忍冬木层孔菌多糖的提取工艺优化及其体外抗氧化活性研究

忍冬木层孔菌(Phellinus lonicerinus(Bond.) Bond.et Sing)为湖北等地习用的桑黄品种,也是土家族常用药,多糖是其主要活性成分。为了研究忍冬木层孔菌子实体多糖(Phellinus lonicerinus polysaccharide, PLP)的提取工艺及其体外抗氧化活性,采用冷凝回流提取法在单因素实验结果的基础上,进行Box-Behnken响应面分析,确定PLP的最佳提取工艺,并通过测定忍冬木层孔菌多糖(PLP30、PLP60、PLP85、PLPA1和PLPA2)的还原能力、对DPPH、ABTS、羟基自由基的清除能力、对酪氨酸酶活性的抑制能力。结果显示PLP最佳提取工艺的参数为:料液比1∶20 g/mL、提取时间120 min、提取温度100℃,此条件下PLP提取率为(3.16±0.05)%;五种多糖对DPPH、ABTS和羟基自由基均具有较强的清除作用,且具有较强的还原力,其对ABTS自由基清除作用和还原力均与浓度呈量效关系。表明忍冬木层孔菌子实体多糖具有良好的体外抗氧化和一定的酪氨酸酶活性抑制能力。

忍冬木层孔菌醇提物对大鼠肝纤维化的影响

目的:观察忍冬木层孔菌醇提物对四氯化碳(CCl4)所致大鼠肝纤维化的影响。方法:腹腔注射2 mL/kg CCl4橄榄油溶液制备大鼠肝纤维化模型。首次注射后分别灌胃给药相当于忍冬木层孔菌生药量1.0、0.5 g/kg的乙醇提取物,1次/d,共8 w。测定血清AST、ALT、透明质酸及肝组织中羟脯氨酸水平;切片进行病理组织观察。结果:与模型组比较,忍冬木层孔菌能降低血清AST、ALT、透明质酸和肝组织中羟脯氨酸水平;病理学切片显示忍冬木层孔菌醇提物能明显减轻CCl4引起的大鼠肝损伤及纤维化。结论:忍冬木层孔菌醇提物对CCl4致大鼠肝纤维化有防治作用,作用机制可能与其降低透明质酸和羟脯氨酸含量有关。

忍冬木层孔菌质量标准研究

目的:制定忍冬木层孔菌药材质量标准,为忍冬木层孔菌的合理开发利用提供科学依据。方法:采用性状鉴别、薄层鉴别,麦角甾醇过氧化物、3,4-二羟基苄叉丙酮为对照品,用HPLC法进行含量测定。结果:描述了忍冬木层孔菌性状、显微特征。忍冬木层孔菌水分平均含量为10.0%,总灰分平均含量为3.6%,酸不溶性灰分平均含量为0.2%,醇溶性浸出物平均含量为11.1%。忍冬木层孔菌药材薄层色谱中,在对照品相同位置显相同颜色斑点。忍冬木层孔菌子实体中麦角甾醇过氧化物的平均含量为0.3%;3,4-二羟基苄叉丙酮的平均含量为0.08%。结论:建立了忍冬木层孔菌药材质量标准,其分析方法简便、准确、可靠。

忍冬木层孔菌醇提物对肝纤维化大鼠肝星状细胞的影响

目的:研究忍冬木层孔菌醇提物抗肝纤维化的机制。方法:用2 m L/kg CCl4橄榄油溶液对大鼠腹腔注射制备肝纤维化模型。第1次注射后,给药组分别灌胃剂量相当于忍冬木层孔菌生药量1、0.5 g/kg的乙醇提取物,1次/d,共给药8 w。给药结束后,测定各组大鼠血清转化生长因子-β1(TGF-β1)、肝组织的总抗氧化能力(TAOC)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;免疫组化测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及基质金属蛋白酶-1(MMP-1)和基质金属蛋白酶抑制因子-1(TIMP-1)的表达。结果:与模型组比较,忍冬木层孔菌醇提物能降低模型大鼠血清中TGF-β1含量;升高肝组织T-SOD的活性及T-AOC水平,降低MDA含量;下调肝组织中α-SMA的表达,上调MMP-1的表达并下调TIMP-1的表达。结论:忍冬木层孔菌具有良好的抗氧化能力,具有防治肝纤维化的应用前景。其机制可能与抑制由氧化应激引发的肝星状细胞激活,并降低TGF-β1等激活肝星状细胞的细胞因子,上调促进胶原降解的MMP-1表达有关。

