结果完全一致。结论T668重组抗原有望替代ES抗原检测旋毛虫抗体。 展开更多
关键词 旋毛虫 重组蛋白 新生幼虫期特异性基因 间接ELISA
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旋毛虫丝氨酸蛋白酶基因的结构与功能分析 被引量:1
13
作者 徐晓立 任瑞文 +1 位作者 卢强 刘明远 《生物技术》 CAS CSCD 2003年第1期2-4,共3页
目的 :运用生物信息学原理 ,对由旋毛虫新生幼虫 (NBL)差减文库调取的新生幼虫期特异性基因进行分析。方法 :通过对BLASTn核酸数据库及BLASTp蛋白数据库的相似性检索 ,登陆PROSITE数据库进行蛋白位点和序列模式分析 ,并采用AN THEPROT ... 目的 :运用生物信息学原理 ,对由旋毛虫新生幼虫 (NBL)差减文库调取的新生幼虫期特异性基因进行分析。方法 :通过对BLASTn核酸数据库及BLASTp蛋白数据库的相似性检索 ,登陆PROSITE数据库进行蛋白位点和序列模式分析 ,并采用AN THEPROT 4 3软件包对其理化特性进行分析。结果 :相似性检索及序列模式分析显示 ,该基因为胰蛋白酶家族丝氨酸蛋白酶的编码基因 ,并对其编码蛋白的理化特性 ,疏水性、抗原性、信号肽及其二级结构进行了预测。登陆SWISS -MODEL自动蛋白质同源模建服务器 ,搜索、优化后预测了其 3D结构模型。结论 :该期特异性基因为旋毛虫新生幼虫胰蛋白酶家族丝氨酸蛋白酶的编码基因。 展开更多
关键词 功能分析 旋毛虫新生幼虫 期特异性基因 疏水性 蛋白结构预测
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细粒棘球蚴原头节虫体和排泄分泌抗原抗体系统检测犬粪抗原的比较研究 被引量:6
14
作者 焦伟 柴君杰 +2 位作者 伊斯拉音 付承 瞿群 《地方病通报》 2001年第1期1-5,共5页
用细粒棘球蚴原头节虫体及排泄分泌抗原—抗体系统进行交叉酶联免疫吸附试验的实验结果显示 :成虫虫体抗原和原头节虫体抗原呈现交叉反应 ,表明这两个发育阶段的虫体抗原具有主要的共同抗原组分 ;原头节排泄分泌抗原的免疫血清 Ig G与... 用细粒棘球蚴原头节虫体及排泄分泌抗原—抗体系统进行交叉酶联免疫吸附试验的实验结果显示 :成虫虫体抗原和原头节虫体抗原呈现交叉反应 ,表明这两个发育阶段的虫体抗原具有主要的共同抗原组分 ;原头节排泄分泌抗原的免疫血清 Ig G与成虫虫体抗原之间交叉滴度很低 ,但与原头节虫体抗原之间存在完全的交叉反应 ,因而提示原头节排泄分泌抗原是原头节的期特异性抗原 ,与其相应抗体具有较高的亲合力。检测犬粪标本的结果提示感染细粒棘球绦虫的犬粪抗原是一种广谱抗原。两种抗原 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 原头节 虫体抗原 排泄分泌抗原 期特异性抗原 家犬
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抗恶性肿瘤药的理论与实际
15
作者 詹丽芬 蔡际群 赫梅生 《中国临床医生杂志》 1989年第12期56-57,共2页
学习本类药应掌握的重点首先是临床常用的抗肿瘤药有哪些,都属于哪些类,主要临床应用(治疗哪些恶性肿瘤)是什么?其次应了解这类药的共有不良反应;最后需知道细胞增殖动力学理论指导下的合理用药原则。周期特异性药(CCSA)只影响增殖周期... 学习本类药应掌握的重点首先是临床常用的抗肿瘤药有哪些,都属于哪些类,主要临床应用(治疗哪些恶性肿瘤)是什么?其次应了解这类药的共有不良反应;最后需知道细胞增殖动力学理论指导下的合理用药原则。周期特异性药(CCSA)只影响增殖周期中的细胞,对静止期的细胞无抑制作用,又可分为两类:①作用于S期的CCSA,如化学结构与叶酸或DNA前体物质很类似,因而“以假乱真”干扰DNA合成的药物有甲氨喋呤、6巯基嘌呤、5氟尿嘧啶等,还有DNA多聚酶抑制剂阿糖胞苷。 展开更多
关键词 抗恶性肿瘤药 细胞增殖动力学 期特异性 增殖周 抗肿瘤药 静止 多聚酶 类药 尿嘧啶 DNA
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VEGF和Ki-67在复发性小脑血管母细胞瘤中的临床意义
16
作者 滕宏伟 薛新潮 《交通医学》 2012年第1期36-38,共3页
目的:探讨VEGF和Ki-67在复发的小脑血管母细胞瘤中表达的意义。方法:采用免疫组化(SP法)检测VEGF和Ki-67在18例复发的小脑血管母细胞瘤组织中和43例未复发的小脑血管母细胞瘤中的表达,采用SPSS13.0统计软件分析其表达的差异。结果:VEGF... 目的:探讨VEGF和Ki-67在复发的小脑血管母细胞瘤中表达的意义。方法:采用免疫组化(SP法)检测VEGF和Ki-67在18例复发的小脑血管母细胞瘤组织中和43例未复发的小脑血管母细胞瘤中的表达,采用SPSS13.0统计软件分析其表达的差异。结果:VEGF、Ki-67在复发组的阳性表达率分别为88.9%(16/18)和83.1%(15/18);VEGF、Ki-67在未复发组的阳性表达率为74.4%(32/43)和62.7%(27/43),两者之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VEGF促使肿瘤血管形成,对病变的复发产生影响;联合检测VGFR和Ki-67,对小脑血管母细胞瘤的预后判断有一定帮助。 展开更多
关键词 复发性小脑血管母细胞瘤 血管通透性因子 细胞增殖期特异性表达的核抗原
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日本血吸虫内皮分化相关因子-1基因的克隆、表达及鉴定 被引量:1
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作者 邓王平 冯正 +2 位作者 徐斌 孔娟 胡薇 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期180-184,共5页
目的克隆、表达日本血吸虫内皮分化相关因子(endothelial differentiation-related factor)-1编码基因(SjEDF-1),并研究该基因在日本血吸虫不同发育阶段的特异性表达情况。方法制备日本血吸虫卵、尾蚴、童虫和成虫等各发育阶段的总RNA,... 目的克隆、表达日本血吸虫内皮分化相关因子(endothelial differentiation-related factor)-1编码基因(SjEDF-1),并研究该基因在日本血吸虫不同发育阶段的特异性表达情况。方法制备日本血吸虫卵、尾蚴、童虫和成虫等各发育阶段的总RNA,采用RT-PCR方法 ,以管家基因SjActin为内参,根据SjEDF-1基因全长编码序列(GenBank登录号为AY336498)的开放阅读框设计引物进行RT-PCR扩增,分析日本血吸虫各发育阶段SjEDF-1基因mRNA表达情况。将SjEDF-1基因亚克隆至载体pET28a,转化至大肠埃希菌BL21(DE3),异丙基-β-D硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。用组氨酸标签亲和层析法纯化表达产物,以纯化的重组SjEDF-1蛋白免疫新西兰白兔制备免疫兔血清。蛋白质印迹(Western blotting)分析其免疫原性及该蛋白在日本血吸虫各发育阶段的表达差异。结果 RT-PCR结果显示,除尾蚴外,在虫卵、童虫、雄虫和雌虫期均扩增出约405bp的片段。含重组质粒SjEDF-1/pET-28a的转化子细菌,经IPTG诱导,获得以不可溶的包涵体形式存在的重组蛋白,其相对分子质量(Mr)为20000,与预测的融合蛋白大小相符。Western blotting分析结果显示,纯化后的重组蛋白SjEDF-1可被日本血吸虫感染兔血清识别,在血吸虫童虫和成虫阶段检测到目的蛋白的表达。结论重组蛋白SjEDF-1具有较强的免疫原性,在血吸虫童虫和成虫期检测到该蛋白特异表达。 展开更多