忍冬木层孔菌化学成分研究

目的:研究忍冬木层孔菌的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、Sephadex LH-20凝胶柱色谱及反相柱色谱进行分离纯化,并运用波谱方法对化合物进行结构鉴定。结果:从忍冬木层孔菌中共分离得到了6个化合物,分别鉴定为:麦角甾醇过氧化物(1)、麦角甾醇(2)、香草醛(3)、3,4-二羟基苄叉丙酮(4)、β-谷甾醇(5)和正二十二烷酸(6)。结论:以上化合物均为首次从忍冬木层孔菌中分离得到,其中,化合物4为新天然产物。

7种木层孔菌属真菌的培养特性

描述了7种木层孔菌属 (Phellinus) 真菌的培养特性。它们是淡黄木层孔菌（P. gilvus），火木层孔菌（P. igniarius），裂蹄木层孔菌（P. linteus），松木层孔菌（P. pini）,冷杉木层孔菌(P. pini var.abietis)，苹果木层孔菌 (P. pomaceus) 和稀硬木层孔菌（P.robustus）。

火木层孔菌桑黄醇提物的HPLC指纹图谱研究

目的：建立10批不同产地火木层孔菌桑黄醇提物（EEPI）的HPLC指纹图谱,并对其质量进行评价。方法：采用SHISEIDO CAPCELL PAK C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,以0.2%磷酸水溶液-甲醇进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长为395 nm。以Inoscavin A为参比峰建立EEPI特征吸收峰共有模式,并通过峰重叠率计算、相似度评价系统、聚类分析等对其相似度进行评价。结果：在选定的色谱条件下,得到10批不同产地火木层孔菌桑黄指纹图谱,标定了9个共有峰,并建立了火木层孔菌桑黄的指纹图谱共有模式,相似度在0.652~0.995之间,聚类分析结果将10批火木层孔菌桑黄分为3个大类。结论：此方法简单、准确、重复性好,峰分离度较好,为有效地评价火木层孔菌桑黄的综合质量提供了参考依据。

火木层孔菌菌丝生长最适条件研究

对火木层菌丝培养的最适碳源、氮源、C/N,pH、温度等进行了研究.结果表明,火木层孔菌菌丝生长的最适碳源,氮源,C/N,pH值,温度分别是是果糖,酵母粉,20∶1,6.9,30℃.此条件下,菌丝生长旺盛且不易老化.

中国锈革孔菌科一新记录种——忍冬木层孔菌

忍冬木层孔菌PhellinuslonicericolaParmasto首次报道于我国东北 ,为中国多孔菌一新记录种。根据中国的材料和模式产地的标本对该菌进行了详细描述 。

火木层孔菌的脂溶性成分

采用硅胶柱层析法进行分离纯化,从火木层孔菌(Phellinus igniarius)子实体的石油醚提取物和氯仿提取物中得到6种化合物。根据波谱数据,化合物1-6结构分别被鉴定为:9,12-十八烷二烯酸甲酯、3-酮-环菠萝蜜烷、麦角甾-4,6,8,22-四烯-3-酮、麦角甾醇过氧化物、麦角甾-7,22-二烯-3-酮和啤酒甾醇。其中3-酮-环菠萝蜜烷和麦角甾-7,22-二烯-3-酮为首次从火木层孔菌子实体中分离得到。

忍冬木层孔菌总酚通过调控肥大细胞抗四氯化碳所致大鼠肝纤维化

探讨忍冬木层孔菌总酚(Phellinus lonicerinus total phenolics,PLTP)调控肥大细胞(Mast Cell,MC)改善四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化的作用.将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、秋水仙碱组(0.2mg/kg)、PLTP低剂量组(250mg/kg)、PLTP高剂量组(500mg/kg),每组10只.除正常组注射橄榄油外,其余各组腹腔注射2mL/kg 50%CCl4橄榄油溶液,2次/w,共8w.首次注射后各给药组每天灌胃对应剂量的药物,正常组与模型组灌胃相应体积的生理盐水,1次/d,共8w.末次给药后禁食24h,取大鼠血和肝脏,检测血清中谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及透明质酸(haluronic acid,HA)、Ⅲ型前胶原(procollagen typeⅢ,PCⅢ)、Ⅳ型胶原(typeⅣcollagen,Ⅳ-C)的含量;免疫组化测定α-平滑肌肌动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)的表达量,同时切片观察肝脏组织学变化及肥大细胞的数量及脱颗粒变化.结果显示,与模型组比较,PLTP能降低大鼠血清AST、ALT及ALP的活性,降低血清中HA、PCⅢ、Ⅳ-C的含量;病理学检查结果表明PLTP能明显减轻CCl4引起的大鼠肝损伤及纤维化;甲苯胺蓝染色(TB)可见CCl4模型组大鼠肝脏血管周围及纤维间隔内大量正在脱颗粒和已经脱颗粒的充满蓝紫色颗粒的MC,MC数目较正常组明显升高,PLTP组MC数量明显减少.同时,免疫组织化学染色结果显示PLTP下调肝组织中α-SMA的表达.综上,PLTP对CCl4致大鼠肝纤维化有防治作用,其作用机制可能与减少MC的数量及其脱颗粒、下调肝组织中α-SMA的表达有关.

忍冬木层孔菌醇提物雌激素样作用研究

目的：研究忍冬木层孔菌醇提物的雌激素样作用,为寻找安全有效的雌激素替代药物提供依据。方法：采用细胞增殖实验评价忍冬木层孔菌醇提物的体外雌激素样作用和抗雌激素作用;检测忍冬木层孔菌提取物对雌性幼鼠、去势雌性大鼠血清中雌二醇（E2）、孕酮（P）含量及成年雌性大鼠子宫雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）表达,并考察其对成年雌性大鼠子宫、卵巢及乳腺组织病理学的影响。结果：细胞增殖实验显示,忍冬木层孔菌醇提物在5~50μg/m L时能刺激MCF-7细胞增殖,具有雌激素样作用;在10~100μg/m L时能降低E2诱导的MCF-7细胞增殖,具有抗雌激素作用。体内实验表明300 mg/kg忍冬木层孔菌醇提物能增加雌性幼鼠血清E2含量,促进初生雌性幼鼠子宫发育;忍冬木层孔菌醇提物240 mg/kg可增加去势雌鼠血清E2、P含量,改善因雌激素缺乏而导致的子宫萎缩。120 mg/kg忍冬木层孔菌醇提物可增加正常成年雌性大鼠血清P含量,120、240 mg/kg忍冬木层孔菌醇提物可以增加正常雌性成年大鼠血清E2含量并能调节成年雌性大鼠子宫ERα、ERβ表达。病理检查显示,忍冬木层孔菌醇提物对大鼠子宫、卵巢、乳腺等组织病理学无明显影响。结论：忍冬木层孔菌具有雌激素样作用,无明显不良反应,具有替代雌激素应用的前景。

忍冬木层孔菌液体培养物的化学成分研究

忍冬木层孔菌(Phellinus lonicerinus(Bond.)Bond.et Sing)为湖北等地习用的桑黄品种,也是土家族常用药。对忍冬木层孔菌液体培养物的化学成分及其体外抗肿瘤活性进行研究。通过硅胶柱色谱、SephadexLH-20柱色谱及半制备型HPLC等色谱分离技术从忍冬木层孔菌发酵液及菌丝体中分离得到10个化合物,经核磁共振,质谱等现代波谱学技术将它们的结构分别鉴定为环(L-缬-L-脯)二肽(1)、环(L-亮-L-脯)二肽(2)、环(L-异亮-L-脯)二肽(3)、环(L-丙-L-脯)二肽(4)、麦角甾醇(5)、麦角甾-7,22-二烯-3,6-二酮(6)、过氧麦角甾醇(7)、苯乙酸(8)、对羟基苯甲醛(9)和4-羟基苯乙酸(10)。除化合物5、6和7外,其余7个化合物均为首次从该真菌中分离得到。体外细胞毒活性显示化合物1~4对胃癌细胞株HGC-27和子宫内膜癌细胞株RL95-2有不同程度的抑制活性,其中化合物3抑制活性最强,对HGC-27和RL95-2的IC_(50)分别为6.69μM和12.81μM。

裂蹄木层孔菌多糖的提取工艺及抗氧化活性研究

以多糖提取率为检测指标,采用水提醇沉法提取裂蹄木层孔菌多糖。正交实验考察提取温度、提取时间和料液比对多糖提取率的影响。结果显示,提取温度和料液比对多糖提取率有显著性影响,提取时间对多糖提取率无显著性影响。最佳提取工艺为提取温度80℃、提取时间2 h、料液比1∶40(g/m L)。在此条件下,多糖平均提取率为3.20%。选用终体积分数70%的乙醇沉淀多糖12 h时,多糖得率最高。体外抗氧化活性实验结果显示,裂蹄木层孔菌多糖的总抗氧化能力、清除羟自由基和超氧阴离子自由基的能力在实验范围内随着多糖质量浓度的增加而增强。裂蹄木层孔菌多糖是一种具有抗氧化功能的药用真菌多糖。