关键词 日本血吸虫 内皮分化相关因子-1 期特异性 免疫原性
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日本血吸虫核糖体蛋白SjRibosom al_L18a及其B细胞表位的筛选和评价
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作者 魏刚刚 徐斌 +1 位作者 鞠川 胡薇 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期270-274,共5页
目的筛选获得日本血吸虫(Schistosoma japonicum)核糖体蛋白(SjRibosomal_L18a)编码基因,预测其B细胞表位。克隆、表达重组蛋白SjRibosomal_L18a,并比较分析其与合成的B细胞表位的潜在诊断价值。方法利用B细胞表位预测软件筛选日本血吸... 目的筛选获得日本血吸虫(Schistosoma japonicum)核糖体蛋白(SjRibosomal_L18a)编码基因,预测其B细胞表位。克隆、表达重组蛋白SjRibosomal_L18a,并比较分析其与合成的B细胞表位的潜在诊断价值。方法利用B细胞表位预测软件筛选日本血吸虫蛋白质序列,获取函数打分值较高且抗原表位片段多的免疫原性蛋白,合成B细胞表位片段。生物信息学方法分析免疫原性蛋白基因及其编码蛋白的相对分子质量(M r)、等电点、亲水性、信号肽、跨膜区和功能结构域等理化性质。制备日本血吸虫各虫期阶段总RNA,逆转录PCR(RT-PCR)扩增目的基因,分析各虫期转录本丰度。将扩增产物克隆至原核表达载体pET-28a中,重组质粒转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,组氨酸标记亲和层析法纯化重组蛋白。ELISA法比较分析重组蛋白和合成的B细胞表位的潜在诊断价值。结果预测软件筛选出免疫原性核糖体蛋白SjRibosomal_L18a以及2个B细胞表位(P1和P2)。SjRibosomal_L18a基因开放阅读框(ORF)由531个碱基组成,编码176个氨基酸,不含跨膜区和信号肽,为M r20 741,等电点为11.12。RT-PCR结果显示,各虫期均检测到SjRibosomal_L18a的转录本,且转录水平均较高。成功构建重组表达质粒SjRibosomal_L18a/pET-28a,诱导表达获得包涵体形式的重组蛋白,约为M r26 069。ELISA检测结果显示,重组蛋白、P1和P2检测15份慢性血吸虫病患者血清和15份健康人血清的敏感性和特异性分别为53.3%(8/15)和100%(15/15)、60%(9/15)和100%(15/15)、73.3%(11/15)和100%(15/15)。结论获得重组蛋白SjRibosomal_L18a及其免疫原性较高的表位片段P1、P2,P1和P2用于血清诊断的敏感性均高于重组蛋白。 展开更多
关键词 日本血吸虫 B细胞表位 核糖体蛋白 期特异性
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Effect of High Temperature on Outcrossing Characteristics at the Fertility Sensitive Period of Photo-thermo Sensitive Genic Male Sterile (PTGMS) Rice Lines
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作者 王明 刘烨 +6 位作者 张海清 刘爱民 肖层林 唐荣 杨永标 蒋凌云 李雪雪 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2017年第11期2019-2025,共7页
Four sterile lines (Peiai64S, Y58S, Guangzhan 63-2S and H638S) and the restoring line R527 were used as materials. Five temperature gradients (24, 27, 30, 33 and 36 ℃ in artificial climate chamber) and the natura... Four sterile lines (Peiai64S, Y58S, Guangzhan 63-2S and H638S) and the restoring line R527 were used as materials. Five temperature gradients (24, 27, 30, 33 and 36 ℃ in artificial climate chamber) and the natural temperature (as control) were treated to the four sterile lines for 6 d in the fertility sensitive period of heading to flowering stage, respectively, to study the effects of temperature on physiological biochemical characteristics of young panicles and outcrossing characteristics. The results showed that the percentages of exerted stigma of Peiai 64S and Y58S were the highest at 27 ℃, which were 86.81% and 86.06%, respectively, while the percentages of exerted stigma of Guangzhan 63-2S and H638S were the highest at 24 ℃, which were 76.24% and 81.76%, respectively; the stigma viability of Peiai 64S, Y58S, Guangzhan 63-2S and H638S were the best at 24 ℃, which were 1.96, 2.12, 1.74 and 1.94, respectively; the outcrossing rates of Peiai 64S, Guangzhan 63-2S and H638S were the highest at 24 ℃, which were 58.87%, 54.22% and 50.50%, respectively, while the outcrossing rate of Y58S was the highest at 27 ℃, which was 58.96%; and the contents of peroxidase (POD) of the four sterile lines increased significantly at 33 ℃ compared with the control, while the contents of malondialdehyde (MDA) and proline increased significantly at 36 ℃ compared with the control. There were differences in temperature sensitivity between the male sterile lines, and the 24 ℃ treatment during the sensitive period was the best for the fertility sensitive period of Peiai 64S, while 27 ℃ was the best temperature for Y58S, Gangzhan 63-2S and H638S. 展开更多
关键词 RICE Photo-thermo sensitive male sterile line Fertility sensitive period Temperature Outcrossing characteristics Physiological and biochemical characteristics
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Seed Morphology and Seedling Variation of Four Ornamental Lupin Pedigrees
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作者 高柱 王小玲 +3 位作者 刘腾云 高松金 喻琼 余发新 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2015年第1期57-62,67,共7页
[Objective] This study was conducted to reveal seed characteristics, variation and their effects on seedling growth of ornamental lupins. [Method] The phenotypic characteristics and germination rate of the seeds of fo... [Objective] This study was conducted to reveal seed characteristics, variation and their effects on seedling growth of ornamental lupins. [Method] The phenotypic characteristics and germination rate of the seeds of four excellent lupin pedigrees were measured, and then their correlations with seeding growth were analyzed. [Result] There were abundant variations among the four ornamental lupin pedigrees. Pink seeds had the largest volume and red seeds had the largest 1 000seed weight. The variation coefficients for the seed morphological traits among the four pedigrees ranged from 2.97% to 14.34%. Seed specific weight and 1 000-seed weight could be used as important indicators for selection in breeding because of their higher variability. Seed weight variation of ornamental lupin was mainly depen- dent on seed width variation. There was small variation in seed length. The seeds of the four ornamental lupin pedigrees started to germinate one day after sowing, and the germination period was 5 d. Germination rate coefficient and germination index of pink and red seeds were higher than those of blue seeds, but blue seeds had the largest germination rate. 1 000-seed weight shared significantly positive correlations with seed germination rate, germination potential and seedling retention rate. Round and large seeds had some advantages in germination. Full seeds had higher germination rate and speed, and seedling retention rate. There was a significant relationship between seed length-width ratio and the number of leaflets of seedlings. [Conclusion] The results provided references for the evaluation of seed phenotypic diversity and breeding research of ornamental lupins. 展开更多
关键词 Ornamental lupin PEDIGREE Seed morphology Seedling variation Correlation analysis
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