裂蹄木层孔菌醋酸乙酯萃取物抗肿瘤活性初探

目的探讨裂蹄木层孔菌醋酸乙酯萃取物的体外抗肿瘤活性。方法采用磺酰罗丹明染色法(SRB法),对人肝癌细胞株BEL-7404、人肺癌细胞株H-1299、人胃癌细胞株SGC-7901、人肺腺癌细胞株A-549等4种常见的人恶性肿瘤细胞进行体外抗肿瘤实验。结果裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物对BEL-7404、H-1299、SGC-7901、A-549 4株肿瘤细胞都表现出比较明显的抑制效果,且抑制率随萃取物浓度的升高而增大,呈剂量效应关系;其半数抑制浓度(IC50)分别为26.05,41.26,34.47,60.34μg.ml-1。细胞周期实验显示BEL-7404细胞在萃取物的作用下,随着萃取物浓度的增大,G0/G1期细胞分布出现大幅度降低;S期细胞和G2/M期细胞分布出现不同程度的增加,且都与萃取物浓度呈正相关。当萃取物浓度为IC50时,G2/M期细胞分布显著增多,细胞出现G2/M期阻滞。结论裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物具有比较明显的体外抗肿瘤活性。

裂蹄木层孔菌发酵产物抑菌活性的研究

为了研究裂蹄木层孔菌发酵产物对植物病原菌的抑菌活性。采用菌丝生长速率法测定裂蹄木层孔菌不同发酵时间的产物对7种供试病原菌的抑制作用,将裂蹄木层孔菌的发酵产物进行不同的处理,分级纯化抑菌活性多糖,比较其抑菌活性。结果表明:裂蹄木层孔菌发酵产物对7种病原菌均有抑制作用;发酵时间为20天的裂蹄木层孔菌发酵产物对杨树烂皮病的抑制率最高;裂蹄木层孔菌发酵产物的主要抑菌活性物质存在于发酵上清液醇提物中;醇沉级别为30%(浓度为50mg/mL)醇提物中的多糖对病原菌的抑制率为供试醇沉级别中最高。说明裂蹄木层孔菌含有抑制病原菌的有效成分,具备成为新型生物农药的潜力。

火木层孔菌桑黄对MPP^+诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响

目的评价火木层孔菌桑黄的水提物对MPP^+诱导SH-SY5Y细胞凋亡的影响。方法采用PI染色分析细胞凋亡率,DAPI染色观察细胞核的形态变化,JC-1染色检测线粒体膜电位的变化,C-DCDHF-DA染色观察ROS生成的变化。结果 MPP^+诱导后SH-SY5Y细胞凋亡率明显升高,线粒体膜电位明显下降,ROS生成明显升高;火木层孔菌桑黄作用后能明显降低细胞凋亡率,其中20、10μg·mL^(-1)剂量组与MPP^+组比较具有显著性差异;其对细胞凋亡后细胞核的形态变化具有一定的改善作用;其可以提升线粒体膜电位,其中20、10、5、2.5μg·mL^(-1)剂量组与MPP^+组比较具有显著性差异;其对ROS生成具有明显的抑制作用,其中20、10、5μg·mL^(-1)剂量组与MPP^+组比较具有显著性差异。结论火木层孔菌桑黄水提物对MPP^+诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有明显的抑制作用。

木层孔菌属——国内新记录种——Phellinus wahlbergii(Fr.)Reid

本文报道了采自云南省屏边县大围山自然保护区的一种木层孔菌一瓦伯木层孔Phellinus wahlbergii(Fr.)Reid.文中描述了该种为国内新记录种的主要形态特征,并与易混淆的相近种一广布木层孔P.extensus(Lev.)Pat.作了比较。

裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用研究

目的:探讨裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物在体外的抗肝癌活性。方法:采用磺酰罗丹明染色法(SRB法),对人肝癌细胞SMMC-7721进行体外抗肿瘤实验。结果:裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物对人肝癌细胞SMMC-7721表现出比较明显的高浓度杀死和中低浓度抑制的效果,且抑制率随萃取物浓度的升高而增大,呈剂量效应关系;其半数抑制浓度(IC50)为21.5μg.mL-1。结论:裂蹄木层孔菌乙酸乙酯萃取物对人肝癌细胞SMMC-7721具有比较明显的抑制作用。

中国多孔菌—新记录种——薄菌肉木层孔菌

薄菌肉木层孔菌PhellinusacontextusRyvarden首次发现于湖南省 ,为中国多孔菌一新记录种。根据中国的材料对该菌进行了详细描述 。